楊 歡 張美華 蘇忠蘭

Sox10單抗免疫組化檢測(cè)脂溢性角化病和皮膚纖維瘤中黑素細(xì)胞的增殖

楊 歡 張美華 蘇忠蘭?

目的: 明確脂溢性角化病和皮膚纖維瘤中黑素細(xì)胞增殖情況及透明細(xì)胞的性質(zhì)。方法:收集脂溢性角化病52例，皮膚纖維瘤20例，對(duì)其皮損進(jìn)行Sox10(黑素細(xì)胞核特異性染色抗體)免疫組化染色。結(jié)果: 與正常皮膚比較，脂溢性角化病基底層黑素細(xì)胞增多34例，棘層39例和皮膚纖維瘤基底層黑素細(xì)胞增多16例，棘層12例。結(jié)論: 脂溢性角化病和皮膚纖維瘤中黑素細(xì)胞有不同程度增多，部分胞漿透明細(xì)胞為黑素細(xì)胞。

脂溢性角化病； 皮膚纖維瘤； 黑素細(xì)胞； 免疫組化

脂溢性角化病和皮膚纖維瘤是皮膚科常見(jiàn)的良性病變，有的脂溢性角化病和皮膚纖維瘤皮損顏色較深，其表皮內(nèi)會(huì)有較多的色素和胞漿透明細(xì)胞，本文選取皮損顏色較深的脂溢性角化病和皮膚纖維瘤患者，對(duì)石蠟切片進(jìn)行Sox10(黑素細(xì)胞核特異性染色抗體)染色，明確以上兩種病變中黑素細(xì)胞增殖情況及胞漿透明細(xì)胞的性質(zhì)。

1 資料與方法

1.1 臨床標(biāo)本采集 收集表皮內(nèi)有較多色素沉著及胞漿透明細(xì)胞且臨床色素較深的皮膚纖維瘤20例；脂溢性角化病52例，包括:棘層肥厚型、角化型各20例、激惹型、腺樣型各5例，扁平型和克隆型各1例。

1.2 試劑 抗體:Sox10抗體(從美國(guó)Santa cruz公司購(gòu)買)。Sox10為黑素細(xì)胞核染色的抗體，陽(yáng)性為細(xì)胞核顯示褐黑色。復(fù)合痣作為陽(yáng)性對(duì)照(圖1)，正常皮膚作為陰性對(duì)照(圖2)。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化方法 取本院病理科已制備的脂溢性角化病、皮膚纖維瘤及正常皮膚組織石蠟切片，按免疫組化DAB試劑盒步驟操作。

1.3.2 計(jì)數(shù)方法(人工計(jì)數(shù)) 每張組化片中，病變部位和相鄰正常皮膚的基底層選取10個(gè)高倍視野(40倍)，計(jì)總數(shù)后，求平均數(shù)；病變部位平均數(shù)高于正常部位，計(jì)為增多；棘層選取10個(gè)高倍視野(40倍)，有Sox10陽(yáng)性即有黑素細(xì)胞。

2 結(jié)果

2.1 脂溢性角化病黑素細(xì)胞增生情況，見(jiàn)表1。

表1 脂溢性角化病黑素細(xì)胞增生情況

(1)角化過(guò)度型20例，基底層黑素細(xì)胞增多12例(平均每個(gè)高倍視野3.73個(gè)黑素細(xì)胞，正常部位2.29個(gè)黑素細(xì)胞)，13例在棘層有黑素細(xì)胞(平均每個(gè)高倍視野0.44個(gè)黑素細(xì)胞)(圖3)。(2)棘層肥厚型20例，基底層黑素細(xì)胞增多14例(平均每個(gè)高倍視野3.58個(gè)黑素細(xì)胞，正常部位2.27個(gè)黑素細(xì)胞)，20例棘層有黑素細(xì)胞(平均每個(gè)高倍視野3.52個(gè)黑素細(xì)胞)(圖4)。(3)腺樣型5例，基底層黑素細(xì)胞增多

3例(平均每個(gè)高倍視野3.23個(gè)黑素細(xì)胞，正常部位2.13個(gè)黑素細(xì)胞)(圖5)。(4)激惹型5例，基底層黑素細(xì)胞增多4例(平均每個(gè)高倍視野3.65個(gè)黑素細(xì)胞，正常部位2.03個(gè)黑素細(xì)胞)，5例在棘層有黑素細(xì)胞(平均每個(gè)高倍視野4.08個(gè)黑素細(xì)胞)(圖6)。(5)克隆型1例，棘層10個(gè)高倍視野中表皮巢內(nèi)有38個(gè)黑素細(xì)胞(圖7)。(6)扁平型1例，基底層10個(gè)高倍視野中32個(gè)黑素細(xì)胞(圖8)，正常部位10個(gè)高倍視野中19個(gè)黑素細(xì)胞(平均每個(gè)高倍視野3.2個(gè)黑素細(xì)胞，正常部位1.9個(gè)黑素細(xì)胞)。

2.2 皮膚纖維瘤 20例皮膚纖維瘤中，16例(80%)基底層有黑素細(xì)胞增加(平均每個(gè)高倍視野3.78個(gè)黑素細(xì)胞，正常部位2.29個(gè)黑素細(xì)胞)，12例(60%)棘層有黑素細(xì)胞(平均每個(gè)高倍視野0.42個(gè)黑素細(xì)胞)(圖9、10)。

圖1 復(fù)合痣皮損中黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖2 正常皮膚無(wú)黑素細(xì)胞處無(wú)染色(ELPS法，×400)圖3 角化過(guò)度型脂溢性角化病基底層及棘層黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖4 棘層肥厚型脂溢性角化病棘層黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖5 腺樣型脂溢性角化病基底層黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖6 激惹型脂溢性角化病基底層及棘層黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖7 克隆型脂溢性角化病表皮形成的巢中黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400) 圖8 扁平型脂溢性角化病基底層黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)

圖9 皮膚纖維瘤基底層黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)圖10 皮膚纖維瘤棘層黑素細(xì)胞核呈褐黑色(ELPS法，×400)

3 討論

Sox10是細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Sox(Sty－related HMB－box)超家族的一員，細(xì)胞核染色的免疫標(biāo)記，是神經(jīng)嵴衍生細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)黑素細(xì)胞的分化、成熟有重要作用，1在黑素瘤中的表達(dá)為97%～ 100%，2是標(biāo)記黑素細(xì)胞腫瘤非常敏感的指標(biāo)。3Sox10與S－100相比較，敏感性更好，特異性更強(qiáng)，4表皮內(nèi)常見(jiàn)的胞漿透明細(xì)胞包括黑素細(xì)胞和朗格漢斯細(xì)胞，由于朗格漢斯細(xì)胞來(lái)源于骨髓，Sox10在其中不表達(dá)，而且Sox10為細(xì)胞核染色的指標(biāo)，相比其他如S100、HMB－45等對(duì)細(xì)胞漿內(nèi)黑素顆粒染色的抗體，容易辨認(rèn)。5－7在背景中有大量色素，包括細(xì)胞漿都著色的情況下，不需要脫色，也可以確定黑素細(xì)胞，有利于表皮內(nèi)黑素細(xì)胞的準(zhǔn)確診斷。

脂溢性角化病切片進(jìn)行Sox10單抗染色，結(jié)果表明，角化過(guò)度型、棘層肥厚型、激惹型在基底層和棘層均有不同程度的黑素細(xì)胞增多，腺樣型在基底層有黑素細(xì)胞增多；克隆型的增多主要在表皮形成的巢內(nèi)；扁平型在基底層有黑素細(xì)胞增多。有報(bào)道除了腺樣

型以外，在激惹型，非激惹型，克隆型中均有黑素細(xì)胞的增殖，8與本次結(jié)果基本一致，但是銀浸染色法主要染色黑素顆粒，即便染色陽(yáng)性，也不一定就是黑素細(xì)胞，如果在有色素沉著的時(shí)候，預(yù)先脫色素，會(huì)破壞抗原的完整性，脫色不干凈，陽(yáng)性染色結(jié)果判斷不明確，Sox10抗體為細(xì)胞核染色的抗體，在表皮內(nèi)有色素沉著的情況下，也可以辨認(rèn)黑素細(xì)胞，準(zhǔn)確率高。

查閱文獻(xiàn)，關(guān)于皮膚纖維瘤表皮內(nèi)色素沉著的可能機(jī)理是:增殖的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞能分泌干細(xì)胞因子(SCF)及肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)，這些因子對(duì)黑素細(xì)胞產(chǎn)生刺激，從而引起表皮內(nèi)色素沉著。9有學(xué)者發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞可以刺激黑素細(xì)胞增殖，該作用與SCF和HGF相關(guān)。10，11。本研究選用的標(biāo)本表皮內(nèi)均有色素，20例皮膚纖維瘤中，16例基底層有黑素細(xì)胞增多，12例棘層有黑素細(xì)胞。曾有關(guān)于皮膚纖維瘤伴有雀斑樣黑素細(xì)胞增多的報(bào)道。12美國(guó)學(xué)者2005年發(fā)現(xiàn)了14例皮膚纖維瘤伴有黑素細(xì)胞增生性痣，其中雀斑樣痣2例，皮內(nèi)痣3例，復(fù)合痣8例，淺表擴(kuò)散的原位惡性黑素瘤1例。13本研究中僅見(jiàn)到黑素細(xì)胞的增多，并無(wú)雀斑樣痣、皮內(nèi)痣和復(fù)合痣的改變，可能與我們選取標(biāo)本數(shù)量少有關(guān)。

本研究預(yù)定位基底層及以上胞漿透明細(xì)胞對(duì)應(yīng)的Sox10免疫組化中同一個(gè)細(xì)胞，確定是否為黑素細(xì)胞。但由于蠟塊切片過(guò)程及實(shí)驗(yàn)操作的影響，實(shí)際操作中不能定位同一個(gè)細(xì)胞。由于Sox10為細(xì)胞核染色，Sox10陽(yáng)性染色下，在基底層不僅可以看到黑褐色的核，也可以看到胞核周圍透亮的暈；在脂溢性角化病中在棘層除腺樣型外，其他型均有黑素細(xì)胞；在皮膚纖維瘤中，棘層也有黑素細(xì)胞增多，因此，基底層及以上胞漿透明的細(xì)胞部分為黑素細(xì)胞。

本次實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新之處，在于使用新的黑素細(xì)胞核特異性抗體，該抗體的特點(diǎn):(1)特異性強(qiáng)，敏感性高，它針對(duì)神經(jīng)嵴來(lái)源的細(xì)胞標(biāo)記，朗格漢斯細(xì)胞是骨髓來(lái)源細(xì)胞，因此不會(huì)被標(biāo)記，可以用在表皮內(nèi)與朗格漢斯細(xì)胞區(qū)別；(2)由于該抗體特異性地染色黑素細(xì)胞的細(xì)胞核，可以在相鄰的細(xì)胞，如角質(zhì)形成細(xì)胞包膜或胞漿有著色或有色素沉著的情況下，不需脫色，也可以區(qū)分黑素細(xì)胞，避免了脫色操作對(duì)于抗原完整性的破壞，而且免疫組化操作方便，顯色明顯，辨認(rèn)簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，可以用于其它色素性疾病的研究中。

查閱國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)，尚無(wú)關(guān)于脂溢性角化病及皮膚纖維瘤中黑素細(xì)胞增生情況的研究，本研究樣本數(shù)量較少，具體的機(jī)制還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量及進(jìn)行相關(guān)基礎(chǔ)研究。

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(收稿:2014－09－21 修回:2014－12－05)

Detection of the proliferation of melanocytes in the patients w ith sebor rheic keratosis and dermatofibroma by immunohistochem istry w ith Sox10 antibody

YANG Huan，ZHANG Mei-hua，SU Zhong-lan.Department of Dermatology，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing，210029

Objective:To determine the proliferation ofmelanocytes andwhether the transparent cytoplasm cells aremelanocytes or not in the patientswith seborrheic keratosis(SK)and dermatofibroma(DF).M ethods:The lesions from 52 patients with SK and 20 patientswith DF were treated with immunohistochemistry with Sox10 antibody.Results:Compared with the normal skin，the number ofmelanocytes was increased in the basal layer in 34 patientswith SK and in 16 patientswith DF.The number ofmelanocyteswas increased in spinous layer in 39 patientswith SK and 12 patientswith DF.Conclusion:There aremelanocytes proliferation in the lesions of patients with SK and DF and some of the transparent cytoplasm cells aremelanocytes.

seborrheic keratosis；dermatofibroma；melanocyte；immunohistochemistry

南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，南京，210029?通信作者