吳建萍等

[摘要] 目的 觀察尼美舒利（Nim）與吡那地爾（Pin）對(duì)豚鼠心乳頭肌動(dòng)作電位和收縮力的影響。 方法 選取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供的符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的健康豚鼠54只，將其隨機(jī)分為6組，溶劑對(duì)照組（DMSO組）、Pin 1 μmol/L組、Pin 10 μmol/L組、Nim 1 μmol/L組、Nim 3 μmol/L組、Nim 10 μmol/L組，每組各9只豚鼠。每組取豚鼠右心室乳頭肌，用氧飽和的Tyrode液30 mL持續(xù)表面灌流，溫度（37±1）℃，平衡30 min后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別用不同濃度的Nim（1、3、10 μmol/L）和Pin（1、10 μmol/L）進(jìn)行灌流。用標(biāo)準(zhǔn)微電極技術(shù)記錄豚鼠心乳頭肌細(xì)胞動(dòng)作電位復(fù)極20%（APD20）、復(fù)極50%（APD50）、復(fù)極90%（APD90）的時(shí)間，同步記錄乳頭肌收縮力。再用無(wú)藥臺(tái)氏液沖洗120 min，觀察結(jié)果。 結(jié)果 Nim 3 μmol/L、Nim 10 μmol/L和Pin 10 μmol/L可顯著縮短豚鼠心乳頭肌細(xì)胞APD20、APD50、APD90的時(shí)間。二者對(duì)0相最大上升速度和收縮力均無(wú)明顯影響。用無(wú)藥臺(tái)氏液沖洗120 min后，被Nim縮短的動(dòng)作電位時(shí)程可恢復(fù)至給藥前水平。 結(jié)論 Nim可顯著縮短豚鼠心乳頭肌動(dòng)作電位時(shí)程，且此效應(yīng)可逆，對(duì)收縮力無(wú)影響。

[關(guān)鍵詞] 尼美舒利；心乳頭肌；動(dòng)作電位；收縮力

[中圖分類號(hào)] R962 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）10（a）-0026-04

Effect of Nimesulide on action potential and contraction force of guinea pig papillary muscles

WU Jianping1 HU Yan2 JIN Manwen2 LIU Linghua1 LIU Haixia1

1.Pharmacology Teaching and Research Section， Hubei College of Chinese Medicine， Hubei Province， Jingzhou 434100， China； 2.Department of Pharmacology， Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology， Hubei Province， Wuhan 430030， China

[Abstract] Objective To investigate the effect of Nimesulide （Nim） and pinacidil （Pin） on action potential and contractile force of guinea pig papillary muscles. Methods 54 guinea pigs of experimental standard were selected from Department of Laboratory Animal in Tongji Medical College， they were randomly divided into six groups， the solvent control group （DMSO group）， Pin 1 μmol/L group， Pin 10 μmol/L group， Nim 1 μmol/L， Nim group 3 μmol/L group， Nim 10 μmol/L group， and 9 guinea pigs in each group. Each guinea pig papillary muscle were provided with 30 mL oxygen-saturated Tyrode， the temperature was （37±1）℃， continuous superfusion， after equilibration experiments for 30 min， the muscles were perfused with different concentrations of Nim （1， 3， 10 μmol/L） and Pin （1， 10 μmol/L）. The time of repolarization 20% （APD20）， repolarization of 50% （APD50）， repolarization of 90% （APD90） about the action potential duration （APD） of guinea pig papillary muscles were recorded by standard microelectrode， and muscle contractile force were recorded at the same time. The non-drug-tyrode was washed for 120 min and the results were observed. Results The results showed that Nim 3， 10 μmol/L and Pin 10 μmol/L can significantly shorten the time of APD20， APD50， APD90 of the guinea pig papillary muscle cell. Both the contractile force and maximum velocity had no significant influence. After non-drug-tyrode for 120 min， APD was recovered to the level before administration. Conclusion Nim can significantly shorten APD of guinea pig papillary muscles， and the effect is reversible， and has no effect on the contraction.

[Key words] Nimesulide； Papillary muscles；action potential； Contraction force

尼美舒利（Nimesulide，Nim）化學(xué)名為4-硝基-2-苯氧基甲磺酰苯胺是磺酰苯胺的衍生物，是一種選擇性抑制環(huán)氧化酶（COX-2）的非甾體抗炎藥，最新的研究表明尼美舒利還有抗氧化、抑制增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡、抑制血管生成等作用，對(duì)腫瘤有一定的預(yù)防和治療作用[1-2]。目前，非甾體抗炎藥（NSAIDs）是全球處方量最大的藥物之一，在內(nèi)、外、婦、兒科使用廣泛。尼美舒利因其獨(dú)特的藥理作用機(jī)制曾被認(rèn)為是一種有良好發(fā)展前景的胃腸道反應(yīng)少、安全性好的非甾體抗炎藥。近期國(guó)內(nèi)外關(guān)于COX-2抑制劑引起心血管不良反應(yīng)的事件時(shí)有報(bào)道[3-5]，但有關(guān)COX-2抑制劑對(duì)心肌電生理的影響鮮有報(bào)道。本研究采用標(biāo)準(zhǔn)玻璃微電極技術(shù)、同步記錄收縮力的方法，比較分析Nim和吡那地爾（Pinacidil，Pin）對(duì)豚鼠心乳頭肌收縮力和細(xì)胞動(dòng)作電位的影響。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物及模型制作

選取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供的符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的普通級(jí)健康豚鼠54只（合格證號(hào)：00005907），體質(zhì)量（300±50）g，雌雄不限，室內(nèi)動(dòng)物房分籠飼養(yǎng)，統(tǒng)一飼料，自由采食和飲水。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為6個(gè)組：溶劑對(duì)照組，即DMSO組（Dimethyl sulphoxide，二甲基亞砜）、Pin 1 μmol/L組、Pin 10 μmol/L組，Nim 1 μmol/L組、Nim 3 μmol/L組、Nim 10 μmol/L組，每組均為9只。

1.2 主要試劑和儀器

Tyrode液成分：NaCl 137 mmol/L，CaCl2 1.8 mmol/L，KCl 5.4 mmol/L，NaHCO3 11.9 mmol/L，MgCl2 1.05 mmol/L，葡萄糖溶液5.5 mmol/L，NaH2PO4 0.42 mmol/L。pH：7.2～7.4。實(shí)驗(yàn)前新鮮配制Tyrode液1000 mL：首先在容器中加入約600 mL的雙蒸水，將容器置于磁力攪拌器上持續(xù)攪拌。分別稱取葡萄糖溶液和NaHCO3各1.0 g，將其陸續(xù)加入持續(xù)攪拌的容器中。準(zhǔn)確量取儲(chǔ)存液Ⅰ40 mL、儲(chǔ)存液Ⅱ10 mL、儲(chǔ)存液Ⅲ 10 mL，分別依次緩慢加入容器中，加雙蒸水定容至1 L。配成的營(yíng)養(yǎng)液一般保存24 h。Nim、Pin購(gòu)于SIGMA公司（純度≥99%），用DMSO配成儲(chǔ)備液，DMSO在浴槽中的終濃度控制在0.1%以內(nèi)。儀器及設(shè)備離體心肌玻璃浴槽裝置采用超級(jí)恒溫器（HSS-1B型）、程控電刺激器（YC2）、WD-1型微電極拉制儀、微電極放大器、輸入記錄系統(tǒng)（RM6240C型多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)）為成都儀器廠產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

豚鼠心室乳頭肌標(biāo)本的制備[6]：將各組的豚鼠擊昏致死，經(jīng)頸總動(dòng)脈放血后，迅速取出的心臟，置入經(jīng)95%O2+5%CO2混合氣體飽和的Tyrode液中。分離右心室乳頭肌，兩端用3-0絲線結(jié)扎后水平放入1 mL的恒溫浴槽中，一端套在張力換能器的小鉤上，另一端固定在標(biāo)本池中的站柱上。溫度控制在（37±1）℃，用30 mL氧飽和的Tyrode液持續(xù)表面灌流，流速4 mL/min。給予標(biāo)本0.5 g的前負(fù)荷，以波寬3 ms，頻率1 Hz，110%～150%閾電壓的刺激驅(qū)動(dòng)標(biāo)本，記錄乳頭肌的收縮力，平衡30 min后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別用不同濃度的Nim（1、3、10 μmol/L）和Pin（1、10 μmol/L）進(jìn)行灌流其間換液1次。Nim 10 μmol/L組在給藥后再用無(wú)藥Tyrode液進(jìn)行沖洗，觀察APD恢復(fù)時(shí)間。

動(dòng)作電位時(shí)程（action potential duration，APD）的記錄用有芯毛細(xì)管在WD-1型微電極拉制儀進(jìn)一步拉制成玻璃微電極，電極電阻約為10 MΩ，用3 mol/L的KCl溶液充灌。將充灌好的微電極固定在三維操縱器上，插入鉑金絲引導(dǎo)電極。電極入水后調(diào)零，緩慢插入電極，直至引出穩(wěn)定的APD。APD信號(hào)經(jīng)微電極放大器輸入記錄系統(tǒng)。在引出穩(wěn)定的APD圖形30 min后加藥，觀察30 min，每5 min記錄1次。同時(shí)記錄各組豚鼠心肌張力及0相最大速度（Vmax）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Nim、Pin對(duì)豚鼠APD和收縮力的影響

Pin 10 μm組的APD20、APD50、APD90較DMSO組明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；Nim 3 μm組、Nim 10 μm組與DMSO組相比明顯降低，差異均有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）。Nim、Pin對(duì)豚鼠收縮力和Vmax均無(wú)明顯變化（P > 0.05）。結(jié)果提示，Nim 3 μmol/L、Nim 10 μmol/L和Pin 10 μmol/L可顯著縮短豚鼠心乳頭肌細(xì)胞APD20、APD50、APD90的時(shí)間，而對(duì)Vmax和收縮力均無(wú)明顯影響。見(jiàn)表1、圖1。

2.2 Nim對(duì)豚鼠心乳頭狀肌APD縮短的作用可逆

豚鼠心乳頭狀肌在給予Nim 10 μmol/L后，用無(wú)藥的Tyrode液進(jìn)行了沖洗，沖洗結(jié)果顯示，APD縮短的各指標(biāo)經(jīng)過(guò)沖洗120 min后，基本恢復(fù)到給藥前水平。這表明了Nim對(duì)豚鼠心乳頭狀肌APD縮短的這一作用是可逆的，是可以洗脫的。見(jiàn)圖2。

3 討論

Nim屬非甾體抗炎藥，據(jù)美國(guó)食品藥品管理局報(bào)道[7-8]：針對(duì)多種COX-2選擇性或非選擇性非甾體類抗炎藥持續(xù)時(shí)間達(dá)3年的臨床試驗(yàn)顯示，Nim可能引起嚴(yán)重的不良事件、中風(fēng)和心肌梗塞的風(fēng)險(xiǎn)增加，且其風(fēng)險(xiǎn)性可能是致命的。所有的非甾體類抗炎藥，都可能有相似的風(fēng)險(xiǎn)[9]。其中有心血管疾病危險(xiǎn)因素或心血管疾病的患者，會(huì)有更大的風(fēng)險(xiǎn)。即使患者既往沒(méi)有心血管癥狀，醫(yī)生和患者也要警惕該類事件的發(fā)生發(fā)展。醫(yī)生應(yīng)告知患者嚴(yán)重心血管安全性的癥狀、體征以及如果發(fā)生應(yīng)采取的措施、步驟；患者應(yīng)警惕諸如胸痛、無(wú)力、氣短、言語(yǔ)含糊等癥狀和體征，而且當(dāng)有任何上述癥狀或體征發(fā)生后應(yīng)立刻尋求醫(yī)生幫助。