張 暉 薛洪寶

（蚌埠醫(yī)學院化學教研室 安徽蚌埠 233030）

塑化劑能夠引起動物存活率下降、肝腎功能降低、體重減輕、紅細胞減少和致癌性[1]；它還能夠引起動物更加嚴重的后果，如脊柱畸形、仔胎腭裂、眼睛缺陷、心臟變形等，接受塑化劑試驗的小鼠睪丸體積可萎縮大約一半[2-6]。據(jù)統(tǒng)計資料表明，目前我國的塑化劑危害已經(jīng)到了無處不在的程度，其使用范圍之廣，污染面積之大，影響人數(shù)之多，比農(nóng)藥、其它食品添加劑等更讓人擔心，而更令人憂慮的是，現(xiàn)在很少人能夠意識到它的危害[7,8]。

塑化劑中以鄰苯二甲酸酯類為主，其分子結(jié)構(gòu)如圖1所示。在我國該類塑化劑以鄰苯二甲酸二丁酯（DBP）和鄰苯二甲酸二辛酯（DNOP）居多[9]。

少量塑化劑添加到白酒中可使白酒的粘性增強，醇香長久，表面上提高了白酒的品質(zhì)和檔次。一般情況下，白酒產(chǎn)品中的塑化劑屬于特定遷移，主要來源于酒泵進出乳膠管、塑料輸酒管、塑料接酒桶、成品酒塑料內(nèi)蓋、封酒缸塑料布、成品酒塑料瓶包裝、成品酒塑料袋包裝或成品酒塑料桶包裝等[10,11]。為了保證白酒飲用安全，很有必要建立一種快速、簡便、靈敏的檢測其中塑化劑的方法。

目前，白酒中塑化劑的檢測方法主要有氣相色譜法[12]、高效液相色譜法[13]、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[14,15]等，這些方法不僅檢測時間長、步驟復雜，而且對設備要求較高，不便于推廣。但用毛細管電泳法檢測白酒中的塑化劑鮮有報道。本研究旨在建立基于毛細管電泳法的4種鄰苯二甲酸酯類塑化劑—鄰苯二甲酸二異丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸芐基丁基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二異辛酯(DIOP)和鄰苯二甲酸二異癸酯(DIDP)的檢測方法，并以市售白酒為試驗樣品，驗證該方法的可行性，為快速檢測白酒中上述4種塑化劑提供快速、簡便、靈敏的新方法。

一、實驗部分

（一） 儀器與試劑。P/ACETMMDQ毛細管電泳系統(tǒng)（BeckmanCoulter,Fullerton,CA,USA)，32Karat電泳分析軟件及二極管陣列檢測器（PDA）和未涂層熔融石英毛細管（75μmi.d.×50cm，有效長度40cm，河北永年銳灃色譜器件有限公司）；FA/JA系列精密電子天平（精度：0.0001g，天津天馬衡基儀器有限公司）；KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；pHS-3C酸度計（上?？茖W儀器有限公司）。

植酸鈉，三羥甲基氨基甲烷(Tris)，磷酸鈉，十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)，硼酸鈉，十二烷基硫酸鈉(SDS)，無水乙醇，鹽酸，氫氧化鈉，甲醇，鄰苯二甲酸二異丁酯(DBP)，鄰苯二甲酸芐基丁基酯(BBP)，鄰苯二甲酸二異辛酯(DIOP)，鄰苯二甲酸二異癸酯(DIDP)等，所用試劑均為國產(chǎn)分析純；五種品牌白酒(購于本地超市)；所用蒸餾水為雙蒸水。

（二）塑化劑溶液及電泳緩沖溶液的配制。移取一定體積的DBP、BBP、DIOP和DIDP于50mL容量瓶里，加35mL無水乙醇溶解，再用雙蒸水定容，搖勻。即得塑化劑混合溶液，備用。

分別配制0.1000mol·L-1植酸鈉溶液(A)；0.0500mol·L-1的Tris-HCl溶液(B)、磷酸鈉溶液(C)、SDBS溶液(D)、硼酸鈉溶液(E)；10g·L-1SDS溶液(F)，上述溶液以及無水乙醇(G)、雙蒸水(H)按表1各溶液體積比要求混合即分別制得植酸鈉、Tris-HCl、磷酸鈉、SDBS、硼酸鈉五個系列緩沖溶液，如C:D:F=0.5:1:0.5表示由C、D、F三種溶液按0.5:1:0.5的體積比混合制得的一種緩沖溶液。

（三）實驗方法。

1.電泳分析條件。電泳毛細管：未涂層熔融石英毛細管75μmi.d.×50cm，有效長度40cm；緩沖溶液：0.0150mol·L-1的硼酸鈉溶液，pH9.00；分離電壓：+16kV；進樣壓力：0.5psi(3.45kPa)；進樣時間3.0s；分離溫度：25℃；二極管陣列檢測器。毛細管沖洗程序：0.1mol·L-1NaOH溶液沖洗2min；0.1 mol·L-1HCl溶液沖洗2min；雙蒸水沖洗1min；緩沖溶液沖洗1min。每一次樣品分析前運行上述沖洗程序。

2.塑化劑溶液及樣品分析。分別以表1所示溶液為緩沖溶液，配制的塑化劑溶液為分析樣品進樣分析，得到相應的電泳圖。根據(jù)電泳圖選擇合適的緩沖溶液和緩沖溶液的濃度，接著確定適宜的緩沖溶液pH和分離電壓，即確定最佳電泳分析條件。最后按該電泳條件對塑化劑溶液和白酒樣品進行分析。

表1 電泳緩沖溶液

二、 結(jié)果與討論

（一）電泳條件的優(yōu)化。

1.緩沖溶液及其濃度的選擇。緩沖溶液及其濃度對毛細管電泳分離效果有相當明顯的影響。分別考察了表1中植酸鈉、Tris-HCl等五個系列緩沖溶液體系的分離情況，部分電泳圖如圖2所示。結(jié)果表明，硼酸鈉緩沖溶液系列中硼酸鈉溶液背景噪音及干擾影響較小，DBP等塑化劑的檢測靈敏度較高，所以選用硼酸鈉溶液為最佳緩沖體系；其它緩沖體系或者背景噪音較大，或者干擾影響較大，或者峰形展寬，或者塑化劑的檢測靈敏度較低等原因不宜采用。

圖2 不同緩沖溶液電泳圖

在毛細管電泳中，緩沖溶液的濃度比較大時電流會比較大，產(chǎn)生比較多的焦耳熱，使峰形變差；濃度較小時，電流信號較小，靈敏度較低。為獲得良好的檢測靈敏度和分離度，考察了硼酸鈉溶液濃度分別為0.0075mol·L-1、0.0100mol·L-1、0.0150mol·L-1、0.0200mol·L-1、0.0300mol·L-1、0.0350mol·L-1對分離效果的影響，電泳圖如圖3所示。圖3表明，0.0150mol·L-1硼酸鈉溶液的遷移時間較短、分離效果較好、峰形較理想。因此，選用0.0150mol·L-1作為硼酸鈉緩沖溶液的最佳濃度。

圖3 不同硼酸鈉濃度電泳圖

2.分離電壓的選擇。在毛細管電泳分離過程中，電壓對分離有較大影響。電壓影響電滲流強弱及帶電粒子遷移速率，從而決定組分遷移時間。本實驗考察了不同電壓（+8kV～+24kV）對各組分遷移的影響，電泳圖如圖4所示。由圖4可知，電壓小于+16kV時，遷移時間延長，電壓過低時伴有管壁吸附現(xiàn)象，導致峰型變寬；電壓大于+16kV時，遷移時間縮短，但基線噪聲較大，電泳體系運行不穩(wěn)定；電壓等于+16kV時，信噪比較高，分離效果比較好，分析速度較快。綜合考慮遷移時間、靈敏度、峰形和噪音等因素，選擇+16kV作為最佳分離電壓。

圖4 不同電壓條件的電泳圖

3.緩沖溶液pH值的選擇。pH值不僅對緩沖溶液中微粒所帶電荷起決定作用，而且對電泳淌度也有影響，是毛細管電泳分離效果的關(guān)鍵因素。調(diào)節(jié)濃度為0.0150mol·L-1的硼酸鈉緩沖溶液的pH值分別為：8.00、8.50、9.00、9.50和10.00，按上述實驗方法進樣分析，發(fā)現(xiàn)當緩沖溶液pH8.00、8.50時，毛細管內(nèi)壁吸附性強，拖尾嚴重，重現(xiàn)性較差；當pH9.50、10.00時，電離作用強，電泳電流較大，焦耳熱效應明顯，分離效率降低；當緩沖液pH9.00時峰形較好，噪音小，分離效果最佳，并且電流適中。故選擇pH9.00濃度為0.0150mol·L-1的硼酸鈉緩沖溶液為最佳運行緩沖溶液。

通過對電泳緩沖溶液類型和濃度、分離電壓、緩沖溶液pH等電泳因素進行考察，確立了電泳的最佳條件為：緩沖溶液為0.0150mol·L-1的硼酸鈉溶液，pH9.00，分離電壓為大于+16kV。

（二）方法重現(xiàn)性實驗。在分析的最佳實驗條件下，將DBP等塑化劑混合溶液平行進樣4次，電泳圖如圖5所示。根據(jù)圖5可得，DBP、BBP、DIOP和DIDP的峰面積的相對標準偏差(RSD)分別為9.02%、6.38%、3.48%和9.82%，如表2所示。

圖5 重現(xiàn)性電泳圖（n=4）

表2 重現(xiàn)性實驗結(jié)果

（三）塑化劑混合溶液和白酒樣品檢測。在最佳電泳條件下分別將塑化劑混合溶液和白酒樣品進樣檢測，電泳圖如圖6和圖7所示。

圖6 四種塑化劑的電泳圖

圖7 五種白酒樣品的電泳圖

由圖6和圖7可知，白酒樣品a含有DIOP；b含有BBP和DIOP；c含有DBP，但含量很低；d含有DBP和BBP；e含有DIOP和DIDP。

三、 結(jié)論

本實驗采用毛細管電泳法建立了白酒中4種塑化劑檢測方法。其最佳電泳分析條件為：緩沖溶液：0.0150mol·L-1的硼酸鈉溶液，pH9.00；分離電壓：+16kV；進樣壓力：0.5psi（3.45kPa）；進樣時間3.0s；分離溫度：25℃；二極管陣列檢測器。在該條件下對塑化劑溶液和當?shù)爻械奈宸N品牌白酒進行檢測分析，根據(jù)電泳圖可得出白酒樣品中DBP等四種塑化劑的定性分析結(jié)果。

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