張林慶　高艷斌　馬　可　李家宏　任　強(qiáng)　陳志明　宋春來

(長(zhǎng)春市公安局刑警支隊(duì)，吉林　長(zhǎng)春　130000)

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小鼠大腦缺氧后Mybbp1a在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)變化及其意義

張林慶高艷斌馬可1李家宏任強(qiáng)2陳志明2宋春來3

(長(zhǎng)春市公安局刑警支隊(duì)，吉林長(zhǎng)春130000)

摘要〔〕目的探討小鼠顱腦損傷后Myb結(jié)合蛋白1a(Mybbp1a)隨時(shí)間變化的免疫組織化學(xué)表達(dá)改變。方法將50只昆明系小鼠隨機(jī)分為10組，采用手術(shù)結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，分別于術(shù)后1、4、12、24 h、3、6、9、12、16 d處死，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Mybbp1a的表達(dá)變化，神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)平均灰度值以CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果Mybbp1a在腦缺氧3 d后表達(dá)減少且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論Mybbp1a在小鼠腦缺氧3 d后增高，說明Mybbp1a可作為腦缺氧的中晚期指標(biāo)，另外，Mybbp1a作為核糖體蛋白的重要轉(zhuǎn)錄因子，其在小鼠腦缺氧后中晚期表達(dá)減少，提示我們核糖體合成障礙很可能在神經(jīng)細(xì)胞退行性變過程中發(fā)揮重要作用。

關(guān)鍵詞〔〕腦缺氧；Myb結(jié)合蛋白1a，核糖體

1吉林大學(xué)第一醫(yī)院兒科急診2吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)教研室

3內(nèi)蒙古興安盟突泉縣公安局

第一作者：張林慶(1971-)，男，副主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)學(xué)研究。

Myb結(jié)合蛋白1a(Mybbp1a)是重要的核仁轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其在核糖體DNA合成過程中發(fā)揮重要作用〔1，2〕。研究證實(shí)，Mybbp1a 在細(xì)胞老化過程中發(fā)揮著重要功能，首先，Mybbp1a可調(diào)節(jié)細(xì)胞老化過程中的兩個(gè)關(guān)鍵因子的表達(dá)，包括P53以及RelA/p65，后者為核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB的構(gòu)成因子之一〔3〕。另外，研究還發(fā)現(xiàn)Mybbp1a可調(diào)節(jié)一些細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子及DNA損傷修復(fù)調(diào)節(jié)因子的改變，而上述因子也在細(xì)胞老化過程中發(fā)揮重要作用〔4〕。本研究采用手術(shù)方法制造小鼠腦缺氧模型，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)小鼠腦缺氧后Mybbp1a表達(dá)情況，就P53表達(dá)與小鼠腦缺氧后不同時(shí)間段的關(guān)系進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1材料與方法

1.1動(dòng)物分組及模型建立采用昆明系雄性小鼠50只，隨機(jī)分為腦缺氧實(shí)驗(yàn)組及正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組分別于術(shù)后1、4、12、24 h、3、6、9、12、16 d處死。實(shí)驗(yàn)過程中結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈，用10%水合氯醛(0.35 g/kg體重)腹腔內(nèi)注射麻醉，剪去頸部皮毛并消毒皮膚后，沿中線切開皮膚，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈后結(jié)扎，手術(shù)縫合皮膚后，置鼠籠喂養(yǎng)。正常對(duì)照組不結(jié)扎頸部動(dòng)脈但僅切開頸部皮膚。

1.2方法

1.2.1蘇木素-伊紅(HE)染色腦組織標(biāo)本用10%甲醛溶液固定2 d，采用石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，進(jìn)行常規(guī)HE染色。

1.2.2免疫組織化學(xué)染色采用Mybbp1a(購自武漢博士德生物工程有限公司)一抗進(jìn)行組織化學(xué)染色，按試劑盒說明書應(yīng)用SP法對(duì)腦組織中Mybbp1a進(jìn)行檢測(cè)，操作。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗為陰性對(duì)照，對(duì)已知陽性的切片做陽性對(duì)照。神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)平均灰度值采用CMIAS多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)測(cè)量

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS3.0軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1常規(guī)HE染色腦缺氧2 h后，損傷灶周圍神經(jīng)細(xì)胞尼氏體溶解消失，神經(jīng)細(xì)胞及血管周圍間隙增寬，缺氧24 h后，腦實(shí)質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)嗜神經(jīng)細(xì)胞現(xiàn)象，缺氧3 d后，可見有膠質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞增生。見圖1。

圖1　小鼠大腦缺氧后Mybbp1a免疫組織化學(xué)表達(dá)變化(DAB，×20)

2.2顱腦損傷后Mybbp1a表達(dá)量隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降在對(duì)照組神經(jīng)組織中，Mybbp1a呈一致性表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組腦組織中Mybbp1a在傷后3 d開始表達(dá)減少，表現(xiàn)為平均灰度值降低，且隨缺氧時(shí)間延長(zhǎng)后持續(xù)降低，缺氧9 d后達(dá)峰值。其中缺氧0 min，平均灰度值為165±3.5，1 h為178±7.2，4 h為157±7.9，12 h為159±5.2，1 d為136±8.9，3 d為91±6.9，6 d為76±8.2，9 d為79±9.1，12 d為73±2.3,16 d為71±6.2。

3討論

Mybbp1a作為重要的核仁轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，其在老化過程中的重要作用日益受到眾多學(xué)者的認(rèn)識(shí)〔5〕。盡管目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Mybbp1a可調(diào)節(jié)細(xì)胞老化過程中P53以及RelA/p65兩個(gè)關(guān)鍵因子的表達(dá)，但其在神經(jīng)細(xì)胞退行性變中的作用卻鮮有報(bào)道。腦組織作為體內(nèi)最大的耗氧器官，對(duì)缺氧極為敏感，一旦發(fā)生腦組織缺氧，會(huì)發(fā)生一系列嚴(yán)重的臨床癥狀。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在正常腦組織中，Mybbp1a在神經(jīng)細(xì)胞中呈廣泛表達(dá)，這

與Mybbp1a功能密切相關(guān)，作為核糖體合成重要調(diào)節(jié)蛋白，其在神經(jīng)細(xì)胞正常細(xì)胞行為過程亦發(fā)揮重要作用。本研究說明Mybbp1a可作為腦缺氧的中晚期指標(biāo)，另外，Mybbp1a作為核糖體蛋白的重要轉(zhuǎn)錄因子，其在小鼠腦缺氧后中晚期表達(dá)減少，提示核糖體合成障礙很可能在神經(jīng)細(xì)胞退行性變過程中發(fā)揮重要作用。這也意味著Mybbp1a可作為臨床神經(jīng)細(xì)胞退行性變治療的潛在靶點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)4

1Hochstatter J，Holzel M，Rohrmoser M，etal.Myb-binding protein 1a (Mybbp1a) regulates levels and processing of pre-ribosomal RNA〔J〕.J Biol Chem，2012；287(29)：24365-77.

2Yamauchi T，Keough RA，Gonda TJ，etal.Ribosomal stress induces processing of Mybbp1a and its translocation from the nucleolus to the nucleoplasm〔J〕.Genes Cells，2008；13(1)：27-39.

3Holmberg-Olausson K，Nister M，Lindstrom MS.p53-Dependent and-Independent Nucleolar Stress Responses〔J〕.Cells，2012；1(4)：774-98.

4Mori S，Bernardi R，Laurent A，etal.Myb-binding protein 1A (MYbbP1A) is essential for early embryonic development，controls cell cycle and mitosis，and acts as a tumor suppressor〔J〕.PLoS One，2012；7(10)：e39723.

5Kang H，Shin JH.Repression of rRNA transcription by PARIS contributes to Parkinson's disease〔J〕.Neurobiol Dis，2014；73C：220-8.

〔2015-02-15修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：宋春來(1975-)，男，主檢法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)病理學(xué)研究。

中圖分類號(hào)〔〕R36〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)21-6063-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.21.025