楊葵華，邊清泉，呂瑞，秦曉柳

（綿陽師范學院化學與化學工程學院，四川綿陽621000）

人參果中氨基酸含量的測定

楊葵華，邊清泉，呂瑞，秦曉柳

（綿陽師范學院化學與化學工程學院，四川綿陽621000）

采用單因素試驗對提取條件進行選擇，氨基酸與茚三酮顯色后，用分光光度法測定人參果中氨基酸含量。檢測波長為565 nm，料液比為1∶15，乙醇濃度為70%，水浴回流4 h，回流兩次；標準曲線方程A=0.035 2C-0.006 5，r= 0.999 3，氨基酸含量在2 mg/mL～12 mg/mL范圍內線性關系良好。平均回收率為99.5%，RSD為2.9%。

人參果；氨基酸；分光光度法；測定

氨基酸（Amino acid）是構成蛋白質（protein）的基本單位，賦予蛋白質特定的分子結構形態(tài)，使它的分子具有生化活性。而蛋白質是人體的主要“建筑材料”，是生命得以延續(xù)的主要物質基礎。藥理研究表明單體成分在保肝［1］、增強免疫功能［2］、抗氧化［3］等方面作用很明顯。人參果亦稱蕨麻［4-6］富含大量蛋白質、氨基酸、維生素等營養(yǎng)成分，藥用保健價值頗高，開發(fā)利用潛力巨大。目前少有對人參果中氨基酸含量測定的研究報告，因此本文采用紫外分光光度法［7］對人參果中氨基酸含量進行測定，對該水果的質量評價具有一定的意義。

1材料與方法

1.1試劑與儀器

T6新世紀紫外分光光度儀：南京華璧科學儀器有限公司；比色皿、比色管、容量瓶、人參果：阿壩藏族羌族自治州壤塘縣農資公司；實驗用水為蒸餾水和二次蒸餾水。

2%茚三酮溶液：稱量茚三酮粉末1.000 0 g，加70%的乙醇使之溶解成50 mL，冷藏備用。

磷酸鹽緩沖液（pH=6.8）：精密稱取磷酸二氫鉀1.701 1 g、氫氧化鈉0.236 0 g混合加蒸餾水使其溶解，用二次蒸餾水定容至250 mL。

0.1mg/mL酪氨酸對照品溶液：精密稱取酪氨酸0.010 0 g，加0.02 mol/L的氫氧化鈉溶液10.0 mL，溶解完全后用二次蒸餾水定容至100 mL。

1.2樣品預處理

用蒸餾水除去樣品表面附著的雜質及金屬離子，烘干、粉碎，裝于試劑瓶備用。

取待測樣品2 g加入定體積、定濃度的乙醇，回流一定時間并回流兩次，合并濾液，濃縮回收乙醇，浸膏用蒸餾水加熱溶解，定容至50 mL待測。

2結果與討論

2.1波長的選擇

取酪氨酸對照品溶液1.00 mL于50 mL容量瓶中，加茚三酮溶液1.00 mL和磷酸鹽緩沖液1.00 mL，搖勻，水浴加熱15 min，取出，冷卻，用蒸餾水定容至50 mL。在紫外可見分光光度計中進行波長掃描，結果顯示對照品溶液在565 nm處有最大吸收。因此，實驗的最佳測定波長為565 nm。

2.2顯色時間的選擇

取2 mL酪氨酸對照品液于容量瓶中，按照試驗方法，在其他條件不變的情況下，以6 min為起點，以3 min為梯度，改變在沸騰水浴鍋中的加熱時間，測定其吸光度，測定結果顯色時間為15 min吸收波長最長。

2.3乙醇濃度的選擇

精密稱取樣品6份，每份2.0000g，分別加入50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇30 mL，回流提取2次，每次2 h，顯色定容后測吸光度A，并計算游離氨基酸的含量，結果表明用70%乙醇提取，氨基酸的含量最高。因此，選用70%的乙醇作為提取溶劑。

2.4料液比的選擇

精密稱取樣品5份，每份2.000 0 g，按料液比分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30，分別加入70%的乙醇進行回流提取，按實驗方案顯色定容后測吸光度A，并計算總氨基酸的含量，結果顯示料液比為1∶15時提取效率最高。因此，選取料液比為1∶15。

2.5回流時間的選擇

精密稱取樣品4份，回流提取時間分別為2、3、4、5 h，按實驗方案顯色后，定容測吸光度A，并計算樣品中氨基酸的含量，結果表明回流4 h氨基酸含量最高。

2.6緩沖溶液用量的選擇

按照試驗方法，在其他條件不變的情況下，以0.5 mL為梯度，改變磷酸鹽緩沖溶液的用量，測定其吸光度。結果表明用量在1.00 mL時吸光度最大，因此選取磷酸鹽緩沖溶液的用量為1.00 mL。

2.7茚三酮溶液用量的選擇

按照試驗方法，在其他條件不變的情況下，以0.5 mL為梯度，改變茚三酮溶液的用量，測定其吸光度，結果表明用量在1.00 mL時吸光度最大，因此茚三酮溶液的用量為1.00 mL。

2.8精密度實驗

精確量取樣品溶液1.00 mL，按實驗方案在565 nm處連續(xù)測定7次，吸光度值分別為0.489、0.491、0.492、0.492、0.491、0.491，0.490，RSD=0.2%，結果表明實驗精密度良好。

2.9穩(wěn)定性實驗

精確量取樣品溶液1.00 mL，按實驗方案在565 nm處每隔10分鐘測一次吸光度值，連續(xù)測定7次，吸光度值分別為0.491、0.491、0.492、0.490、0.491、0.489、0.491，RSD=0.2%。結果表明樣品溶液在1 h內比較穩(wěn)定。

2.10回收率實驗

采用標準加入法測定氨基酸的回收率。結果見表1，平均回收率為99.5%，RSD=2.9%，表明該方法準確可靠。

表1　加標回收率（n=6）Table 1The recovery of standard addition

2.11樣品液對實驗結果的影響

由于樣品液本身具有一定的顏色，在進行紫外測定時空白液里也需要加入相同體積的樣品液，提高測定的準確度。

2.12氨基酸標準曲線

精取0.10 mg/mL酪氨酸對照液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 mL，各加2%茚三酮溶液1.00 mL，緩沖液1.00 mL，水浴加熱15 min，取出，冷卻，用蒸餾水定容至50 mL在565 nm處測吸光度。以酪氨酸濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，見圖1。

圖1　氨基酸標準曲線圖Fig.1The standard curve of amino acid

曲線的線性回歸方程：A=0.035 2C-0.006 5相關系數R=0.999 3。氨基酸含量在2 mg/mL～12 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.13測定結果

取待測樣品粉末3份，各2.000 0 g，加入70%乙醇30 mL后，回流提取2次，回流4 h，合并濾液，濃縮回收乙醇，浸膏用蒸餾水加熱溶解，定容至50 mL，制備成編號為1、2、3號樣品液。分別取1.00 mL，加入1.00 mL pH=6.8的磷酸鹽緩沖液、1.00 mL的顯色液，搖勻后放在沸水浴中加熱15 min。取出快速冷卻后，加水定容至50 mL，放置10 min。在565 nm處，以試劑空白溶液作參比，測定吸光度（A）。測定結果按參考公式［8］計算，結果見表2。

表2　樣品測定結果Table 2Determination results of samples

人參果中氨基酸的平均含量為10.45 mg/g，RSD= 0.8%。實驗證明人參果中含有豐富的氨基酸，用紫外分光光度法測定人參果中氨基酸的含量，此方法簡便、快捷，回收率好。

3結論

人參果中富含大量蛋白質、氨基酸、維生素等營養(yǎng)成分，本文采用紫外分光光度法測定人參果中游離氨基酸的含量，方法簡便、快捷，準確。藥理研究表明單體成分在保肝、增強免疫功能、抗氧化等方面作用很明顯，保健價值頗高，對其開發(fā)利用潛力巨大。

［1］閔光寧，鹿瓊，閔光濤，等.蕨麻多糖的提取及對急性肝損傷的保護作用［J］.蘭州大學學報（醫(yī)學版），2008，34（2）：5-7

［2］陳炅然，胡庭俊，程富勝，等.蕨麻多糖的免疫藥理實驗研究［J］.獸藥與飼料添加劑，2005，10（5）：1-2

［3］謝學淵，王強.蕨麻提取物抗衰老作用研究［J］.重慶醫(yī)學，2007，36（8）：734-736

［4］鐵桂春，劉紅獻.人參果的特性及應用價值［J］.現代農業(yè)科技，2007，12（10）：43-45

［5］李棟元，毛東風，楊具田，等.蕨麻營養(yǎng)成分測定與分析［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2007（3）：43-44

［6］褚良，王立波，張哲，等.藏藥蕨麻的化學成分研究［J］.中國現代中藥，2008，10（3）：10-12

［7］范婉萍，吳婕.用分光光度法測定含氨基酸類制品中的氨基酸含量［J］.中國測試技術，2007，33（3）：117-119

［8］楊永壽，肖培云，劉光明.蜚蠊藥材質量控制方法研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2008，19（8）：1808-1809

Determination of the Amino Acids in the Ginseng

YANG Kui-hua，BIAN Qing-quan，Lü Rui，QIN Xiao-liu
（Mianyang Normal University department of Chemistry and Chemical Engineering，Mianyang 621000，Sichuan，China）

To determine the amino acids in the ginseng.Single factor test was employed to optimize the extracting condition of the amino acids，afterward，the amino acids were determined by UV after colored with ninhydrin.The optimal extracting method was：70%alcohol was employed as the extracting agent，with the solid-liquid ratio of 1∶15，the amino acids was extracted for twice of 4 hours，and then the content was detected by UV at 565 nm.It shows that the standard curve equation was A=0.035 2C-0.006 5 with the correlation coefficient of 0.999 3，which explained the amino acids had an good liner relationship between 2 μg/mL-12 μg/mL at the detection wavelength of 565 nm.The recovery was 99.5%with the RSD of 2.9%，which implied a high reliability，precision and accuracy of this method.

Ginseng；amino acids；spectrophotometry；content

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.11.030

2013-12-05

四川省教育廳自然科學基金項目（12ZA081）

楊葵華（1963—），女（漢），副教授，本科，主要從事食品化學的教學與研究。