曲子宮絳蟲染色標(biāo)本的制作和形態(tài)學(xué)觀察

楊祎程 ， 張國(guó)權(quán) ， 張?jiān)獊?， 劉立軍 ， 張 亮 ， 田啟會(huì) ， 張進(jìn)隆

(1.甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院 ， 甘肅武威733006；2.甘肅省武威市畜牧獸醫(yī)局 ， 甘肅武威733000)

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曲子宮絳蟲染色標(biāo)本的制作和形態(tài)學(xué)觀察

楊祎程1， 張國(guó)權(quán)1， 張?jiān)獊?， 劉立軍1， 張 亮1， 田啟會(huì)1， 張進(jìn)隆1

(1.甘肅畜牧工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院 ， 甘肅武威733006；2.甘肅省武威市畜牧獸醫(yī)局 ， 甘肅武威733000)

為了觀察研究曲子宮絳蟲的形態(tài)結(jié)構(gòu)和改進(jìn)絳蟲的染色方法；用H.E.染色法對(duì)曲子宮絳蟲進(jìn)行染色，在顯微鏡下觀察曲子宮絳蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)；制作出結(jié)構(gòu)清晰，顏色鮮艷的曲子宮絳蟲標(biāo)本，在光學(xué)顯微鏡下觀察到該絳蟲成節(jié)中雌雄生殖系統(tǒng)、排泄系統(tǒng)，孕節(jié)中子宮和蟲卵的結(jié)構(gòu)。為該蟲體在形態(tài)學(xué)蟲種鑒定和本病的確診提供參考依據(jù)。

曲子宮絳蟲 ； 蘇木素染色 ； 形態(tài)

曲子宮絳蟲隸屬于扁形動(dòng)物門絳蟲綱，多節(jié)絳蟲亞綱，圓葉目，裸頭科，該屬絳蟲為大型絳蟲體長(zhǎng)可達(dá)4.3 m，常寄生于綿羊、山羊、黃牛、耗牛等反芻動(dòng)物的小腸中。一條完整的絳蟲由頭節(jié)、頸節(jié)和體節(jié)3部分組成，生殖系統(tǒng)和排泄系統(tǒng)是曲子宮絳蟲比較重要的結(jié)構(gòu)[1]。關(guān)于莫尼茨絳蟲的形態(tài)學(xué)研究和染色方法報(bào)道很多，但對(duì)曲子宮絳蟲形態(tài)學(xué)的研究和染色方法的研究報(bào)道很少。本試驗(yàn)以天祝地區(qū)高山細(xì)毛羊小腸中采集到的曲子宮絳蟲為材料，采用H.E.染色法制作曲子宮絳蟲的染色標(biāo)本，對(duì)傳統(tǒng)的染色方法做了改進(jìn)，制作了結(jié)構(gòu)清晰、顏色鮮亮、不易褪色的曲子宮絳蟲的染色標(biāo)本。在光學(xué)顯微鏡下觀察到該絳蟲幼節(jié)中可見排泄系統(tǒng)和萌芽狀態(tài)的生殖系統(tǒng)；成節(jié)中發(fā)育完成的雌雄生殖系統(tǒng)和排泄系統(tǒng)；孕節(jié)中子宮和蟲卵的結(jié)構(gòu)。為該蟲體在形態(tài)學(xué)蟲種的鑒定和本病的確診提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)用曲子宮絳蟲采自天?？h牛羊定點(diǎn)屠宰場(chǎng)，1歲齡高山細(xì)毛羊的小腸中。

1.2 試劑和材料 蘇木素精，酒精，銨明礬，甘油，甲醇，二甲苯，加拿大樹膠，載玻片，蓋玻片，Olympus光學(xué)顯微鏡照相系統(tǒng)等。

1.3 方法

1.3.1 試驗(yàn)材料的處理 將采集的綿羊絳蟲，先用自來水沖洗3次，再用生理鹽水漂洗浸泡后，將完整的蟲體從頭節(jié)開始剪成2 cm左右的小段，依次按1-1、1-2、1-3… 的編號(hào)方法編號(hào)，將樣品分別用 70%乙醇固定，用于制片。

1.3.2 制作絳蟲染色標(biāo)本 絳蟲節(jié)段壓片固定：將選取的絳蟲節(jié)段壓入兩潔凈的載玻片中間，為了不使蟲體壓的過薄，可在載玻片兩端墊以適當(dāng)厚度的紙片，用線繩扎緊載玻片兩端，投入 70%酒精中固定24 h～48 h。

蘇木素-伊紅(H.E.染色法)染色法：具體步驟：(1)洗脫酒精：將壓片固定好的蟲體投入梯度酒精中50%酒精，10 min→30%酒精，10 min→蒸餾水，10 min；(2)染色：蘇木素染色液30 min→用蒸餾水漂洗10 min洗；(3)分色：用1%鹽酸溶液分化 10～20s；(4)染色：水伊紅染液10 min；(5)脫水：80%酒精，5 min→90%酒精，10 min→95%酒精，10 min100%酒精Ⅰ，10 min→100%酒精Ⅱ，10 min；(6)透明：苯酒精(1∶1)10 min→二甲苯，10 min；(7)封固：加拿大樹膠封固。

1.3.3 試驗(yàn)用絳蟲染色標(biāo)本的制作 將1.3.2 中得到的染色標(biāo)本在光學(xué)顯微鏡下觀察，根據(jù)其形態(tài)特征，確定所采得的絳蟲的種類，確定曲子宮絳蟲對(duì)應(yīng)的編號(hào)，將所有曲子宮絳蟲從頭節(jié)至孕節(jié)的樣品用H.E.染色法制作染色標(biāo)本。

2 結(jié)果

2.1 曲子宮絳蟲寄生部位 曲子宮絳蟲寄生于高山細(xì)毛羊空腸前段的小腸黏膜上(見中插彩版圖1)。

2.2 外部形態(tài)的觀察 曲子宮絳蟲成蟲蟲體呈背腹扁平的帶狀，乳白色，蟲體長(zhǎng)2.7 m，幼節(jié)寬0.3～0.8 mm，成節(jié)寬 4.0～10.0 mm，孕節(jié)寬 8.0～15.0 mm。頭節(jié)小，呈圓球形；頸節(jié)在頭節(jié)之后，比頭節(jié)細(xì)而薄，幼節(jié)細(xì)而薄，成節(jié)比幼節(jié)寬，也較厚，孕節(jié)寬而厚，每個(gè)節(jié)片呈上窄下寬的梯形。

2.3 染色標(biāo)本形態(tài)觀察 用H.E.染色法染制的標(biāo)本在光學(xué)顯微鏡下觀察，曲子宮絳蟲成蟲頭節(jié)紫紅色，四個(gè)近圓形吸盤位于頭節(jié)前端的側(cè)面，均勻排列。頸節(jié)，紫紅色，分節(jié)很細(xì)，排泄管清晰可見，看不到生殖系統(tǒng)器官(見中插彩版圖2)。幼節(jié)，呈紫紅色，排泄管清晰可見，生殖系統(tǒng)可見萌芽狀態(tài)卵巢、卵模、卵黃腺、睪丸等生殖器官都沒有發(fā)育成熟(見中插彩版圖 3,4)。成節(jié)，成節(jié)內(nèi)有一組生殖器官，無(wú)規(guī)律的分布于節(jié)片一側(cè)，生殖孔開口于生殖器官分布的一側(cè)，卵巢和卵黃腺在節(jié)片一側(cè)構(gòu)成菜花狀結(jié)構(gòu)，將卵模圍在中間。子宮出現(xiàn)開始發(fā)育，呈彎曲狀，位于兩縱排泄管的內(nèi)側(cè)，分布于節(jié)片前緣。睪丸數(shù)百個(gè)，分布于節(jié)片兩側(cè)縱排泄管之外(見中插彩版圖 5)。孕節(jié)，有排泄管，生殖系統(tǒng)中，卵巢、卵模、卵黃腺、睪丸等生殖器官已逐漸退化，子宮中充滿蟲卵占據(jù)了整個(gè)節(jié)片(見中插彩版圖6)。子宮中的蟲卵逐漸發(fā)育成熟。

3 討論

本試驗(yàn)以天祝高山細(xì)毛羊小腸內(nèi)寄生的曲子宮絳蟲為試驗(yàn)材料，用H.E.染色法制作了結(jié)構(gòu)清晰、顏色鮮亮、不易褪色的曲子宮絳蟲的染色標(biāo)本，并在光學(xué)顯微鏡下觀察了該絳蟲的縱排泄管、雌雄生殖器官等結(jié)構(gòu)，為該絳蟲形態(tài)學(xué)研究和蟲體鑒定添加了新的參考資料。

絳蟲的染色方法有很多種，裘學(xué)麗等[2]采用齊爾石碳酸復(fù)紅染液對(duì)人體內(nèi)的帶絳蟲成蟲進(jìn)行染色制片效果很好。奚琳琳等[3]和紀(jì)偉華等[4]采用孔雀綠染色法對(duì)人體內(nèi)帶絳蟲成蟲的孕節(jié)片進(jìn)行染色制片，得到的染色標(biāo)本子宮側(cè)枝為亮綠色，其他部位無(wú)色，易于觀察。王宏運(yùn)[5]采用蘇木素染色法制作貝氏莫尼茨絳蟲的染色標(biāo)本，觀察到結(jié)構(gòu)清晰的成節(jié)中雌雄生殖系統(tǒng)、排泄系統(tǒng)，孕節(jié)中子宮和蟲卵的結(jié)構(gòu)。任成林[6]曾用哈里斯氏蘇木精染色液對(duì)羊曲子宮絳蟲成蟲進(jìn)行染色制片也得到了比較滿意的效果。本試驗(yàn)采用H.E.染色法制作絳蟲的染色標(biāo)本，對(duì)傳統(tǒng)的染色方法做了改進(jìn)。在浸染過程中應(yīng)勤檢查頻翻動(dòng)，使染液浸透蟲體。寧可深染，不宜淺染，以免經(jīng)分色后色淡影響鑒定。分色是關(guān)鍵，嚴(yán)格拿握時(shí)間，蟲體呈紫紅色為宜。隨時(shí)用顯微鏡觀察。透明時(shí)間應(yīng)以最理想的結(jié)果為宜,因此在透明過程中也應(yīng)經(jīng)常觀察,在顯微鏡下能清晰分辨蟲體內(nèi)部各器官,即可取出封片,一般壓制較薄的節(jié)片透明時(shí)間短,反之則較長(zhǎng)。摸索最佳的染色和透明時(shí)間。用此改進(jìn)的方法制作的曲子宮絳蟲標(biāo)本，成節(jié)中雌雄生殖系統(tǒng)和排泄系統(tǒng)結(jié)構(gòu)清晰，孕節(jié)中子宮和蟲卵的結(jié)構(gòu)也很好辨認(rèn)。

[1] 汪明.獸醫(yī)寄生蟲學(xué)[M],3版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2003,104-113.

[2] 裘學(xué)麗,陳艷,牟榮.帶絳蟲成蟲節(jié)片染色方法的探討[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,30(4):376.

[3] 奚琳琳,楊毅梅.帶絳蟲妊娠節(jié)片孔雀綠染色標(biāo)本制作[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2008,3(8)：474.

[4] 紀(jì)偉華,郭冀玲.帶絳蟲妊娠節(jié)片標(biāo)本制作方法的研究[J].中國(guó)人獸共患病雜志,2001,17(4)：73-74.

[5] 王宏運(yùn).貝氏莫尼茨絳蟲幼節(jié)和成節(jié)間差異基因的EST研究[D].新疆：石河子大學(xué),2007：11-16.

[6] 任成林.絳蟲成蟲染制方法的改進(jìn)[J].動(dòng)物學(xué)雜志,1993,28(6)：28-29.

2016-06-20

楊祎程(1985-)，男，講師，碩士，主要從事動(dòng)物解剖生理教學(xué)與研究工作，E-mail:dongyyang@126.com.

張進(jìn)隆,E-mail:xmgczhangjinlong@163.com

.S852.73+4

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0529-6005(2016)10-0025-02