張義　程曉　王全龍等

摘要：為給水生植物芡實(shí)（Euryale ferox）生物肥料的研制提供優(yōu)良的菌株資源，采用保綠法和蘿卜子葉增重法從芡實(shí)根際土壤篩選出2株作用效果較好的細(xì)菌Q6-2和Q67，用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography， HPLC）定量分析菌株產(chǎn)植物激素和有機(jī)酸的能力；通過盆栽試驗(yàn)研究2株細(xì)菌對苗期芡實(shí)的促生作用；結(jié)合生理生化試驗(yàn)和16S rDNA序列分析對2株細(xì)菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示，2株細(xì)菌均能夠產(chǎn)生玉米素、激動(dòng)素等植物激素和少量有機(jī)酸，Q6-2還能夠產(chǎn)生吲哚乙酸；接種Q6-2后，芡實(shí)幼苗莖長、葉片數(shù)、最大葉面積、生物量（干重）分別比對照高出18.85%、40.67%、76.28%和37.50%，接種Q67的處理各項(xiàng)指標(biāo)分別比對照高出27.47%、42.81%、96.05%和42.97%，差異顯著；接種Q6-2和Q67后，葉綠素含量分別高出對照43.27%和51.46%，根系活力則分別高出5.41%和7.05%，差異顯著。經(jīng)鑒定，Q6-2和Q67均為地衣芽孢桿菌，GenBank登錄號(hào)分別為KP686129和KP686133。2株細(xì)菌有效促進(jìn)了芡實(shí)幼苗生長發(fā)育水平，在微生物肥料的生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：芡實(shí)；植物根際促生菌；植物激素；促生；鑒定

中圖分類號(hào)：S154.38+1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A 文章編號(hào)：1001-4942（2015）08-0053-06

Abstract This study aims to provide excellent bacterial strain resources for the production of Euryale ferox bio-fertilizer. Two strains with relatively higher performance named Q6-2 and Q67 were screened from the rhizosphere soil of Euryale ferox using the methods of remaining green and radish cotyledon bioassay； their production capability of plant hormones and organic acids were quantitatively analyzed by HPLC； their promotion effects on the growth of Euryale ferox at seedling stage were investigated by pot experiments； also， they were identified by physiological and biochemical experiments and 16S rDNA sequence analysis. The results indicated that the two strains were both able to produce zeatin， kinetin and small amount of organic acid. Q6-2 was also able to produce indoleacetic acid （IAA）. After inoculated by Q6-2， the growth parameters of Euryale ferox seedlings， such as stem length， number of leaves， maximum leaf area and biomass （dry weight）， significantly increased by 18.85%， 40.67%， 76.28% and 37.50% respectively compared to the control； while inoculated by Q67， the above mentioned indexes significantly increased by 27.47%， 42.81%， 96.05% and 42.97% respectively. After inoculated by Q6-2 and Q67， the chlorophyll content increased by 43.27% and 51.46% respectively， and the root activity increased by 5.41% and 7.05% respectively， showing significant differences compared to the control. Q6-2 and Q67 were both identified as Bacillus licheniformis， whose GenBank accession number were KP686129 and KP686133 respectively. In conclusion， the two strains were able to promote the growth and development of Euryale ferox seedlings efficiently， showing great application prospect in the production of microbial fertilizer.

Key words Euryale ferox； Plant growth-promoting rhizobacteria； Plant hormones； Growth promoting； Identificationendprint

芡實(shí)（Euryale ferox）又名芡、雞頭等，睡蓮科芡屬一年生大型草本水生植物，是我國極具代表性的水生蔬菜品種，其生產(chǎn)歷史悠久，廣泛分布于我國南北各省[1]。芡實(shí)種仁（干芡米）含有豐富的蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及微量元素等，具有較高的營養(yǎng)及藥用價(jià)值，市場前景廣闊[2]。近年來，我國江淮一帶芡實(shí)種植面積不斷加大，種植過程中多采用化學(xué)肥料和農(nóng)藥，雖能在一定程度上保證芡實(shí)產(chǎn)量，但長期以往極易造成土壤質(zhì)量下降，引起農(nóng)藥殘留等問題。隨著人們環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)和對食品安全的重視，開發(fā)新型微生物肥料已成為芡實(shí)種植可持續(xù)發(fā)展的重要方向。

微生物肥料是由有益活體微生物接種到吸附載體中制成的，利用微生物的代謝過程或代謝產(chǎn)物促進(jìn)植物生長[3，4]。選育性能優(yōu)良的菌株是研制微生物肥料的核心環(huán)節(jié)。植物根際促生菌（Plant growth-promoting rhizobacteria， PGPR）是指一群定殖于植物根際、與植物根系密切相關(guān)的有益細(xì)菌，它們可以通過產(chǎn)生植物激素、拮抗病原菌、誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性（ISR）、溶磷、解鉀等多種方式直接或間接促進(jìn)作物生長[5，6]。因此，利用PGPR研制微生物肥料能夠有效降低化肥和農(nóng)藥的用量，對芡實(shí)的無公害種植具有重要作用。

目前，國內(nèi)外已發(fā)現(xiàn)包括芽孢桿菌屬（Bacillus）、假單胞菌屬（Pseudomonas）、節(jié)桿菌屬（Arthobacter）、腸桿菌屬（Enterobacter）、產(chǎn)堿菌屬（Alcaligens）、固氮菌屬（Azotobacter）等20多個(gè)種屬的細(xì)菌具有防病促生潛能[7]，但大多數(shù)PGPR均分離自陸生植物根際，尚未有關(guān)于芡實(shí)等水生植物方面的報(bào)道。水生植物的根際環(huán)境、根系發(fā)育、形態(tài)學(xué)方面較為特殊[8，9]，其根際細(xì)菌的種類和特征較陸生植物也可能存在一些不同。針對上述特點(diǎn)，本研究從芡實(shí)根際土壤篩選具有良好促生作用的菌株，并對產(chǎn)植物激素等生物學(xué)特性加以分析，初步探討了其對苗期芡實(shí)生長發(fā)育的影響，以期為芡實(shí)微生物肥料的研制奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑及培養(yǎng)基

色譜分析中用到的甲醇等流動(dòng)相、植物激素標(biāo)準(zhǔn)品等購自國藥集團(tuán)；有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品為國產(chǎn)優(yōu)級(jí)純；分子生物學(xué)試劑購自于全式金生物技術(shù)有限公司；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。細(xì)菌的分離、培養(yǎng)及發(fā)酵液的制備用NA培養(yǎng)基，細(xì)菌保藏用LB 培養(yǎng)基。

1.2 土壤樣品及根際細(xì)菌的分離

從蘇州市甪直鎮(zhèn)芡實(shí)種植地采集8個(gè)土壤樣品，梯度稀釋后涂布于NA平板，為模擬水田的少氧環(huán)境，待稀釋液完全滲入培養(yǎng)基后，在表面傾注一層盡量厚的水瓊脂。30℃培養(yǎng)48 h后，挑取不同形態(tài)細(xì)菌分離物，采用穿刺法接種于裝有半固體NA培養(yǎng)基的試管底部，并灌注約1 cm厚的無菌石蠟，篩選兼性厭氧菌。從試管底部挑取生長速度較快的細(xì)菌分離物，采用三區(qū)劃線法對其反復(fù)純化，將純化后菌株編號(hào)并保存于LB斜面，備用。

1.3 保綠法初篩[10]

1.3.1 小麥幼苗培養(yǎng) 選取顆粒飽滿、大小一致的小麥種子，表面消毒后用無菌水沖洗數(shù)次，吸干表面水分后播種于墊有雙層濾紙的培養(yǎng)皿中，加蓋后置于23℃培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)。24～36 h后，保留發(fā)芽整齊的種子繼續(xù)培養(yǎng)。當(dāng)麥芽頂?shù)矫笊w時(shí)，摘去皿蓋，光照繼續(xù)培養(yǎng)，每日光照時(shí)間約為14 h，培養(yǎng)過程中隨時(shí)補(bǔ)充蒸發(fā)的水分。

1.3.2 細(xì)菌發(fā)酵液制備 取數(shù)支18 mm×180 mm的試管，接入約5 mL液體NA培養(yǎng)基，1×105 Pa滅菌30 min。將篩選到的根際細(xì)菌活化，分別接種于上述試管中，30℃、180 r/min條件下?lián)u床培養(yǎng)24 h，制備發(fā)酵液，備用。

1.3.3 發(fā)酵液保綠效果分析 將每管細(xì)菌發(fā)酵液中加入5 mL無菌水，混勻待用。另取一支裝有培養(yǎng)基但不接菌的試管，加入等量無菌水作為對照。待小麥葉片長至約10 cm高時(shí)，將其取出切成約1 cm的小段，裝入各細(xì)菌發(fā)酵稀釋液試管中，每管5段。 25℃暗室放置4 d后，根據(jù)葉片顏色目測保綠情況。每菌株重復(fù)3次。

1.4 蘿卜子葉增重法復(fù)篩

蘿卜幼苗的培養(yǎng)同1.3.1。將經(jīng)保綠法初篩后的菌株接入裝有50 mL NA培養(yǎng)基的三角瓶，30℃、180 r/min搖床培養(yǎng)24 h。將發(fā)酵液以3 000 r/min離心20 min，轉(zhuǎn)移30 mL上清液至無菌三角瓶，加入等量的無菌水稀釋，待用，另取空白培養(yǎng)基用無菌水等量稀釋作為對照[11]。蘿卜子葉充分展開后，剪下較小的1片子葉，稱重并裝入墊有兩張濾紙的培養(yǎng)皿中，每皿擺放8片，用已稀釋好的上清菌液澆灌，加蓋后置于25℃培養(yǎng)箱光照培養(yǎng)4 d，每日補(bǔ)充蒸發(fā)的稀釋上清菌液。4 d后取出子葉，用無菌水沖洗，吸干表面水分后稱重，分析菌株對蘿卜子葉的促生作用[12]。每處理重復(fù)3次，保留促生效果較好的菌株備用。

1.5 發(fā)酵液中植物激素及有機(jī)酸測定

通過高效液相色譜法（HPLC）測定復(fù)篩后的PGPR菌株分泌赤霉素（Gibberellin， GA）、玉米素（Zeatin， ZT）、激動(dòng)素（Kinetin， KT）和脫落酸（Abscisic acid， ABA）等植物激素的情況。菌株發(fā)酵液的制備同1.3.2，發(fā)酵液 5 000 r/min 離心10 min去除菌體碎片，上清液再經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，即為HPLC上機(jī)樣品。色譜條件參照陳波等[10]的方法，略有改動(dòng)，色譜柱：Gemini5u-C18-110A （4.6 mm×250 mm， 5 μm）；流動(dòng)相：甲醇∶1%冰醋酸=40∶60（體積比）；梯度流速：0.01～12.00 min為0.8 mL/min，12.01～25.00 min為1.0 mL/min；檢測波長254 nm，柱溫37°C，進(jìn)樣量10 μL。

吲哚乙酸（IAA）的測定參照文獻(xiàn)[13]。endprint

采用HPLC法測定甲酸、乙酸、草酸、丙酸、丙二酸、丁二酸、蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸等10種有機(jī)酸的含量。發(fā)酵液的制備同1.3.2，取10 mL發(fā)酵液定容于100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋并定容，過0.22 μm濾膜，濾液即為上機(jī)樣品。色譜柱同上，流速為1 mL/min；流動(dòng)相：97%的K2HPO4 （用 pH 2.55磷酸調(diào)配成0.01 mol/L），3%的甲醇；檢測波長210 nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20 μL。

1.6 菌株對苗期芡實(shí)的促生作用盆栽試驗(yàn)

芡實(shí)種子由蘇州澄湖現(xiàn)代科技生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限責(zé)任公司提供，種子浸泡露白后，播種至直徑約40 cm的塑料盆育苗，保持5～10 cm的水位，不斷補(bǔ)充水分培養(yǎng)至3～4片真葉，備用。盆栽用土取自深圳本地公園池塘底泥，土壤堿解氮含量33.85 mg/kg，速效磷含量28.42 mg/kg，速效鉀含量120.12 mg/kg，有機(jī)質(zhì)含量為21.83 g/kg，腐殖質(zhì)含量為11.26 g/kg，pH 7.33。

試驗(yàn)設(shè)在深圳清華大學(xué)研究院頂樓日光溫室，共設(shè)計(jì)3個(gè)處理，處理1：對照（CK），施加等量空白培養(yǎng)基；處理2：接種促生菌Q6-2發(fā)酵液；處理3：接種促生菌Q67發(fā)酵液。發(fā)酵液的制備同1.3.2，用無菌水將濃度調(diào)節(jié)至約108 CFU/mL。試驗(yàn)采用直徑約50 cm、深度約40 cm的塑料桶，每桶裝塘泥約5 kg（干重）并加適量清水，放置2～3 d使塘泥剛好處于松軟稀松的狀態(tài)，分別接種各菌株的發(fā)酵液，每盆澆施約15 mL。平衡3 d后加入清水，水位高約10 cm，繼續(xù)平衡4 d，取長勢一致的芡實(shí)幼苗移栽，每盆5株。每處理3個(gè)重復(fù)。隨植株生長逐步加深水深，以利葉柄伸長，培養(yǎng)期為40 d。

40 d后，測定芡實(shí)的莖長、葉片數(shù)量、葉面積等農(nóng)藝性狀及葉綠素、根系活力等指標(biāo)[14]，同時(shí)取出植株用清水洗凈，分為地上與地下兩部分，風(fēng)干后將植株置于烘箱中105℃殺青30 min，60℃繼續(xù)烘干48 h，測定干重。

1.7 菌株鑒定

生理生化試驗(yàn)參照東秀珠等[15]的方法。提取菌株的基因組DNA，采用16S rDNA通用引物27F （5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和1495R （5′-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3′）擴(kuò)增其16S rDNA序列。PCR反應(yīng)條件為：95℃ 5 min；94℃ 50 s，56℃ 1 min，72℃ 1.5 min，30個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。PCR產(chǎn)物由上海生工生物工程有限公司測序，測序結(jié)果提交GenBank并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

采用SPSS 18.0和ORIGIN 8.6軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算、整理；采用新復(fù)極差法，在0.05水平上分析差異顯著性（P<0.05）。菌株16S rDNA序列通過DNAMAN 7.02和NCBI中的BLAST分析，用MEGA 6程序Neighbor-joining算法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 芡實(shí)根際促生細(xì)菌的篩選

通過梯度稀釋法涂布平板，加蓋瓊脂層模擬少氧環(huán)境，從芡實(shí)根際土壤共分離得到236個(gè)細(xì)菌分離物，經(jīng)穿刺接種法反復(fù)篩選并純化，得到17株能夠快速生長的細(xì)菌。通過保綠法對這17株細(xì)菌進(jìn)行初篩，共有Q6-2、Q11、Q67等10株細(xì)菌對小麥葉片的保綠效果較好。采用蘿卜子葉增重法進(jìn)一步驗(yàn)證其促生效果（表1），結(jié)果顯示，接種菌株Q6-2和Q67的蘿卜子葉增重率超過了300%，與對照相比，2株細(xì)菌對蘿卜子葉的增重率分別提高59.26%和70.94%，具有良好的促生潛力。

2.2 菌株產(chǎn)植物激素及有機(jī)酸情況

產(chǎn)生植物激素刺激植物生長是PGPR重要的促生機(jī)制之一[16]，分泌植物激素含量的多少，是判定其促生效果強(qiáng)弱的重要指標(biāo)。本文通過HPLC法定量檢測了PGPR菌株Q6-2和Q67發(fā)酵液中植物激素的含量（表2）。結(jié)果顯示，2株細(xì)菌均能夠產(chǎn)生細(xì)胞分裂素ZT和KT，總量分別為4.36 mg/L和5.51 mg/L；菌株Q6-2還能夠分泌生長素IAA；2株細(xì)菌發(fā)酵液中均未檢測到GA和ABA。

某些細(xì)菌在代謝過程中會(huì)分泌有機(jī)酸，促進(jìn)土壤難溶的磷、鉀化合物的溶解，供給植物可以利用的營養(yǎng)成分[17]。有機(jī)酸HPLC測定結(jié)果顯示，甲酸、乙酸、草酸、丙酸、丙二酸、檸檬酸和乳酸標(biāo)準(zhǔn)品分別在3.55、4.89、3.13、10.10、4.38、6.45、4.65 min出現(xiàn)吸收峰，丁二酸在7.21、8.28 min出現(xiàn)2個(gè)吸收峰，酒石酸在3.42、9.39 min出現(xiàn)2個(gè)吸收峰，蘋果酸在4.06、8.20、7.38 min時(shí)出現(xiàn)3個(gè)吸收峰。根據(jù)出峰時(shí)間和峰形初步判斷Q6-2發(fā)酵液中含有乳酸、丙酸、檸檬酸3種有機(jī)酸；Q67發(fā)酵液中含有甲酸、乳酸、丙酸和丁二酸4種有機(jī)酸。

2.3 PGPR對苗期芡實(shí)生長發(fā)育影響

芡實(shí)幼苗移栽40 d后，測定農(nóng)藝性狀及生物量等各項(xiàng)指標(biāo)（表3）。結(jié)果顯示，接種Q6-2后，芡實(shí)幼苗莖長、單株葉片數(shù)、最大葉面積、生物量（干重）分別比對照高出18.85%、40.67%、76.28%和37.50%，差異顯著；接種Q67的芡實(shí)幼苗以上指標(biāo)分別比對照高出27.47%、42.81%、96.05%和42.97%，差異顯著?？梢?，根際細(xì)菌Q6-2和Q67對芡實(shí)幼苗的生長發(fā)育具有一定促進(jìn)作用，Q67的促進(jìn)效果略好于Q6-2，但二者間差異不顯著。

2.4 PGPR對苗期芡實(shí)葉綠素及根系發(fā)育的影響

葉綠素含量和根系發(fā)育水平是判斷植物生長發(fā)育水平的重要指標(biāo)。移栽40 d后，對各處理芡實(shí)幼苗葉片的葉綠素含量以及根部干重、根冠比、根系活力等指標(biāo)進(jìn)行測定（表4）。結(jié)果表明，2株P(guān)GPR均有利于苗期芡實(shí)葉片中葉綠素的合成，接種Q6-2和Q67的處理葉片葉綠素含量分別比對照高出43.27%和51.46%，差異顯著。此外， PGPR也促進(jìn)了芡實(shí)幼苗根系的發(fā)育水平，接種Q6-2后，芡實(shí)幼苗的根部干重、根冠比和根系活力分別比對照高出52.50%、15.22%和5.41%；而接種Q67的處理，以上指標(biāo)分別比對照高62.50%、21.74%和7.05%，根部干重和根系活力與對照間差異顯著。Q67的促生效果略好Q6-2，但二者間差異不顯著。endprint

2.5 菌株鑒定

2.5.1 菌株形態(tài)特征及理化特性分析 Q6-2在NA培養(yǎng)基上生長24～48 h后，菌落呈白色，表面粗糙，非常干燥，不透明，邊緣小鋸齒狀，中間點(diǎn)狀突起，有褶皺，直徑2～4 mm；鏡檢（1 000倍）菌體呈桿狀，（1.5～3.0） μm×（0.6～0.8） μm，單生或集群，芽孢中生。Q67大部分形態(tài)特征與Q6-2相同，平板菌落一段時(shí)間后產(chǎn)生紅色素，菌落直徑3～5 mm，鏡檢下菌體大小約為（1.8～3.3） μm×（0.5～0.9） μm。

Q6-2的部分生理生化特性為：革蘭氏陽性；接觸酶、V-P試驗(yàn)、硝酸鹽還原、淀粉水解、明膠液化陽性；M.R、苯丙氨酸脫氨酶、吲哚試驗(yàn)陰性；葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；7% NaCl下可生長；生長溫度為20～55℃。Q67大部分生理生化特性與Q6-2相同，只有M.R試驗(yàn)為陽性，生長溫度范圍15～55℃。

2.5.2 菌株的 16S rDNA序列分析 采用通用引物對菌株Q6-2和Q67的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，得到約1 440 bp的擴(kuò)增片段，將序列提交 GenBank，獲得登錄號(hào)分別為KP686129和KP686133。將序列進(jìn)行BLAST分析，選取相近種屬的細(xì)菌構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果如圖1所示，2株細(xì)菌與芽孢桿菌屬（Bacillus sp.）下幾株地衣芽孢桿菌聚為同一類群，Q6-2與Bacillus licheniformis CGMCC 2876 （GQ148817）和Bacillus licheniformis CICC 10181 （AY842871）的相似度均達(dá)到了97%；Q67與圖中其余4株地衣芽孢桿菌的相似度均為99%。結(jié)合形態(tài)特征、理化特性及16S rDNA序列分析，將2株細(xì)菌鑒定為地衣芽孢桿菌。

3 討論與結(jié)論

已有大量研究表明，接種PGPR能夠促進(jìn)植物生長、提高產(chǎn)量，如：Kumar等[18]通過浸種的方式接種Pseudomonas aeruginosa LES4，有效提高了芝麻產(chǎn)量，出油率和蛋白質(zhì)含量比對照高出33.3%和47.5%；常文智等[19]接種Paenibacillus mucilaginosus 3016，將花生總產(chǎn)量提高了10.4%。也有研究表明，相比于從其他環(huán)境分離到的菌株，從某種植物根際篩選到PGPR菌株具有更好的環(huán)境適應(yīng)性，可能對該種植物具有更好的應(yīng)用效果[20]。由于水生植物根系環(huán)境與陸生植物差異較大，目前尚未有關(guān)于水生植物PGPR方面的報(bào)道，因此從芡實(shí)根際土壤有針對性地篩選促生細(xì)菌，是芡實(shí)微生物肥料研制過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本文通過平板覆蓋瓊脂、穿刺法等模擬水田的少氧環(huán)境，從芡實(shí)根際土壤分離到17株在少氧條件下可以良好生長的細(xì)菌，并通過保綠法和蘿卜子葉增重法進(jìn)一步篩選到2株能夠產(chǎn)生植物激素PGPR菌株Q6-2和Q67，經(jīng)鑒定，2株細(xì)菌均為地衣芽孢桿菌。

研究表明，通過產(chǎn)生植物激素調(diào)節(jié)植物生長，是PGPR重要的促生機(jī)制之一[20]。HPLC結(jié)果顯示，芡實(shí)根際細(xì)菌Q6-2和Q67能夠產(chǎn)生ZT和KT，Q6-2還可以分泌IAA。ZT和KT是2種常見的細(xì)胞分裂素，不僅能夠延緩葉片衰老，而且對植物生長具有促進(jìn)作用[21，22]；IAA是一種生長素，一定濃度水平上可促進(jìn)植物生根及地上部分的壯大[23]。與其他類似的研究相比，Q6-2和Q67產(chǎn)細(xì)胞分裂素的能力（4.36 mg/L和5.51 mg/L）高于Hussain等[24]篩選到的菌株Am3 （0.42 mg/L），Q6-2還能產(chǎn)生IAA，但產(chǎn)量低于陳波等[10]分離到的菌株AI5和PII17，2株細(xì)菌均不產(chǎn)生GA和ABA。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，2株細(xì)菌能分泌不同種類的有機(jī)酸，在促進(jìn)土壤中難溶的磷、鉀等化合物方面展現(xiàn)出一定的潛力。

盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，接菌處理幼苗的莖長、葉數(shù)、最大葉面積和生物量等指標(biāo)全面優(yōu)于對照，增長幅度在18.85%～96.05%之間。接種Q6-2和Q67也促進(jìn)了幼苗葉綠素的合成和根系發(fā)育水平，其中葉綠素是反應(yīng)植物光合作用強(qiáng)弱的重要指標(biāo)，而苗期作物的根系發(fā)育對地上部分生長和后期發(fā)育起到至關(guān)重要的作用[25]，可見，2株細(xì)菌在促生方面展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用潛力，也可能存在著誘導(dǎo)植株系統(tǒng)抗性（ISR）的作用。雖然Q6-2和Q67同為地衣芽孢桿菌，但無論是農(nóng)藝性狀還是生理指標(biāo)方面，Q67的作用效果均要好于Q6-2，這可能是由于2株細(xì)菌代謝產(chǎn)物不同造成的。

地衣芽孢桿菌在防病、促生方面的作用早有報(bào)道[26，27]，本研究首次探討了其對水生作物的促生作用。地衣芽孢桿菌是一種兼性厭氧芽孢桿菌，相比于其他PGPR菌株，更適用于水田環(huán)境。因此，PGPR菌株Q6-2和Q67在開發(fā)芡實(shí)等水生作物微生物肥料方面具有巨大的應(yīng)用潛力。由于細(xì)菌生長受到溫度、水分、土壤理化性質(zhì)等外界環(huán)境的影響較大，本研究的效果還有待在大田條件下加以驗(yàn)證，有關(guān)2株細(xì)菌的促生機(jī)制、產(chǎn)酶情況以及在芡實(shí)根際的定殖情況等也需要進(jìn)一步研究。

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