李 婕

（彭州市人民醫(yī)院病理科，四川611930）

胸腹水液基細(xì)胞學(xué)剩余標(biāo)本制作細(xì)胞塊的不同方法探討

李 婕

（彭州市人民醫(yī)院病理科，四川611930）

目的探討胸腹水液基細(xì)胞學(xué)剩余標(biāo)本制作細(xì)胞塊的不同方法，優(yōu)化其程序。方法選擇110例胸腹水薄層液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)（TCT）檢測(cè)剩余標(biāo)本，根據(jù)細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)果將標(biāo)本分為A組和B組，每組55例。A組采用直接離心法處理后制作石蠟細(xì)胞塊，B組采用細(xì)胞塊試劑盒法處理后制作石蠟細(xì)胞塊，統(tǒng)計(jì)2種不同方法細(xì)胞切片惡性細(xì)胞的檢出率。結(jié)果110例胸腹水TCT檢測(cè)出惡性細(xì)胞率為32.73%（36/110），剩余標(biāo)本經(jīng)細(xì)胞塊法檢測(cè)出總惡性細(xì)胞檢出率為45.45%（50/110）；以直接離心法惡性細(xì)胞檢出率為38.18%（21/55），細(xì)胞塊試劑盒法惡性細(xì)胞檢出率為52.73%（29/55），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；細(xì)胞聚集度及細(xì)胞分布細(xì)胞塊試劑盒法優(yōu)于直接離心法。結(jié)論細(xì)胞塊試劑盒法與直接離心法比較，前者明顯可以提高胸腹水液基細(xì)胞學(xué)剩余標(biāo)本的惡性細(xì)胞檢出率，同時(shí)可用于免疫細(xì)胞化學(xué)的檢測(cè)。

胸腔積液； 腹水； 細(xì)胞學(xué)技術(shù)； 標(biāo)本； 標(biāo)本制備

胸腹水的細(xì)胞學(xué)檢查時(shí)病理科室日常檢查工作的其中之一，檢測(cè)時(shí)常常采用離心涂片后進(jìn)行HE染色后進(jìn)行鏡檢[1]。在常規(guī)涂片檢查中會(huì)存在著細(xì)胞的重疊，細(xì)胞的成分較少，因此會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的檢出率偏低，而常規(guī)涂片難以進(jìn)行細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色。傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)制片存在一定的缺陷，給細(xì)胞學(xué)診斷的成功率造成影響，本院采用了液基細(xì)胞學(xué)制片及細(xì)胞塊試劑盒制片聯(lián)合應(yīng)用，取得了一定的效果?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 110例胸腹水薄層液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)（thinprep cytologic test，TCT）的剩余標(biāo)本收集于2014年7月至2015年1月本院病理科室；95%乙醇溶液（購(gòu)于江蘇生物科技股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20140627）。臺(tái)式低速離心機(jī)（河北白洋淀安新縣離心機(jī)廠），Tissue-Tek VIP 6Jr 5784型脫水機(jī)器（Sakura Finetek Japan Co.Ltd），Tissue-TekTEC5石蠟包埋機(jī)器（Sakura Finetek Japan Co. Ltd），CBT（細(xì)胞塊包埋）機(jī)器（濟(jì)南器械醫(yī)療公司）。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 110例胸腹水TCT剩余標(biāo)本[其中CTC檢測(cè)出惡性細(xì)胞率為32.73%（36/110）]，根據(jù)細(xì)胞病理學(xué)的診斷結(jié)果，將剩余標(biāo)本分為A組和B組，每組55例。各組中A組和B組中TCT法檢出的惡性細(xì)胞數(shù)量分別為19例、17例。

1.2.2 制作方法

1.2.2.1 A組（直接離心法） TCT剩余標(biāo)本采用直接離心方法進(jìn)行，將剩余標(biāo)本采用微量加樣器移至離心管中，采用低速離心機(jī)離心3 min后，將上清液棄去后，將5倍體積的95%乙醇溶液沿著離心管壁緩緩加入，進(jìn)行3～5 min的凝固[2]，再次放置于低速離心機(jī)中，2 500 r/min，離心5 min，離心半徑為8.0 cm。進(jìn)行1～2 h的固定后采用擦鏡紙將離心管包好后放入包埋盒內(nèi)，處理方式同常規(guī)組織病理檢查標(biāo)本。

1.2.2.2 B組（細(xì)胞塊試劑盒法） 采用細(xì)胞塊試劑盒法進(jìn)行檢測(cè)，TCT剩余標(biāo)本通過(guò)微量移液器將標(biāo)本移入離心管中，放置于低速離心機(jī)中進(jìn)行離心，離心時(shí)間為3 min，機(jī)器靜置后將離心管中的上清液棄去后，加入細(xì)胞塊試劑A試劑，混合均勻后常溫靜置15 min后，放入低速離心機(jī)，2 500 r/min，進(jìn)行離心5 min，離心半徑為8.0 cm。離心機(jī)靜置后將離心管中的上清液再次棄去，將等量的B試劑液加入到離心管中，吹打均勻后，加入等量的C試劑液，用手指彈擊試管，直到離心管中析出細(xì)胞標(biāo)本的絮狀物質(zhì)，再次放入低速離心機(jī)中，2 500 r/min，進(jìn)行5 min離心（離心半徑為8.0 cm），再次將上清液棄去，采用擦鏡紙包好后放入包埋盒內(nèi)，其處理方式均同常規(guī)組織病理檢查標(biāo)本。

1.2.3 HE染色和免疫組織化學(xué)法染色 免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)于上?；蚩萍加邢薰?。2種細(xì)胞塊進(jìn)行常規(guī)的脫水、進(jìn)行石蠟包埋后，進(jìn)行連續(xù)切片，切片厚度為3.0～5.0 μm，進(jìn)行常規(guī)HE染色，免疫組織化學(xué)法染色采用En Vision Plus法，常規(guī)采用AE1/3、TTF-1和P53抗體[3]。

1.2.4 觀察指標(biāo) 2種方法制作細(xì)胞塊檢測(cè)結(jié)果比較由本院資深的病理醫(yī)師進(jìn)行切片的觀察、檢測(cè)，與TCT細(xì)胞學(xué)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，對(duì)有細(xì)胞及組織病理學(xué)檢查的病例對(duì)其免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，惡性細(xì)胞的檢出率比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

110例胸腹水TCT檢測(cè)出惡性細(xì)胞率為32.73%（36/110），剩余標(biāo)本經(jīng)細(xì)胞塊法檢測(cè)出總惡性細(xì)胞檢出率為45.45%（50/110）；以直接離心法惡性細(xì)胞檢出率為38.18%（21/55），細(xì)胞塊試劑盒法惡性細(xì)胞檢出率為52.73%（29/55），兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩種細(xì)胞塊制片惡性細(xì)胞數(shù)量的檢出率比較[n（%）]

3 討 論

胸腹水細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)腫瘤的診斷、鑒別診斷和預(yù)后的觀察具有更加重要的臨床意義[4]。普通的直接離心涂片是常用的胸腹水細(xì)胞檢測(cè)方法，但近幾年來(lái)TCT及其他方式均普遍應(yīng)用于日常的病理診斷檢測(cè)中[5]。TCT主要采用液基薄層細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分類(lèi)的診斷，但是對(duì)疑似腫瘤標(biāo)本，可疑和高分化的癌細(xì)胞、反應(yīng)性間皮細(xì)胞以及間皮瘤等鑒別準(zhǔn)確率較低，只能采用免疫組織化學(xué)方法的進(jìn)行深入的檢查。

TCT檢測(cè)后標(biāo)本會(huì)保存一段時(shí)間后丟棄，剩余的標(biāo)本中有大量的細(xì)胞，對(duì)剩余胸腹水標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步處理后可以對(duì)標(biāo)本進(jìn)行多次利用，收集的脫落細(xì)胞制成的石蠟包塊有組織學(xué)優(yōu)點(diǎn)。細(xì)胞塊石蠟切片同時(shí)可以用免疫組織化學(xué)染色法對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，可以提高胸腹水細(xì)胞診斷的準(zhǔn)確率，對(duì)預(yù)后的判斷具有一定的臨床意義[6-10]。細(xì)胞塊技術(shù)主要將樣品進(jìn)行離心，細(xì)胞以及微小組織塊被高度濃縮后進(jìn)行了凝聚和固定，進(jìn)行脫水及石蠟包埋后制成切片，染色后進(jìn)行測(cè)定，細(xì)胞塊均勻，區(qū)域密集度均良好，惡性細(xì)胞的檢出率較高。本研究結(jié)果也表明，采用細(xì)胞塊試劑盒方法對(duì)惡性細(xì)胞的檢出率高于直接離心后惡性細(xì)胞的檢出率（P＜0.05）。

綜合上述，合適的細(xì)胞塊制作方法，對(duì)惡性細(xì)胞檢出率較為重要，本院采用了細(xì)胞塊試劑盒方式職稱(chēng)細(xì)胞塊用于檢測(cè)，其惡性細(xì)胞檢出率較高，方法操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果明顯，值得臨床病理檢測(cè)中應(yīng)用。

[1]孫春龍.兩種制片方法在胸膜水細(xì)胞學(xué)診斷中聯(lián)合應(yīng)用[J].臨床與試驗(yàn)病理學(xué)雜志，2012，28（1）：1291-1292.

[2]張婉儀，羅麗花，劉惠娟，等.胸腹水細(xì)胞塊制作技術(shù)及應(yīng)用[J].臨床醫(yī)學(xué)工程，2014，21（1）：44-45.

[3]劉巖，吳秉銓?zhuān)婃€鎬，等.瓊脂石蠟雙飽埋和免疫細(xì)胞化學(xué)染色的細(xì)胞學(xué)應(yīng)用[J].診斷病理學(xué)雜志，2013，20（3）：184-186.

[4]毛瑛玉，楊敏，劉冬戈，等.細(xì)胞塊切片免疫細(xì)胞化學(xué)染色在漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J].中華病理學(xué)雜志，2009，38（8）：547-550

[5]鄧志勇，李海，陳芳，等.超薄液基細(xì)胞技術(shù)在胸腹水癌細(xì)胞檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值探討[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2010，18（9）：1829-1830

[6]Sriram KB，Relan V，Clarke BE，et al.Diagnostic molecular biomarkers for malignant pleural effusions[J].Future Oncol，2011，7（6）：737-752.

[7]劉彬，陳汶，任生達(dá)，等.液基細(xì)胞學(xué)剩余標(biāo)本篩查子宮頸病變中人乳頭狀瘤病毒DNA的應(yīng)用[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，28（5）：495-497.

[8]王守梅，楊秋紅，魏靜靜，等.比較胸腹水液基細(xì)胞學(xué)剩余標(biāo)本制作細(xì)胞塊的3種方法[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，34（2）：160-163.

[9]單波兒，王華英，涂小予，等.內(nèi)異癥合并胸腹水一例報(bào)告及文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2012，47（4）：303-307.

[10]蘇保鑫，王金玲，李淑翠.胸腹水中C反應(yīng)蛋白等免疫化學(xué)指標(biāo)測(cè)定的臨床意義[J].中華全科醫(yī)師雜志，2011，10（6）：430-432.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.20.039

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1009-5519（2015）20-3142-03

2015-06-30）

李婕（1976-），女，四川彭州人，副主任醫(yī)師，主要從事肺、胸膜腫瘤診治工作；E-mail：liqunyingsuili@163.com。