韓勇李英王海洲

（1，山東省日照市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276800；2，山東省五蓮縣畜牧獸醫(yī)局 262300；3，山東省日照市畜牧站 276800）

日照麻雞禽白血病凈化技術(shù)試驗(yàn)

韓勇1李英2王海洲3

（1，山東省日照市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 276800；2，山東省五蓮縣畜牧獸醫(yī)局 262300；3，山東省日照市畜牧站 276800）

根據(jù)某公司禽白血?。ˋLV）流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，本試驗(yàn)參考國(guó)際ALV凈化方案，針對(duì)禽白血病在日照麻雞上流行的特點(diǎn)，開(kāi)展了禽白血病的凈化研究。經(jīng)過(guò)一個(gè)世代的凈化，雞群的p27抗原陽(yáng)性率由11.2%下降到5.5%，A/B抗體陽(yáng)性率由4.5%下降到0，J抗體陽(yáng)性率由1.7%下降到0，病毒分離陽(yáng)性率由4.5%下降到0.2%。以上結(jié)果表明通過(guò)凈化程序的實(shí)施，雞群ALV陽(yáng)性率大幅下降，凈化效果成效顯著。

禽白血病；疫病凈化；抗原檢測(cè)；差異；日照麻雞；試驗(yàn)

禽白血?。ˋvian leucosis，AL）是由反轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae）禽白血病/肉瘤病毒群（Avian leucosis/sarcoma virus）引起的以造血細(xì)胞增生為主的一類(lèi)腫瘤性疾病，包括淋巴細(xì)胞性白血病、成紅細(xì)胞性白血病、成髓細(xì)胞白血病和髓細(xì)胞性白血病[1]。該病是當(dāng)前嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的重要疫病之一。病毒可通過(guò)種群的種蛋垂直傳播給后代。該病尚無(wú)疫苗可供使用，其預(yù)防控制措施主要依賴(lài)種群的凈化措施[2]。

日照麻雞是一個(gè)歷史悠久、遺傳性能穩(wěn)定的優(yōu)良地方品種，它具有體型小、肉質(zhì)風(fēng)味好、產(chǎn)蛋量較高、蛋品質(zhì)好、覓食能力強(qiáng)、抗病力和適應(yīng)性強(qiáng)等突出特點(diǎn)，是一個(gè)十分寶貴的地方品種資源。1977年被列為山東省地方畜禽良種，2009年被山東省畜牧獸醫(yī)局列入《山東省畜禽遺傳資源保護(hù)名錄》。其中心產(chǎn)區(qū)為膠南市南部與日照市東北部相連接的沿海一帶，分布于膠南、東港區(qū)、五蓮等縣。上世紀(jì)八、九十年代，由于外來(lái)品種的引進(jìn)和雜交改良，日照麻雞感染禽白血病的病例報(bào)道逐漸增多，楊鳳等在山東采集255份蘆花、日照麻雞等地方品種，P25抗原陽(yáng)性率為50.98%，采集41份病料用PCR檢測(cè)，33份呈ALV-J陽(yáng)性（80.49%）[3]。隨著致病力極強(qiáng)的ALV-J的出現(xiàn)并廣為傳播，加之該病又無(wú)疫苗免疫，感染禽白血病雞群不斷出現(xiàn)患病死亡雞、生產(chǎn)性能下降和免疫抑制，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重?fù)p害[4]。因此，開(kāi)展日照麻雞禽白血病凈化工作刻不容緩。

自2010年以來(lái)，日照市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心選擇某自繁自養(yǎng)原種雞場(chǎng)，參照國(guó)際禽白血病凈化標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合日照麻雞特點(diǎn)進(jìn)行了禽白血病凈化探索試驗(yàn)，并取得了較好的成效。

1 材料與方法

1.1 主要檢測(cè)試劑和儀器

ALV p27抗原檢測(cè)試劑盒、ALV A/B亞群抗體檢測(cè)試劑盒、ALV J亞群抗體檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司；酶標(biāo)儀購(gòu)于美國(guó)伯樂(lè)公司，DF1細(xì)胞為本室保存。

1.2 檢測(cè)方法

ALV p27抗原檢測(cè)、ALV A/B亞群抗體檢測(cè)、ALV J亞群抗體檢測(cè)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 凈化程序

根據(jù)對(duì)該公司麻雞ALV流行病學(xué)調(diào)查，研究出日照麻雞ALV感染的3個(gè)敏感期，按程序進(jìn)行凈化。

1.3.1 后備種雞檢測(cè)（6周齡）

采集6周齡雞血漿，分離培養(yǎng)ALV。選出陰性雞，隔離飼養(yǎng)，作為后備種雞。

1.3.2 初產(chǎn)種雞檢測(cè)（23周齡）

選擇每只種雞開(kāi)產(chǎn)蛋，取蛋清的混合樣品，用ELISA方法檢測(cè)蛋清中的p27抗原，淘汰抗原陽(yáng)性雞。其余雞采集血漿接種DF-1細(xì)胞分離病毒，用ELISA方法檢測(cè)p27抗原，淘汰陽(yáng)性雞。

1.3.3 種雞檢測(cè)（43周齡）

選擇每只種雞蛋，取蛋清的混合樣品，用ELISA方法檢測(cè)蛋清中的p27抗原，淘汰抗原陽(yáng)性雞。其余雞采集血漿檢測(cè)p27抗原、ALV A/B亞群抗體、ALV J亞群抗體，檢測(cè)陰性的接種DF-1細(xì)胞分離病毒，用ELISA方法檢測(cè)p27抗原，淘汰陽(yáng)性雞。

1.3.4 雛雞檢測(cè)

收集陰性種雞的種蛋，同一只種雞來(lái)源的種蛋放在一起，分群孵化。采集全部1日齡雛雞的胎糞，檢測(cè)p27抗原。有一只雛雞為陽(yáng)性，則同一種雞來(lái)源的雛雞均判為陽(yáng)性，不作種用。

連續(xù)進(jìn)行多個(gè)世代種雞的ALV檢測(cè)與凈化，直至p27抗原、A-B亞群抗體和J亞群抗體達(dá)到凈化標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

（1）分別對(duì)零世代的核心群進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查后進(jìn)行凈化，結(jié)果見(jiàn)表1。

（2）2.2對(duì)第一世代的日照麻雞種雞群的拭子、血清和全血進(jìn)行p27抗原、血清學(xué)抗體及病毒分離的檢測(cè)，結(jié)果顯示經(jīng)過(guò)一個(gè)世代的凈化，禽白血病的感染率大幅下降。

（3）核心群凈化效果評(píng)估。經(jīng)過(guò)一個(gè)世代的凈化淘汰，雞群的p27抗原、A/B亞群抗體、ALV J抗體、病毒分離陽(yáng)性率較零世代均有顯著下降。

表1 零世代種雞群ALV凈化檢測(cè)結(jié)果（單位：%）

表2 第一世代種雞群ALV感凈化檢測(cè)結(jié)果（單位：%）

3 討論

（1）采用ALV p27抗原檢測(cè)、ALV A/B亞群抗體檢測(cè)、ALV J亞群抗體檢測(cè)、病毒分離等方法分別對(duì)相同個(gè)體進(jìn)行檢測(cè)，不同方法的檢測(cè)結(jié)果存在差異。因此，單獨(dú)使用一種方法對(duì)雞群進(jìn)行檢測(cè)，診斷結(jié)果是不可靠的，因此，應(yīng)在經(jīng)濟(jì)條件允許的情況下，同時(shí)使用至少2種不同檢測(cè)方法[5]。本試驗(yàn)在國(guó)際金標(biāo)準(zhǔn)p27抗原檢測(cè)基礎(chǔ)上，在43周檢測(cè)時(shí)段增加了p27抗原、ALV A/B亞群抗體和ALV J亞群抗體檢測(cè)，最大限度的提高檢測(cè)的敏感性，剔除陽(yáng)性感染雞，成效顯著。

（2）根據(jù)不同雞群調(diào)查ALV的感染水平，并選擇合適的監(jiān)測(cè)時(shí)間段尤為重要。本試驗(yàn)對(duì)前期雞群ALV流行病學(xué)調(diào)查選擇了6周齡、22周齡和43周齡3個(gè)敏感點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，分析雞群的排毒情況。

（3）由于本技術(shù)方法尤其是病毒分離對(duì)技術(shù)要求較高，成本高，一定程度上限制了本技術(shù)的推廣。因此，探索適合我國(guó)國(guó)情的凈化檢測(cè)方法，逐步實(shí)現(xiàn)禽白血病在我國(guó)的凈化勢(shì)在必行。

[1]卡爾尼克 BW.禽病學(xué)[M].第10版.高福,蘇敬良,譯.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,1999.

[2]吳天威,林光津,等.廣西麻雞白血病凈化研究初報(bào)[J].廣西畜牧獸醫(yī),2011,27（1）:6-7.

[3]楊鳳,孫洪磊,倪偉,等.山東不同品系蛋雞禽白血病流行病學(xué)調(diào)查[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2011,42（5）:696-703.

[4]Fairfull R W,Garwood V A,Spencer J L,et al.The effects of geographical area,rearing method,caging density and lymphoid leucosis infection on adult performance in egg stocks of chicken[J].Poult Sci,1983,62:2360-2370.

[5]秦愛(ài)建.禽白血病防控的思考[J].中國(guó)家禽,2011,33（12）:37.

韓勇（1980.9-），男，漢族，山東省日照市人，預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物傳染病和動(dòng)物分子生物學(xué)。