辛伐他汀改善神經(jīng)源性肺水腫大鼠血清孵育后肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)

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(1.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，湖南 衡陽(yáng) 421001;2.南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

辛伐他汀改善神經(jīng)源性肺水腫大鼠血清孵育后肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)

符暉1*，王橋生1，劉雁2，周斌2，彭忠田1，梁咸章1

(1.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，湖南 衡陽(yáng) 421001;2.南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

目的觀察辛伐他汀對(duì)神經(jīng)源性肺水腫(NPE)大鼠血清孵育后肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(PMECs)生長(zhǎng)的影響及Bax和Bcl-2表達(dá)的影響。方法制備NPE大鼠模型的血清，將體外培養(yǎng)的大鼠PMECs隨機(jī)分成正常對(duì)照組、NPE24 h組、NPE48 h組、辛伐他汀24 h組、辛伐他汀48 h組；NPE組予NPE大鼠模型的血清分別孵育24 h和48 h，辛伐他汀組在NPE大鼠血清孵育的基礎(chǔ)上予1 μmol/L辛伐他汀干預(yù)24 h和48 h。通過細(xì)胞計(jì)數(shù)法描記生長(zhǎng)曲線觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)情況，Western-bolt和RT-PCR分別檢測(cè)各組PMECs內(nèi)Bax和Bcl-2蛋白與mRNA表達(dá)情況。結(jié)果NPE24 h組及48 h組PMECs生長(zhǎng)明顯減慢，倍增時(shí)間延長(zhǎng)，有大量漂浮的細(xì)胞碎片；辛伐他汀24 h組和48 h組PMECs數(shù)量顯著增高。同正常對(duì)照組相比，NPE24 h組和48 h組PMECs內(nèi)Bax蛋白和mRNA表達(dá)顯著增高(P<0.05)，而Bcl-2蛋白和mRNA表達(dá)降低(P<0.05)。與相應(yīng)NPE組相比，辛伐他汀24 h組及48 h組Bax蛋白和mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05)，而Bcl-2蛋白和mRNA表達(dá)增高(P<0.05)。同辛伐他汀24 h組相比，辛伐他汀48 h組PMECs內(nèi)Bcl-2蛋白和mRNA表達(dá)顯著增高(P<0.05)。結(jié)論辛伐他汀可改善NPE大鼠血清孵育后PMECs的生長(zhǎng)，其機(jī)制可能與上調(diào)Bcl-2和下調(diào)Bax表達(dá)有關(guān)。

辛伐他汀； 神經(jīng)源性肺水腫； 肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞； Bax； Bcl-2

神經(jīng)源性肺水腫(neurogenic pulmonary edema，NPE)是指在無原發(fā)性心、肺和腎等疾病的情況下，由顱腦損傷或中樞神經(jīng)系統(tǒng)其他疾病引起的突發(fā)性顱內(nèi)壓增高而導(dǎo)致的急性肺水腫，又稱中樞性肺水腫。其病程進(jìn)展快，治療困難，病死率高。到目前為止，NPE的發(fā)病機(jī)制仍然不清楚。有研究報(bào)道，繼發(fā)炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的肺血管內(nèi)皮損傷、肺血管通透性增加可能是其機(jī)制之一[1-3]。最近有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，肺部血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡參與了NPE的形成[4-5]?？梢?，炎癥反應(yīng)等因素導(dǎo)致肺血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、凋亡可能在NPE發(fā)生中起重要作用。而近年大量研究表明辛伐他汀除了其調(diào)脂作用外，還有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗凋亡，具有保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞功能的作用[6-8]。本文作者前期研究亦發(fā)現(xiàn)辛伐他汀可抑制膿毒癥誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與上調(diào)Bcl-2和下調(diào)Bax有關(guān)[9]。而目前辛伐他汀對(duì)NPE肺血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響及機(jī)制還不清楚。本研究通過辛伐他汀干預(yù)NPE大鼠血清孵育的大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMECs)，檢測(cè)PMECs生長(zhǎng)情況及不同時(shí)間點(diǎn)Bcl-2、Bax蛋白和mRNA的表達(dá)變化，探討辛伐他汀對(duì)NPE大鼠PMECs的保護(hù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料清潔級(jí)雄性SD大鼠，250～300 g，50只，購(gòu)買于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。PMECs(武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司，產(chǎn)品編號(hào)：MIC-CELL-0001)；辛伐他汀(大連美侖生物科技有限公司，規(guī)格5 g/瓶)；TRIZOL試劑(Life Technologies Corporation,USA)，SYBR Green qRCR Mix(TOYOBO CO.,LTD)；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(Thermo Fisher Biochemical Product (Beijing) Co.,Ltd)，Bax多克隆抗體(ImmunoWay Biotechnology Company，USA)；Bcl-2多克隆抗體(ABZOOM BIOLABS,Inc,USA)；羊抗兔Bax二抗(Jackson ImmunoResearch Laboratories,Inc.USA)；羊抗兔Bcl-2二抗(Jackson ImmunoResearch Laboratories,Inc.USA)；羊抗鼠β-actin二抗(Jackson ImmunoResearch Laboratories,Inc.USA)。

1.2大鼠NPE血清制備參考小腦延髓池穿刺法制作大鼠NPE模型[10]，實(shí)驗(yàn)大鼠術(shù)前12 h禁食但不禁水，10%水合氯醛300 mg/kg腹腔注射進(jìn)行麻醉固定，麻醉后氣管切開行氣管插管，用1 mL注射器從枕骨粗隆下0.6～0.7 cm進(jìn)針，進(jìn)針深度1.0～1.5 cm，穿刺進(jìn)入小腦延髓池；穿刺針進(jìn)入小腦延髓池后即刻在大鼠腦池內(nèi)注射纖維蛋白原(100 mg/mL)和凝血酶(200 U/mL)各0.075 mL。如大鼠出現(xiàn)呼吸困難，氣管插管內(nèi)可見水腫液或粉紅色泡沫痰視為模型復(fù)制成功[11]。模型復(fù)制成功1 h后處死動(dòng)物，收集血清備用。

1.3實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)將體外培養(yǎng)的PMECs隨機(jī)分成正常對(duì)照組、NPE組和辛伐他汀組；其中NPE組根據(jù)NPE大鼠血清孵育時(shí)間分成NPE24 h組和NPE48 h組兩個(gè)亞組，辛伐他汀組按干預(yù)時(shí)間分成辛伐他汀24 h組和辛伐他汀48 h組兩個(gè)亞組。其中對(duì)照組采用普通DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，NPE24 h組和NPE48 h組采用含20%NPE大鼠血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，分別孵育24 h和48 h。辛伐他汀24 h組和辛伐他汀48 h組在NPE組的基礎(chǔ)上加入1 μmol/L辛伐他汀培養(yǎng)，分別孵育24 h和48 h。各組到相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞計(jì)數(shù)，檢測(cè)Bax、Bcl-2蛋白和mRNA表達(dá)情況。

1.4細(xì)胞計(jì)數(shù)取PMECs接種于24孔板中，1×104/孔，同時(shí)加入含20%NPE大鼠血清或含1 μmol/L辛伐他汀的NPE大鼠血清進(jìn)行孵育，對(duì)照組予普通DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。分別于第24 h、48 h和72 h各組孔隨機(jī)取3個(gè)，消化，吹打成單細(xì)胞懸液后，0.04%臺(tái)盼藍(lán)染色2 min，計(jì)算存活細(xì)胞數(shù)量，計(jì)數(shù)3次，實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次，計(jì)算其平均數(shù)。以時(shí)間為橫坐標(biāo)(h)，細(xì)胞數(shù)量(1×105個(gè))為縱坐標(biāo)繪制各組的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。

1.5 Western-bolt檢測(cè)Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)

加入細(xì)胞裂解液，冰上裂解30 min，4 ℃ 12 000 r/min離心5 min，取上清液，Bradford法測(cè)定蛋白濃度。計(jì)算含20 μg總蛋白的溶液體積作為上樣量，進(jìn)行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉1 h。Bax和Bcl-2一抗室溫孵育2 h后4 ℃過夜，HRP標(biāo)記的二抗室溫孵育1 h后，加顯色液發(fā)光，顯影定影。將膠片掃描后用圖像分析軟件IPP6.0對(duì)圖像進(jìn)行各條帶的灰度值測(cè)定，以目的條帶與內(nèi)參β-actin的比值作為半定量依據(jù)，每組重復(fù)3次。

1.6實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Bax和Bcl-2 mRNA表達(dá)TRIZOL法提取總的RNA并定量，具體按照試劑盒說明進(jìn)行。取總RNA 20 μg進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，合成cDNA。加入cDNA 1 μL、上游引物1 μL、下游引物1 μL 2×SYBR Green qPCR Mix 10 μL及ddH2O 7 μL，總體積 20 μL進(jìn)行擴(kuò)增Bax 、Bcl-2和β-actin。兩步法Real-Time定量，預(yù)變性95 ℃，3 min，之后每一步變性95 ℃，10 s，58 ℃退火延伸30 s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，每次在延伸階段讀取熒光值。相關(guān)引物序列及擴(kuò)增片段長(zhǎng)度如下：Bcl-2上游引物：5′TGTGGCCTTCTTGAGTTCG3′，下游引物：5′CATCCCAGCCCTCCGTTATCC3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為242 bp；Bax上游引物：5′TCCACCAAGAAGCTGAGCGAG3′，下游引物：5′GTCCAGGCCCATGATGGTTCT3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為542 bp；β-actin上游引物：5′CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC3′，下游引物：5′TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為852 bp。2-△△CT法計(jì)算Bax mRNA和Bcl-2mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)使用SPSS18.0進(jìn)行處理。正態(tài)分布計(jì)數(shù)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組Bax蛋白和mRNA及Bcl-2蛋白和mRNA采用One Way ANOVA進(jìn)行比較，組間多重比較采用LSK法，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1細(xì)胞生長(zhǎng)曲線NPE血清干預(yù)組孔內(nèi)PMECs生長(zhǎng)明顯減慢，倍增時(shí)間較正常對(duì)照組延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)量增加很少，有大量漂浮的細(xì)胞碎片。當(dāng)細(xì)胞數(shù)大于1.0×105個(gè)后，細(xì)胞增長(zhǎng)迅速。同NPE組相比，辛伐他汀干預(yù)后，在孵育24 h、48 h和72 h，PMECs數(shù)量均顯著增高(P<0.05)。見圖1。

2.2各組PMECs的Bax mRNA和蛋白表達(dá)同正常對(duì)照組相比，NPE24 h組和NPE48 h組PMECs的Bax mRNA表達(dá)均增高(P<0.05)；同NPE24 h組和NPE48 h組相比，辛伐他汀24 h組和辛伐他汀48 h組Bax mRNA表達(dá)均減低(P<0.05)，但兩組之間Bax mRNA表達(dá)無差異(P>0.05)。蛋白電泳圖及統(tǒng)計(jì)分析顯示：與正常對(duì)照組相比，NPE 24 h組和NPE48 h組PMECs的Bax蛋白表達(dá)增高(P<0.05)，NPE48 h組Bax蛋白表達(dá)較NPE24 h組增高(P<0.05)；而辛伐他汀干預(yù)后，辛伐他汀24 h組和辛伐他汀48 h組Bax蛋白表達(dá)表達(dá)降低(P<0.05)；辛伐他汀24 h組和辛伐他汀48 h組Bax蛋白表達(dá)差異無顯著性(P>0.05)。見圖2。

圖1 各組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 與NPE組比較，a：P<0.05

圖2 各組PMECs的Bax mRNA和蛋白表達(dá)情況 與正常對(duì)照組相比，a：P<0.05，b：P<0.05；與NPE24 h組和NPE48h組相比，c：P<0.05,d：P<0.05

2.3各組PMECs的Bcl-2mRNA和蛋白表達(dá)與正常對(duì)照組相比，NPE24 h組和NPE48 h組PMECs的Bcl-2 mRNA表達(dá)均減低(P<0.05)，NPE48 h組Bcl-2 mRNA表達(dá)較NPE24 h組降低(P<0.05)；與NPE24 h組和NPE48 h組相比，辛伐他汀24 h組和辛伐他汀48 h組Bcl-2 mRNA表達(dá)均增高(P<0.05)，兩組Bcl-2 mRNA表達(dá)之間差異有顯著性(P<0.05)。蛋白電泳圖顯示：與正常對(duì)照組相比，NPE24 h組和NPE48 h組PMECs的Bcl-2蛋白表達(dá)減少(P<0.05)；而辛伐他汀干預(yù)后，辛伐他汀24 h組和辛伐他汀48 h組Bcl-2蛋白表達(dá)較NPE24 h組和NPE48 h組均增高(P<0.05)；同辛伐他汀24 h組相比，辛伐他汀48 h組Bcl-2蛋白表達(dá)增高(P<0.05)。見圖3。

圖3 各組PMECs的Bcl-2 mRNA和蛋白表達(dá)情況 與正常對(duì)照組比較，a：P<0.05,b：P<0.05；與NPE24 h組比較，b：P<0.05；與NPE24 h組和NPE48h組比較，c：P<0.05,d：P<0.05

3 討 論

就NPE發(fā)生的病理生理機(jī)制，一是血流動(dòng)力學(xué)機(jī)制，1975年，Theodore等[12]就神經(jīng)源性肺水腫提出了著名的沖擊傷理論，這一理論認(rèn)為，中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng)導(dǎo)致血中兒茶酚胺含量顯著增高，進(jìn)而血流動(dòng)力學(xué)急劇變化，體循環(huán)內(nèi)大量血液進(jìn)入肺循環(huán)內(nèi)。一方面肺毛細(xì)血管床有效濾過壓急劇增高，從而形成肺水腫；另一方面血流沖擊造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，大量血漿蛋白外滲導(dǎo)致急性肺水腫進(jìn)一步加重。另一個(gè)是炎癥反應(yīng)學(xué)機(jī)制，神經(jīng)中樞局部和繼發(fā)的全身系統(tǒng)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致大量的細(xì)胞因子、趨化因子、神經(jīng)肽物質(zhì)P等釋放，導(dǎo)致肺血管內(nèi)皮通透性增加，誘發(fā)肺水腫[1]。

本研究結(jié)果顯示，NPE大鼠血清孵育PMECs后，細(xì)胞生長(zhǎng)減慢，并可見大量的細(xì)胞碎片，而予辛伐他汀干預(yù)NPE大鼠血清孵育的PMECs后，細(xì)胞生長(zhǎng)明顯改善。Skrabal等[3]用Foley氣囊導(dǎo)管充氣誘發(fā)豬腦死亡的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，其血清TNF-a、IL-1β、 IL-6等細(xì)胞因子水平顯著增高，并且心、肺和腎組織IL-1β、 IL-6、MCP-1 和TGF- β表達(dá)均有顯著增高。提示嚴(yán)重中樞損傷可誘發(fā)機(jī)體全身系統(tǒng)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致外周器官組織損傷。本研究結(jié)果顯示予辛伐他汀干預(yù)后，NPE大鼠血清孵育的PMECs生長(zhǎng)改善。這可能與辛伐他汀明確的抗炎作用及拮抗血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡等因素有關(guān)[13-15]。

本文辛伐他汀干預(yù)大鼠NPE血清孵育的PMECs 后24 h和48 h，PMECs內(nèi)Bax蛋白和mRNA表達(dá)顯著降低，而Bcl-2蛋白和mRNA則表達(dá)增高；其中Bcl-2蛋白和mRNA在辛伐他汀干預(yù)48 h后較24 h表達(dá)均增高，但對(duì)Bax蛋白和mRNA的表達(dá)抑制作用與時(shí)間無關(guān)。提示辛伐他汀改善PMECs的生長(zhǎng)機(jī)制可能與上調(diào)的Bcl-2和下調(diào)Bax表達(dá)有關(guān)。Bc1-2 家族在細(xì)胞內(nèi)凋亡信號(hào)傳導(dǎo)中起重要作用。Bcl-2 和Bax 是Bcl-2家族中與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切的兩種基因，前者為抗凋亡基因，后者為促凋亡基因，兩者間的平衡影響凋亡的發(fā)生。由此，辛伐他汀可通過調(diào)節(jié)Bcl-2和Bax變化，從而拮抗大鼠NPE誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，改善細(xì)胞生長(zhǎng)及活性，發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。先期研究亦發(fā)現(xiàn)辛伐他汀可通過上調(diào)Bcl-2和下調(diào)Bax表達(dá)抑制膿毒癥誘導(dǎo)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，改善細(xì)胞生長(zhǎng)，發(fā)揮血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用[9]。

車忠應(yīng)等[16]研究發(fā)現(xiàn)辛伐他汀預(yù)處理心肌缺血再灌注大鼠后，可上調(diào)心肌組織中Bcl-2、下調(diào)Bax表達(dá)，抑制心肌細(xì)胞凋亡，減少心肌梗死面積，對(duì)大鼠心肌缺血再灌注有保護(hù)作用。另有研究發(fā)現(xiàn)辛伐他汀可上調(diào)Bcl-2的表達(dá)和抑制caspase-3表達(dá)，減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[17]?？梢?，辛伐他汀可通過調(diào)節(jié)Bcl-2 和Bax表達(dá)變化，抑制多種病因所致的細(xì)胞凋亡，起到保護(hù)細(xì)胞作用。

本研究?jī)H觀察了辛伐他汀對(duì)NPE大鼠血清生長(zhǎng)情況的影響及其對(duì)凋亡蛋白Bcl-2和 Bax表達(dá)的影響。其改善大鼠血清孵育后PMECs的生長(zhǎng)的機(jī)制比較復(fù)雜，是否與通過抑制細(xì)胞凋亡或影響其增殖分化，還是其他機(jī)制，有待進(jìn)一步研究探索。

辛伐他汀可改善NPE大鼠血清孵育后PMECs的生長(zhǎng)，其機(jī)制之一可能與上調(diào)Bcl-2表達(dá)和下調(diào)Bax表達(dá)有關(guān)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)對(duì)Bcl-2表達(dá)影響更加明顯。

[1] Baumann A,Audibert G,McDonnell J,et al.Neurogenic pulmonary edema[J].Acta Anaesthesiol Scand，2007,51(4):447-455.

[2] Domínguez-Roldán JM,García-Alfaro C,Jimenéz-González PI,et al.Brain death:repercussion on the organs and tissues[J].Med Intensiva,2009,33(9):434-441.

[3] Skrabal CA,Thompson LO,Potapov EV,et al.Organ-specific regulation of pro-inflammatory molecules in heart,lung,and kidney following brain death[J].J Surg Res,2005,123(1):118-125.

[4] Suzuki H,Sozen T,Hasegawa Y,et al Caspase-1 inhibitor prevents neurogenic pulmonary edema after subarachnoid hemorrhage in mice[J].Stroke,2009,40(12):3872-3875.

[5] Suzuki H,Sozen T,Hasegawa Y,et al.Subarachnoid hemorrhage causes pulmonary endothelial cell apoptosis and neurogenic pulmonary edema in mice[J].Acta Neurochir Suppl,2011,111:129-132.

[6] 徐茂鳳,李永杰,王婉麗.辛伐他汀抑制高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡[J].中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(41):7726-7729.

[7] 李敏芝,李敏,田東蓮,等.辛伐他汀對(duì)膿毒癥大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響[J].中華麻醉學(xué)雜志,2011,31(4):500-502.

[8] La Mura V,Pasarin M,Meireles CZ,et al.Effects of simvastatin administration on rodents with lipopolysaccharide-induced liver microvascular dysfunction[J].Hepatology,2013,57(3):1172-1181

[9] 符暉,羅瓊,譚思,等.辛伐他汀對(duì)膿毒癥內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志,2013,22(9):994-999.

[10] Hamdy O,Maekawa H,Shimada Y,et al.Role of central nervous system nitric oxide in the development of neurogenic pulmonary edema in rats[J].Crit Care Med,2001,29(6):1222-1228.

[11] 符暉,王橋生,劉雁,等.神經(jīng)源性肺水腫大鼠模型的改進(jìn)與評(píng)價(jià)[J].中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志,2015,43(2):141-144.

[12] Theodore J,Robin ED.Pathogenesis of neurogenic pulmonary oedema[J].Lancet,1975,2(7938):749-751.

[13] Du G,Song Y,Zhang T,et al.Simvastatin attenuates TNF-α induced apoptosis in endothelial progenitor cells via the upregulation of SIRT1[J].Int J Mol Med,2014,34(1):177-182.

[14] Hot A,Lavocat F,Lenief V,et al.Simvastatin inhibits the pro-inflammatory and pro-thrombotic effects of IL-17 and TNF-α on endothelial cells[J].Ann Rheum Dis,2013,72(5):754-760.

[15] Wang KW,Chen HJ,Lu K,et al.Simvastatin attenuates the cerebral vascular endothelial inflammatory response in a rat traumatic brain injury[J].Ann Clin Lab Sci,2014,44(2):145-150.

[16] 車忠應(yīng),陳還珍.辛伐他汀預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷Bcl-2和Bax表達(dá)的影響[J].中國(guó)醫(yī)療前沿,2011,06(2):26-27.

[17] Sun J,Xie C,Liu W,et al.The effects of simvastatin on hippocampal caspase-3 and Bcl-2 expression following kainate-induced seizures in rats[J].Int J Mol Med,2012,30(4):739-746.

SimvastatinImprovestheGrowthofPulmonaryMicrovascularEndothelialCellsIncubatedinSerumofNeurogenicPulmonaryEdemaRat

FU Hui,WANG Qiaosheng,LIU Yan,et al

(DepartmentofCriticalCareMedicine,theFirstAffiliatedHospital,UniversityofSouthChina,Hengyang,Hunan421001,China)

ObjectiveTo observe the effect of simvastatin on the growth of pulmonary microvascular endothelial cells (PMECs) incubated in the serum of neurogenic pulmonary edema (NPE) rat and expression of Bax and Bcl-2 of PMECs.MethodsThe PMECs were randomly divided into five groups,the control group,NPE 24 h group,NPE 48 h group,simvastatin 24 h group and simvastatin 48 h group.The two NPE groups were incubated in rat serum for 24 h and 48 h respectively.The two simvastatin groups were treated with 1 μmol/L simvastatin,also incubated in rat serum for 24 h and 48 h respectively.The cell growth in each group was determined by the cell growth curve of cytometry,while the expression of Bax and Bcl-2 was detected by Western-bolt and RT-PCR.ResultsIn the NPE 24 h and NPE 48 h groups,the growth rate of PMECs was significantly decreased with increased doubling time and a large amount of floating cell debris.In the simvastatin 24 h and simvastatin 48 h groups,the number of PMECs increased significantly.The expressions of Bax was significantly upregulated (P<0.05),while the expressions of Bcl-2 was significantly downregulated (P<0.05) in the NPE 24 h and NPE 48 h groups when compared with that in the control group.The expressions of Bax was significantly downregulated (P<0.05),while the expressions of Bcl-2 was significantly upregulated (P<0.05) in the simvastatin 24 h and simvastatin 48 h groups when compared with that in the control group.The expression of Bcl-2 of PMECs in the simvastatin 48 h group was significantly increased (P<0.05) compared to the simvastatin 24 h group.ConlusionsSimvastatin improves the growth of PMECs incubated with serum of NPE rat.One of the corresponding mechanisms may be related to the upregulation of Bcl-2 and downregulation of Bax.

simvastatin; neurogenic pulmonary edema; pulmonary microvascular endothelial cells; Bax； Bcl-2

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2015.05.008

2015-03-25；

2015-05-28

湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014SK3088)；湖南省醫(yī)藥衛(wèi)生科研計(jì)劃課題項(xiàng)目(B2013-040).

*通訊作者，E-mail：13973417900@163.com.

R741.02

A

(此文編輯：蔣湘蓮)