王海濱 張冬青 陳 趙 嬌

（解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100048）

乙型病毒性肝炎患者HBV-DNA與乙肝標(biāo)志物和肝功能指標(biāo)關(guān)系的分析

（解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100048）

目的：探討慢性乙型病毒性肝炎（乙肝）患者乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）定量檢測水平與乙肝標(biāo)志物和肝功能指標(biāo)之間的關(guān)系。方法：采用實(shí)時熒光定量-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）方法檢測2 374例慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清中HBV-DNA含量，用電化學(xué)發(fā)光免疫分析方法檢測慢性乙肝患者血清乙肝標(biāo)志物，用全自動生化分析儀檢測血清肝功能指標(biāo)。結(jié)果：2 374例慢性乙肝患者血清中HBV-DNA陽性率為45.4%（1 078例），HBeAg的檢出率為29.6%（704例）；501例HBsAg(+)、HBeAg(+)、 HBcAb(+)模式的患者HBV-DNA檢出率達(dá)75.4%（378例），1 586例HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式的患者HBV-DNA檢出率為34.3%（544例）。與HBV-DNA陰性組比較，HBV-DNA陽性組的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、α-L-巖藻糖苷酶（AFU）的水平均明顯升高（P＜0.05），且其水平隨著病毒復(fù)制量的增加而增加。結(jié)論：在反映HBV復(fù)制方面，HBV-DNA的陽性率明顯高于HBeAg，因此應(yīng)定期進(jìn)行血清HBV-DNA的定量檢測，評估病毒的復(fù)制情況，同時檢測血清ALT、AST、AFU水平，以盡早發(fā)現(xiàn)肝功能的損害，達(dá)到早期治療的目的。

肝炎，乙型，病毒性 乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸 肝功能 α-L-巖藻糖苷酶

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）屬嗜肝細(xì)胞DNA病毒科，由其所導(dǎo)致的乙型病毒性肝炎（乙肝）是我國最為常見的傳染性疾病之一。HBV血清學(xué)標(biāo)志物的檢測是目前診斷乙肝最常用的指標(biāo)。臨床上常常把乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）作為乙肝患者抗病毒治療監(jiān)測指標(biāo)之一[1]，但是大量數(shù)據(jù)顯示血清HBeAg不能如實(shí)反映體內(nèi)HBV復(fù)制的變化。乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸（HBV-DNA）是判斷HBV復(fù)制活動的最直接也是最準(zhǔn)確的依據(jù)。血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase, AST）被認(rèn)為是肝細(xì)胞損傷最敏感的指標(biāo)。α-L-巖藻糖苷酶（α-L-fucosidase, AFU）是一種溶酶體酸性水解酶，在肝、腎等組織中活性較高，與HBV感染密切相關(guān)。本研究中對乙肝患者HBV-DNA含量與血清學(xué)標(biāo)志物、肝功能指標(biāo)的檢測意義進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2012年1月—2015年1月來我院就診的慢性乙肝患者2 374例；診斷標(biāo)準(zhǔn)符合中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南2010年更新版》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，除外甲、丙、丁、戊型肝炎患者，其他原因引起的肝功能損害以及心肺功能不全的患者。其中男1 637例，女737例，年齡30～66歲，平均（46.53±14.59）歲。選擇同期無HBV感染的健康體檢者50例作為對照組，其中男33例，女17例；年齡29～62歲，平均（45.86±14.54）歲。兩組間性別、年齡比較，差異無顯著性（P＞0.05），具有可比性。所有患者均抽取晨空腹靜脈血5 ml，室溫靜置，待血液完全凝固后離心分離取血清，3 500 r/min 離心10 min，2～8 ℃冰箱保存，48 h內(nèi)完成血清HBV-DNA、血清學(xué)標(biāo)志物、ALT、AST和AFU的檢測。

1.2 檢測方法

1.2.1 血清HBV-DNA的定量測定 HBV-DNA定量檢測試劑盒由上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供，基于TaqMan探針實(shí)時熒光PCR技術(shù)，操作嚴(yán)格按照說明書，檢測采用羅氏LightCycler480Ⅱ型實(shí)時定量PCR檢測儀，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)立5種HBV-DNA標(biāo)準(zhǔn)品，濃度分別為3.0×107、3.0×106、3.0×105、3.0×104、3.0×103IU/ml，并且設(shè)陰性、陽性對照，最低定量限為1.0×102IU/ml，大于5.0×102IU/ml為陽性結(jié)果。

1.2.2 血清學(xué)標(biāo)志物的檢測 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、表面抗體（HBsAb）、HBeAg、e抗體（HBeAb）和核心抗體（HBcAb）均采用電化學(xué)發(fā)光免疫進(jìn)行分析，試劑盒由羅氏診斷產(chǎn)品有限公司提供，采用Roche cobas 6000分析儀進(jìn)行檢測，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.3 血清ALT、AST、AFU的檢測 應(yīng)用日本HITACHI公司7600全自動生化分析儀進(jìn)行檢測，ALT、AST測定試劑盒由北京德曼公司提供，采用連續(xù)監(jiān)測法進(jìn)行檢測，AFU試劑由四川邁克科技有限責(zé)任公司提供，采用MG-CNPF法測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)用x±s表示，兩組正態(tài)分布計(jì)量資料均數(shù)比較用t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布計(jì)量資料數(shù)據(jù)以中位數(shù)表示；計(jì)數(shù)資料以率表示，結(jié)果差異比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 不同血清學(xué)模式乙肝患者HBV-DNA檢測結(jié)果 在2 374例慢性乙肝患者中，共有1 078例HBV-DNA陽性, 陽性率45.4%。將慢性乙肝患者的血清學(xué)模式分為以下4種（表1）：①HBsAg(+)、HBeAg(+)、 HBcAb(+)模式：即“大三陽”，共501例（21.1%），HBVDNA陽性率達(dá)75.4%，HBV-DNA平均含量為2.2×108IU/ml。本血清模式存在病毒高復(fù)制狀態(tài)。②HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式，即“小三陽”，共1 586例（66.8%），HBVDNA陽性率為34.3%，HBV-DNA平均含量為4.2×106IU/ml。說明有部分HBeAg轉(zhuǎn)陰患者存在病毒高復(fù)制。③HBsAg(+) 、HBeAg(+) 、HBeAb(+)、HBcAb(+) 模式：203例（8.6%），HBV-DNA陽性率為71.9%，HBV-DNA平均含量為1.8×107IU/ml。④HBsAg(+)、HBcAb(+) ：84例（3.5%），HBV-DNA平均含量為9.5×105IU/ml。見表1。

2.2 HBeAg與HBV-DNA的關(guān)系 以HBV-DNA＞5.0×102IU/ml作為血清HBV-DNA陽性標(biāo)準(zhǔn)，2 374例乙型肝炎患者中HBV-DNA陽性1 078例（45.4%）；HBeAg陽性704例（29.6%），HBeAg陽性率與HBV-DNA陽性率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1 乙肝患者不同血清學(xué)模式HBV-DNA檢測結(jié)果

表2 HBeAg與HBV-DNA檢測結(jié)果（例）

2.3 不同病毒量組的血清ALT、AST、AFU水平的比較 根據(jù)血清HBV-DNA的檢測結(jié)果，將慢性乙肝患者分為4組。與正常對照組比較，慢性乙肝患者的AST、AFU水平均顯著升高（P＜0.05）；與HBV-DNA＜5.0×102IU/ml比較，HBV-DNA＞5.0×102IU/ml患者的ALT、AST、AFU的水平均明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且隨著病毒復(fù)制量的增加，ALT、AST的水平均明顯升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

3 討 論

乙型肝炎病毒檢測常用方式為兩對半（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb），感染后可呈現(xiàn)多種血清學(xué)模式，其中乙肝病毒表面抗原（HBsAg）一直被作為乙型病毒感染管理的依據(jù)[3-4]，乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）的轉(zhuǎn)歸是抗病毒治療最明顯的指標(biāo)，HBV-DNA是反映HBV在體內(nèi)復(fù)制的最準(zhǔn)確的指標(biāo)，但HBsAg與反映病毒復(fù)制的HBV-DNA合成途徑不同，在血清中的表達(dá)不平行[5]。我們回顧性分析了2 374例慢性乙肝患者的臨床資料，發(fā)現(xiàn)HBV感染者中以男性最多見，男性患者是女性的2.22倍，這與文獻(xiàn)報道基本一致[6]。在“大三陽”[HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+) ]和“一三四五陽”[HBsAg(+) 、HBeAg(+) 、HBeAb(+)、HBcAb(+)]的血清學(xué)模式中HBV-DNA陽性率較高，說明這兩組患者體內(nèi)存在HBV高復(fù)制狀態(tài)，而“小三陽”[HBsAg(+)、 HBeAb(+)、HBcAb(+)]和“一五陽”[HBsAg(+) 、HBcAb(+)]模式中HBV-DNA陽性檢出率分別為34.3%和11.9%，病毒復(fù)制數(shù)量較前兩組明顯下降，說明在HBV感染者體內(nèi)HBeAg(+) 向HBeAb(+)轉(zhuǎn)換的過程中，病毒的復(fù)制數(shù)量逐漸降低。通常認(rèn)為HBeAg(+)是HBV復(fù)制活躍的重要指標(biāo)，但是本研究結(jié)果顯示“小三陽”和“一五陽”并不表明HBV復(fù)制的完全終止或病癥的完全消失。但是有部分“大三陽”患者體內(nèi)檢測不出HBV - DNA，可能與HBV突變、HBV與肝細(xì)胞的整合、試劑的敏感性差等相關(guān)[7]；“小三陽”中約有34.3%的患者HBV-DNA陽性，說明HBeAg雖然轉(zhuǎn)陰，但是病毒并沒有停止復(fù)制[8]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，HBeAg陰性，而HBVDNA呈陽性的患者容易并發(fā)肝硬化[9]。因此，用HBV-DNA描述HBsAg(+)患者體內(nèi)病毒復(fù)制情況較HBeAg更為靈敏，乙肝患者血清學(xué)模式必須結(jié)合HBV-DNA檢測才能更加準(zhǔn)確反映機(jī)體的真實(shí)情況。

肝臟組織炎癥活動增強(qiáng)時HBV-DNA載量明顯升高，病毒的活躍復(fù)制可能會導(dǎo)致肝臟組織炎癥反應(yīng)，更易并發(fā)嚴(yán)重疾病，病毒水平的監(jiān)測對病情的判斷具有重要的價值，但是肝組織內(nèi)的病毒含量變化受多種因素影響，如機(jī)體的免疫力、免疫耐受和病毒變異等[10]。ALT、AST可以反映肝內(nèi)炎癥的活動程度，是常用的肝細(xì)胞損傷診斷指標(biāo)， AFU與HBV感染有明顯相關(guān)性，病毒復(fù)制活躍激發(fā)肝臟組織炎癥反應(yīng)，使肝細(xì)胞出現(xiàn)變性、炎性細(xì)胞浸潤和肝臟纖維組織增生，從而使血清ALT、AST和AFU的活性增加。本研究中發(fā)現(xiàn)與HBV-DNA陰性組比較，HBV- DNA陽性組的ALT、AST、AFU的水平均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ALT、AST、AFU水平的檢測還有助于乙肝并發(fā)癥發(fā)展的預(yù)測[11]。

表3 不同病毒量組乙肝患者的ALT、AST、AFU水平的比較

HBV感染可引起各種急、慢性乙肝及肝硬化等疾病，積極有效監(jiān)測并治療乙肝患者的病情是刻不容緩的重要任務(wù)。因此慢性乙肝患者應(yīng)定期進(jìn)行血清HBV-DNA的定量檢測和ALT、AST和AFU水平的檢測，以提高HBV檢出率，了解HBV在體內(nèi)復(fù)制的真實(shí)情況，這對于慢性乙肝患者抗病毒治療方案制定和防止疾病進(jìn)展有重要意義。

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Analysis of the relationship among the serum DNA levels of hepatitis B virus, serum hepatitis B markers, and liver function in patients with chronic hepatitis B

Wang Haibin, Zhang Dongqing, Chen Man, Zhao Jiao.
Department of Clinical Laboratory, the First Hospital Affiliated to the Chinese PLA General Hospital, Beijing 100048, China

Objective: To investigate the relationship among the serum DNA levels of hepatitis B virus (HBV-DNA), serum marker of hepatitis B, and the concentration of alanine aminotransferase (ALT), aspartate transaminase (AST), α-L-fucosidase (AFU) in patient with chronic hepatitis B. Methods: HBV-DNA, serum markers of HBV and liver function (ALT, AST, AFU) were determined in 2 374 patients with chronic hepatitis B. Serum levels of HBV-DNA and serum markers of HBV were determined with real-time polymerase chain reaction and electrochemical luminescence immunoassay, respectively. The indices of liver function were determined by the automatic biochemical analysis instrument. Results: The positive rate of HBV-DNA and HBeAg was respectively 45.4% (1 078 cases) and 29.6% (704 cases) in 2374 patients. The positive rate of HBV-DNA in the patients with HBsAg(+) HBeAg(+)HBcAb(+) was 75.4% (378 cases), and it was 34.3% (544 cases) in patients with HBsAg(+) HBeAb(+) HBcAb(+) . The levels of ALT, AST and AFU in positive HBV-DNA group were significantly higher than those in negative HBV-DNA group (P＜0.05), and their levels were higher with the elevation of the level of HBV-DNA. Conclusions: As an evaluating indicator for replication of hepatitis B virus, the serum level of HBVDNA is more sensitive than that of HBeAg. HBV-DNA should be determined regularly to assess the replication of hepatitis B virus, and ALT, AST and AFU should be determined simultaneously to assess the degree of damage to liver function earlier.

Hepatitis B Hepatitis B virus-DNA Liver function α-L-fucosidase

10. 3969/j. issn. 1672-8521. 2015. 03. 013

2015-05-27）

國家重大科學(xué)儀器設(shè)備開發(fā)專項(xiàng)（2013YQ1904670703）