張 娜 郭志勇 李在留 涂 璇 鄒 坤

（三峽大學(xué) 生物與制藥學(xué)院 天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點實驗室，湖北 宜昌 443002）

掌葉木（Handeliodendronbodinieri（Levl.）Rehd.）為中國特有的珍稀瀕危植物，屬于無患子科掌葉木屬植物，該屬僅此一種［1］，主要分布于貴州和廣西的石灰?guī)r山地.近年來，國內(nèi)外學(xué)者對掌葉木的分類學(xué)、形態(tài)學(xué)、分子系統(tǒng)學(xué)和保護(hù)生物學(xué)等方面進(jìn)行了研究報道，迄今為止，有關(guān)掌葉木化學(xué)成分的研究報道很少，僅見程菊英等研究報道［2］，研究表明掌葉木的種子含油量很高，其種仁含油量52.6%.在脂肪酸中，油酸占26.9%，亞油酸占6.1%，花生烯酸占15.5%，芥酸占33.9%.其油清澈，有香味可以食用，也可作工業(yè)用油.為掌葉木的進(jìn)一步保護(hù)和利用，本文對掌葉木葉化學(xué)成分進(jìn)行研究，分離并鑒定了5個化合物，分別為（7S，8R）－二氫脫氫二松柏醇－4－O－β－D－吡喃葡萄糖苷（1）、松脂素－4－O－β－D－葡萄糖苷（2）、Kaempferol－3－O－α－L－Rhamnopyranose（1 → 2）－β－D－glucopyranoside－7－O－α－L－Rhamnopyranoside （3 ）、Kaempferol－3－O－β－D－glucopyranose（1→2）－α－L－Rhamno－pyranoside－7－O－α－L－Rhamnopyranoside （4）、Quercetin－3－O-β－D－glucopyranose（1→2）－α－L－Rhamnpyranoside－7－O－α－L－Rhamnopyranoside（5）.化合物1～5均首次從該屬植物中分離得到.

1 儀器和試劑

Bruker－ARX－400核磁共振波譜儀，瑞士Bruker公司，TMS為內(nèi)標(biāo)；DIONEX Ultimate 3000高效液相色譜儀，Ultimate 3000泵，Ultimate 3000檢測器，美國；Waters 1525EF高效液相色譜儀，1525泵，2489檢測器，Waters公司，美國；低溫冷凍干燥機(jī)，美國LABCONCO公司；薄層預(yù)制板GF254硅膠粉，青島盛?；び邢薰荆籇101型大孔吸附樹脂，天津市海光化工有限公司；反相硅膠（YMC－GEL ODS－AA，C－18，S－5μm，12nm）；制備柱 Diamonsil C18ODS 5 μm 250×4.6mm；分析柱大連依利特ODS 5μm 150×4.6mm I.D；高效液相用乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純.

實驗用掌葉木葉由廣西大學(xué)李在留老師提供，其原植物標(biāo)本于2013年4月采自同一地區(qū)，經(jīng)李在留老師鑒定為 Handeliodendron bodinieri（Levl.）Rehd.，植物標(biāo)本現(xiàn)保存于三峽大學(xué)天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點實驗室內(nèi)，標(biāo)本編號為HBL20130427.

2 提取與分離

稱取干燥掌葉木葉1.5kg，以70%工業(yè)乙醇為溶劑，在80℃條件下回流提取4次，合并提取液，減壓濃縮成浸膏，然后用適量水懸浮，至完全溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取.得各浸膏分別為2g、29g、150g，經(jīng)薄層層析及高效液相色譜分析后，將正丁醇部位經(jīng)D101大孔樹脂除雜.經(jīng)初步分離得到30%乙醇洗脫部分23g，60%乙醇洗脫部分17g，95%乙醇洗脫部分3g.將60%乙醇洗脫部分采用反相硅膠柱色譜進(jìn)行分離，以甲醇－水系統(tǒng)梯度洗脫，共得到251個流分.合并相同流分，再用制備型HPLC分離.其中合并Fr168－170經(jīng)HPLC制備（23%乙腈／水恒梯度洗脫，2mL／min）得到化合物1（20.5mg）；合并Fr183－187經(jīng)HPLC制備（30%乙腈／水恒梯度洗脫，2mL／min）得到化合物2（18mg）；合并Fr145－153經(jīng)HPLC制備（21%乙腈／水恒梯度洗脫，2mL／min）得到化合物 3（42.8mg）；合并 Fr224－226經(jīng)HPLC制備（30%乙腈／水恒梯度洗脫，2mL／min）得到化合物4（34.2mg）；合并 Fr211－213經(jīng) HPLC制備（27%乙腈／水恒梯度洗脫，2mL／min）得到化合物5（22.5mg）.經(jīng)過高效液相制備方法進(jìn)行精制，最終得到化合物1～5，其結(jié)構(gòu)如圖1所示.

圖1 化合物1～5的結(jié)構(gòu)式

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定型粉末（甲醇），分子式C26 H34O11，ESI－MS m／z：545［M＋Na］＋；1H－NMR（400 MHz，DMSO－d6）δ：1.77（2H，m，H－8′），2.52（2H，t，J＝8.0Hz，H－7′），3.38（2H，t，J＝4.0Hz，H－9′），3.40（1H，m，H－8），3.76（3H，s，3－OCH3），3.79（3H，s，3′－OCH3），5.48（1H，d，J＝8.0Hz，H－7），6.65（1H，d，J＝2.0Hz，H－2′），6.70（1H，d，J＝2.0Hz，H－6′），6.85（1H，dd，J＝8.0，4.0Hz，H－6），6.97（1H，d，J＝2.0Hz，H－2），7.07（1H，d，J＝8.0Hz，H－5），4.90（1H，d，J＝8.0Hz，Glc H－1），3.26～3.31（4H，m，Glc H－2～5），3.15（1H，m，Glc H－6α），3.63（1H，dd，J＝20.0，8.0Hz，Glc H－6β）；13C－NMR（100 MHz，DMSO－d6）δ：135.5（C－1），135.2（C－1′），110.4（C－2），112.5（C－2′，5），115.3（C－5，2′），148.9（C－3），143.4（C－3′），146.1（C－4，4′），145.5（C－4′，4），128.8（C－5′），117.9（C－6），116.5（C－6′），86.5（C－7），31.6（C－7′），53.6（C－8），34.7（C－8′），63.1（C－9），60.2（C－9′），55.7（2×OCH3），100.0（Glc－C－1），73.2（Glc－C－2），77.0（Glc－C－3），69.7（Glc－C－4），76.9（Glc－C－5），60.7（Glc－C－6）；以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］一致，故鑒定為（7S，8R）－二氫脫氫二松柏醇－4－O－β－D－吡喃葡萄糖苷.

化合物2：白色無定型粉末（甲醇），分子式C26H32O11，ESI－MS（m／z）：543［M ＋Na］＋；1H－NMR（400MHz，DMSO－d6d6）δ：7.04（1H，d，J＝8.0Hz，H－5），6.95（1H，d，J＝1.6Hz，H－2），6.85（1H，dd，J＝1.6，8.0Hz，H－6），6.72（1H，d，J＝8.0Hz，H－5′），6.88（1H，d，J＝2.0Hz，H－2′），6.75（1H，dd，J＝1.6，8.0Hz，H－6′），4.66（1H，d，J＝4.4Hz，H－7），4.60（2H，d，J＝4.0Hz，H－7′），3.74（2H，m，H－9），3.74（2H，m，H－9′），3.10（1H，m，H－8），3.10（1H，m，H－8′），3.76（3H，s，OCH3），3.75（3H，s，OCH3），4.87（1H，d，J＝8.0Hz，Glc H－1），3.24～3.85（5H，m，Glc H－2～6）.13C－NMR（100MHz，DMSO－d6）δ：135.2（C－1），110.5（C－2），145.9（C－3），148.9（C－4），115.2（C－5），118.7（C－6），85.2（C－7），53.7（C－8），72.4（C－9），55.7（OCH3），132.2（C－1′），110.4（C－2′），145.8（C－3′），147.5（C－4′），115.1（C－5′），118.1（C－6′），84.9（C－7′），53.6（C－8′），70.9（C－9′），55.6（OCH3），100.1（Glc－C－1），73.2（Glc－C－2），76.9（Glc－C－3），69.7（Glc－C－4），77.0（Glc－C－5），60.7（Glc－C－6）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］對照，基本一致，故鑒定為松脂素－4－O－β－D－葡萄糖苷.

化合物3：淡黃色粉末（甲醇），分子式C33H40O19，ESI－MS（m／z）：763［M＋Na］＋；1H－NMR（400 MHz，DMSO－d6）δ：6.39（1H，brs，H－6），6.75（1H，brs，H－8），8.05（2H，d，J＝8.8Hz，H－2′和 H－6′），7.92（2H，d，J＝8.8Hz，H－3′和 H－5′）；7－O－α－L－Rha：δ5.53（1H，s，H－1），3.84（1H，br s，H－2），3.62（1H，m，H－3），3.29（1H，m，H－4），3.54（1H，m，H－5），1.11（3H，d，J＝6.16Hz，H－6）；3－β－D－Glc：δ5.66（1H，d，J＝8.8Hz，H－1），3.39（1H，m，H－2），3.36（1H，m，H－3），3.08（1H，m，H－4），3.4（1H，m，H－5），3.65（2H，m，H－6）；2?－α－L－Rha：δ5.09（1H，br s，H－1），3.54（1H，m，H－2），3.26（1H，m，H－3），3.04（1H，m，H－4），3.16（1H，m，H－5），0.80（3H，d，J＝6.0 Hz，H－6）；13C－NMR（100MHz，DMSO－d6）δ：155.8（C－2），132.6（C－3），176.9（C－4），160.7（C－5），98.3（C－6），161.3（C－7），98.2（C－8），105.7（C－9），155.9（C－10），121.4（C－1′），130.9（C－2′），115.3（C－3′），160.1（C－4′），115.3（C－5′），130.9（C－6′）；7－O－α－LRha：δ100.5（C－1），70.0（C－2），69.8（C－3），71.6（C－4），63.1（C－5），17.8（CH3）；3－β－D－Glc：δ106.7（C－1），74.8（C－2），77.6（C－3），71.8（C－4），77.4（C－5），60.8（C－6）；2?－α－L－Rha：δ100.5（C－l），68.2（C－2），70.2（C－3），70.5（C－4），70.6（C－5），17.2（CH3）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］對照，基本一致，故鑒定為 Kaempferol－3－O－α－L－Rhamnopyranose（1→2）－β－D－glucopyranoside－7－O-α－L－Rhamncopyranoside.

化合物4：淡黃色粉末（甲醇），分子式C33H40O19，ESI－MS（m／z）：763［M＋Na］＋；1H－NMR（400 MHz，DMSO－d6）δ：6.20（1H，s，H－6），6.50（1H，s，H－8），7.71（2H，d，J＝8.0Hz，H－2′和 H－6′），6.82（2H，d，J＝8.0Hz，H－3′和 H－5′）；7－O－α－L－Rha：δ5.47（1H，s，H－1），3.38（1H，m，H－2），3.32（1H，m，H－3），3.67（1H，m，H－4），3.30（1H，m，H－5），1.11（3H，d，J＝6.0Hz，H－6）；3－O－α－L－Rha：δ5.55（1H，s，H－1），4.15（1H，s，H－2），3.59（1H，m，H－3），3.19（1H，m，H－4），3.40（1H，m，H－5），0.86（3H，d，J＝5.6Hz，H－6）；Glc：δ4.30（1H，d，J＝7.5Hz，H－1），3.39（1H，m，H－2），3.15（1H，m，H－3），3.60（1H，m，H－4），3.32（1H，m，H－5），3.37（2H，m，H－6）；13CNMR（100MHz，DMSO－d6）δ：158.5（C－2），134.0（C－3），177.2（C－4），160.9（C－5），101.3（C－6），162.5（C－7），94.7（C－8），105.1（C－9），155.0（C－10），121.2（C－1′），131.3（C－2′，C－6′），116.7（C－3′，C－5′），159.3（C－4′）；7－O－α－L－Rha：δ99.5（C－1），70.6（C－2），71.2（C－3），72.3（C－4），70.3（C－5），18.0（CH3）；3－O－α－LRha：δ101.3（C－l），81.7（C－2），71.2（C－3），72.3（C－4），71.0（C－5），18.1（CH3）；Glc：δ106.7（C－1），74.5（C－2），77.0（C－3），69.8（C－4），76.7（C－5），61.5（C－6）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］一致，故鑒定為 Kaempferol－3－O－β－D－glucopyranose（1→2）－α－L－Rhamnopyranoside－7－O－α－L－Rhamnopyranosid.

化合物5：淡黃色粉末（甲醇），分子式為C33H40O20，ESI－MS（m／z）：779［M＋Na］＋；1H－NMR（400 MHz，DMSO－d6）δ：6.45（1H，s，H－6），6.77（1H，s，H－8），6.89（1H，d，J＝8.0Hz，H－5′），7.33（1H，dd，J＝8.0，2.5Hz，H－6′），7.35（1H，d，J＝2.5Hz，H－2′），7－O－α－L－Rha：δ5.55（1H，s，H－1），3.83（1H，m，H－2），3.32（1H，m，H－3），3.67（1H，m，H－4），3.30（1H，m，H－5），1.12（3H，d，J＝6.0Hz，H－6）；3－O－α－L－Rha：δ5.34（1H，s，H－1），4.20（1H，s，H－2），3.70（1H，m，H－3），3.19（1H，m，H－4），3.41（1H，m，H－5），0.86（3H，d，J＝5.6Hz，H－6）；Glc：δ4.36（1H，d，J＝7.6Hz，H－1），3.38（2H，m，H－2），3.13（1H，m，H－3），3.60（1H，m，H－4），3.32（1H，m，H－5），3.38（2H，m，H－6）；13C－NMR（100MHz，DMSO－d6）δ：157.8（C－2），134.0（C－3），177.9（C－4），160.9（C－5），101.6（C－6），161.7（C－7），94.5（C－8），104.9（C－9），156.1（C－10），121.4（C－1′），115.7（C－2′），145.3（C－3′），148.9（C－4′），115.6（C－5′），120.3（C－6′）；7－O－α－L－Rha：δ99.5（C－1），69.8（C－2），70.1（C－3），70.4（C－4），69.2（C－5），17.9（CH3）；3－O－α－L－Rha：δ98.5（C－l），81.2（C－2），70.3（C－3），71.6（C－4），69.9（C－5），17.5（CH3）；Glc：δ105.7（C－1），74.0（C－2），76.6（C－3），69.8（C－4），76.3（C－5），60.9（C－6）.以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7，8］一致，故鑒定為 Quercetin－3－O－β－D－glucopyranose（1→2）－α－L－Rhamnpyranoside－7－O-α－L－Rhamnopranoside.

4 結(jié)論與討論

本實驗對掌葉木葉70%乙醇提取物中的正丁醇部位進(jìn)行系統(tǒng)分離，從掌葉木葉中分離得到5個化合物，包括2個木脂素和3個黃酮苷，這些化合物都是首次從該屬植物中分離得到.

無患子科植物富含三萜、黃酮、苯丙素、酚酸、甾類、生物堿等成分，如單種屬植物文冠果就富含有三萜類化合物，大多數(shù)化合物都是新化合物且具有顯著的抗癌、抗HIV活性［9］.掌葉木同屬于無患子科單種屬植物，且生存環(huán)境特殊，但其化學(xué)成分與生物活性研究尚屬空白，以上研究為掌葉木開發(fā)利用提供了重要的科學(xué)依據(jù).

［1］ 羅獻(xiàn)瑞，陳德昭.中國植物志：無患子科［M］.北京：科學(xué)出版社，1985.

［2］ 程菊英，羅四蓮，潘于發(fā)，等.廣西十種植物種子油的脂肪酸成分分析［J］.植物學(xué)報，1981，23（5）：416－418.

［3］ Noriko Matsuda，Hiromi Sato，Yasunori Yaoita，et al.I－solation and Absolute Structures of the Neolignan Glycosides with the Enantiometric Aglycones from the Leaves of Viburnum Awabuki K.Koch［J］.Chem Pharm Bull，1996，44（5）：1122.

［4］ 楊愛梅，魯潤華，師彥平.藏藥川西小黃菊化學(xué)成分的研究［J］.中藥材，2007，30（5）：546－548.

［5］ Warashina T，Umehara K，Miyase T.Flavaniod Glycosides from Botrychium Ternatum［J］.Chem.Pharm.Bull.2012，60：1561－1573.

［6］ Kücükislaoglu M，Yayli N，Senntürk H B，et al.Flavonol Glycosides from Consolida Armeniaca［J］.Turkish Journal of Chemistry，2000，24：191－197.

［7］ Barakat H H，El－Moousallamy A M D，Soulemam A M A，et al.Flavonoids of Ochradenus Baccatus［J］.Phytochemistry，1991，30：3777－3779.

［8］ El－Sayed N H，Omara N M，Yousef A K，et al.Kaempferol Triosides from Reseda Muricata［J］.Phytochemistry，2001，57：575－578.

［9］ 萬國盛，吳立軍，高慧媛，等.文冠果的化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展［J］.中草藥，2013，44（13）：1842－1851.