堿性成纖維細(xì)胞生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子-β與病理性近視的相關(guān)研究

李雯霖何愛群卓 曉林海波陳慕丹

1.深圳市龍華新區(qū)中心醫(yī)院，廣東深圳 518000；2.深圳市兒童醫(yī)院，廣東深圳 518000

堿性成纖維細(xì)胞生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子-β與病理性近視的相關(guān)研究

李雯霖1，2何愛群1卓 曉1林海波1陳慕丹1

1.深圳市龍華新區(qū)中心醫(yī)院，廣東深圳 518000；2.深圳市兒童醫(yī)院，廣東深圳 518000

目的 探討病理性近視患者bFGF和TGF-β的表達(dá)水平。 方法 對(duì)我院門診就診的病理性近視患者、非病理性近視患者和正常對(duì)照組的bFGF和TGF-β的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，探討其在病理性近視患者和非病理性近視患者中的表達(dá)強(qiáng)度。 結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，病理性近視和非病理性近視患者血中bFGF表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組，而這兩組患者血中TGF-β的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論 bFGF和TCF-β可能在病理性近視的發(fā)生發(fā)展過程序中發(fā)揮著一定的作用。

堿性成纖維細(xì)胞生長因子；轉(zhuǎn)化生長因子β；病理性近視

病理性近視（pathological myopia，PM）是指屈光度在-6.00D以上的一種變性近視。流行病學(xué)研究結(jié)果表明，在世界范圍內(nèi)，病理性近視的患病率為1.7%～2.1%，無論是東亞國家還是西方人群，病理性近視的發(fā)病率都有明顯增加[1]。我國近視人口數(shù)已超過3億，其中病理性近視的發(fā)病率約為1%。隨著病理性近視的不斷發(fā)展，常常發(fā)生特征性的眼后極部改變，包括視網(wǎng)膜下或脈絡(luò)膜新生血管膜[2]、Fuchs斑、近視性黃斑病變[3]，后鞏膜葡萄腫、漆樣裂紋等病變，亦可發(fā)生白內(nèi)障、青光眼、視網(wǎng)膜脫離和玻璃體混濁等多種并發(fā)癥，是導(dǎo)致眼視功能損害的重要原因之一。因此對(duì)病理性近視的防治已引起眼科同仁的高度重視。為從根本上防治病理性近視，減少病理性近視的發(fā)生，揭示病理性近視的發(fā)生機(jī)制已成為目前眼科醫(yī)師需要迫切解決的問題。本課題擬研究病理性近視的患兒血清中堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor， bFGF）和轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor，TGF-β)的水平，從而初步探討bFGF和TGF-β在病理性近視發(fā)病中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月～2014年12月收集病理性近視患者50例，符合病理性近視的診斷標(biāo)準(zhǔn)，非病理性近視患者50例，正常對(duì)照組50例，為雙眼視力正常，無屈光不正兒童。兩組對(duì)照組年齡與患者組匹配。

1.2儀器與試劑

bFGF和TG-β均采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行檢測。ELISA 檢測試劑盒購置于晶美生物公司。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。細(xì)胞因子單位為pg/mL。

1.3方法1.3.1 標(biāo)本采集 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均常規(guī)采集外周靜脈血8mL，其中2mL用于分離血清，-80℃凍存?zhèn)溆谩?mL用肝素抗凝，用于分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。

1.3.2采用ELISA法檢測血中bFGF和TGF-β的表達(dá)水平 細(xì)胞裂解儀上裂解實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞。將裂解液低溫高速離心，上清液分裝，-20℃保存待用。ELISA法檢測血中TGF-β和bFGF含量。操作按試劑盒說明書，具體步驟如下：（1）包被：用包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/mL。每個(gè)聚本乙稀板的反應(yīng)孔中加0.1mL，4℃過夜，次日棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3min。（2）加樣：加一定稀釋的上清液0.1mL于上述已包被的反應(yīng)孔中，置37℃孵育1h，然后洗滌，同時(shí)做對(duì)照組。（3）加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體0.1mL，37℃孵育1h，然后洗滌。（4）加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配置的TMB底物溶液0.1mL，37℃孵育30min。（5）終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05mL。（6）檢測結(jié)果：在ELISA檢測儀上，450nm處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值2.1倍，即為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)和方差分析，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

血中bFGF和TGF-β的表達(dá)：與正常對(duì)照組比較，病理性近視和非病理性近視患者血中bFGF表達(dá)明顯低于正常對(duì)照組，而這兩組患者血中TGF-β的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見下表1。

表1　bFGF和TGF-β在血清中的表達(dá)水平

表1　bFGF和TGF-β在血清中的表達(dá)水平

組別　bFGF　TGF-β病理性近視組　103.28±14.87　142.81±10.75非病理性近視組　203.18±11.27　76.59±10.11正常對(duì)照組　269.68±15.56　4.37± 0.21 F 96.72　148.65 P 0.00　0.00

3　討論

病理性近視發(fā)生、發(fā)展機(jī)制至今尚未完全明了。近年來關(guān)于近視的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，在誘導(dǎo)近視發(fā)生的雞眼內(nèi)，鞏膜及視網(wǎng)膜組織的bFGF和TGF-β水平發(fā)生變化，并影響體外培養(yǎng)的雞鞏膜成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的增殖。這些結(jié)果表明，一定濃度的bFGF和TGF-β可能影響雞的實(shí)驗(yàn)性近視眼的發(fā)生，bFGF、TGF-β可能作為信號(hào)分子參與了近視的發(fā)生和發(fā)展[4-5]。bFGF作為成纖維細(xì)胞生長因子家族中的重要一員，能促進(jìn)多種細(xì)胞的生長、增殖和分化，并具有維持神經(jīng)元存活及神經(jīng)營養(yǎng)、調(diào)控細(xì)胞凋亡、促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖改善傷口愈合[6]等多種生物學(xué)作用。bFGF還參與細(xì)胞外基質(zhì)的形成，可誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，促進(jìn)血管生成[7-9]。

TGF-β家族成員包括TGF-β1，TGF-β2和TGF-β3三種類型，是一類具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、和遷移的多功能細(xì)胞因子[10]，TGF-β對(duì)細(xì)胞的生長、分化具有雙向調(diào)節(jié)作用[11]。研究發(fā)現(xiàn)TGF-β參與免疫反應(yīng)和損傷修復(fù)等重要的病理生理過程，是細(xì)胞外基質(zhì)的調(diào)節(jié)因子，可增強(qiáng)膠原的合成，減少基質(zhì)的降解，從而導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的沉積[12]，影響免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的促炎或抗炎反應(yīng)[13]，促進(jìn)骨折愈合[10]。

bFGF和TGF-β是怎樣影響實(shí)驗(yàn)性近視？Rohrer等[14]研究發(fā)現(xiàn)，bFGF可能通過神經(jīng)遞質(zhì)的相互作用在與眼生長相關(guān)的神經(jīng)通路中影響突觸的活性或傳遞而在近視的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮作用。Seko等[15]在形覺剝奪性的近視研究表明bFGF在FDM眼后極部鞏膜組織的含量明顯低于對(duì)照組，而與對(duì)照組比較在鞏膜組織和視網(wǎng)膜—視網(wǎng)膜色素上皮—脈絡(luò)膜復(fù)合體中TGF-β2含量明顯增加，表明TGF-β2可能在高度近視的發(fā)展過程中起著重要作用[16]。Mao J等[4]在雞的形覺剝奪性近視的研究表明玻璃體腔注射bFGF除了能有效改善近視眼眼軸的過度生長，還能顯著降低視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞凋亡的數(shù)量和下調(diào)caspase-3活性。Chen等[5]對(duì)豚鼠實(shí)驗(yàn)性近視模型的研究發(fā)現(xiàn)，后極部鞏膜組織的TGF-β2含量明顯增加，隨著實(shí)驗(yàn)性近視誘導(dǎo)時(shí)間的延長，TGF-β2含量在眼球所有鞏膜組織中均增加，于此相反，bFGF的含量在所有鞏膜組織中均普遍下降。這些結(jié)果表明，在近視發(fā)展過程中TGF-β2可能直接對(duì)近視的發(fā)展產(chǎn)生作用，而bFGF可能間接影響近視的發(fā)生

本研究是以臨床病理性近視患者和非病理性近視患者作為研究對(duì)象，與正常對(duì)照組比較，病理性近視患者和非病理性近視患者血中bFGF明顯低于正常對(duì)照組，而TGF-β的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明我們對(duì)臨床患者的研究與上述實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果一致，因此我們推測bFGF和TGF-β在人類近視尤其是病理性近視的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用，但其作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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The related research on bFGF and TGF-β with pathological myopia

LI Wenlin1，2HE Aiqun1ZHUO Xiao1LIN Haibo1CHEN Mudan1
1.Department of Ophthalmology，Shenzhen Longhua New District Central Hospital,Shenzhen 518000,China; 2.Department of Ophthalmology,Shenzhen Children Hospital,Shenzhen 518000,China

Objective To explore the expression of bFGF and TGF-β and the relationship with pathological myopia. Methods The level of bFGF and TGF-β were detected in patients with pathological myopia and nonpathological myopia and healthy controls. Results The expression level of bFGF were lower in patients with pathological myopia than non-pathological myopia andhealthy controls,and the expression level of TGF-β were higher in patients with pathological myopia than non-pathological myopia and healthy controls,the difference was significant(P＜ 0.01). Conclusion Conclusion bFGF and TGF-β may play a certain role in the occurrence and development of pathological myopia.

Basic fibroblast growth factor(bFGF );Transforming growth factor-β(TGF-β);Pathological myopia

R329

B

2095-0616（2015）10-192-03

廣東省深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目（201302104）。

（2015-03-23）