王　 旭1 馬可佳1 江云飛1 趙　貞2

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流行性感冒病毒的微生物檢驗

王 旭1 馬可佳1 江云飛1 趙貞2

【摘要】目的 探討我院流行性感冒病毒的微生物檢驗現(xiàn)狀，為流感的防治提供基礎及為臨床診斷提供依據(jù)。方法 選取2014年10月～2015 年4月在我院就醫(yī)的有流感樣癥狀的患者40例，對其取鼻、咽拭子或含漱液樣本進行微生物檢驗。結果 通過檢驗患者的鼻、咽拭子及含漱液標本，檢測出患者中存在流行性感冒病毒28例，檢測樣本陽性率70％。結論 流行性感冒病毒是流行性感冒的病原體，可引起人、禽、豬、馬等的感染及發(fā)病，流感病毒感染者通常有急起高熱、全身疼痛、乏力等臨床癥狀。

【關鍵詞】流行性感冒病毒；流感；微生物檢驗

流行性感冒病毒俗稱流感病毒，可以分為甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，是一種傳播速度快、傳染性強的疾病，主要通過飛沫或與被污染物接觸等渠道進行傳播，一般多發(fā)于秋冬季節(jié)［1］。甲（A）型流感病毒的抗原性容易發(fā)生變異，曾引起多次世界性的大流行；乙（B）型流感病毒的致病性相對較低，一般情況下引起小范圍的流行；丙型流感病毒的抗原性相對穩(wěn)定，極少造成大面積流行，多發(fā)于嬰幼兒及青年［2］。當患者感染流感病毒時，通常會有全身疼痛、急起高熱、乏力等癥狀。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年10月～2015年4月在我院就醫(yī)的有流感樣癥狀的患者40例，其中男性22例，女性18例，年齡3月齡～70歲，取患者鼻、咽拭子或含漱液樣本進行微生物檢驗。

1.2 檢驗方法

1.2.1 標本采集及處理 取患者鼻、咽拭子或含漱液標本（以發(fā)病后3 d內(nèi)標本為最佳）；如要進行血清學診斷，在患者患病早期及恢復期采集兩份血清［3］。標本在采集后應立即入冰壺送檢，在48 h內(nèi)如未能進行接種，低溫保存標本。采集樣本所用的棉拭子應浸入5 ml滅菌的生理鹽水中，含漱液應存放在無菌燒杯中［4］。標本液在充分振蕩后，在4℃保存5～10 min，待自然沉淀后，取其上清液3 ml，在上清液中加入青霉素、鏈霉素，在4℃保存2 h后進行接種。

1.2.2 分離培養(yǎng) 流行性感冒病毒分離培養(yǎng)方法有雞胚培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)及動物分離培養(yǎng)。雞胚培養(yǎng)：將標本接種到日齡適當?shù)碾u胚尿囊腔或羊膜腔，并在35℃孵育2～3 d，放棄24 h內(nèi)非特異性死亡的雞胚。收集孵育后的尿囊液或羊水，對其進行血凝試驗，如血凝呈陽性，使用特異性抗體進行血凝抑制試驗，以此來鑒定病毒型及亞型；如血凝呈陰性，需要在雞胚中進行二次盲傳。細胞培養(yǎng)：將標本接種到猴腎、原代人胚腎及傳代狗腎細胞中，在35℃孵育10～14 d，實時觀察是否有病變現(xiàn)象發(fā)生。如有病變現(xiàn)象，進行血凝試驗或紅細胞吸附試驗進行核查；如未有病變現(xiàn)象，需要每隔2～3 d進行1次核查；如在第14 d后仍無病毒的生長，可以盲傳一代［5］。動物分離培養(yǎng)：在動物分離培養(yǎng)中雪貂是最易感體，但因其成本較高，在臨床中較少使用，一般情況下選擇雞胚培養(yǎng)和細胞培養(yǎng)兩種方法。

1.2.3 鑒定 不同的流感病毒只能凝集其相應的紅細胞，對于血凝呈陽性的分離株，其鑒定方法可以使用特異性的抗體進行血凝抑制試驗，此法可以確定病毒型及亞型［6］。

2 結果

通過對患者的鼻、咽拭子及含漱液標本進行微生物檢測，檢驗出患者中存在流行性感冒病毒28例，檢測樣本陽性率70％。

3 討論

流感病毒的微生物檢驗具有很高的臨床意義，流感患者是流行性感冒的主要傳染源，同時隱性感染者及被感染的動物也是流感的主要傳染源之一。流感靠帶有流感病毒的飛沫進行傳播，同時共用手帕、毛巾等間接接觸也可感染病毒。機體在被感染后，病毒經(jīng)過呼吸道進入患者體內(nèi)［7］。流感病毒在傳入人群之后，具有很強的傳染性并迅速的蔓延擴張，其傳播速度、廣度與人口的密度有著直接關系。當病毒進入人體后，如果咳嗽反射未能將其及時的清除，或未被黏膜分泌物中非特異性抑制物滅活，或未能被人體的特異性IgA抗體中和，會感染少數(shù)呼吸道的上皮細胞，引發(fā)細胞產(chǎn)生變性、空泡，并快速的產(chǎn)生子代病毒體侵入至鄰近的細胞。呼吸道黏膜的上皮細胞是流感病毒入侵的目標主要，偶爾會有侵襲感染者腸黏膜引發(fā)胃腸型流感的病例。流感病毒潛伏期的長短主要由侵入病毒量與機體免疫狀態(tài)決定，一般情況下為1～4 d。流感患者多有發(fā)熱、畏寒、頭痛、乏力等癥狀。流感具有發(fā)病率高、病死率低的特點。在臨床中的死亡案例通常不是由流感病毒直接導致，而是由并發(fā)的細菌性感染導致的，多發(fā)生在老人、嬰幼兒和慢性病患者［8］。通常情況下，流行性感冒病毒的抵抗力相對較弱，耐熱性十分的差，在等于或高于56℃環(huán)境中保持30 min即可達到病毒滅活的目的，并對日光、紫外線、干燥環(huán)境以及甲醛、乙醚、乳酸等化學藥物有很大的敏感性。流感病毒在室溫環(huán)境下傳染性喪失較快，但在0～4℃的環(huán)境中，流感病毒可以存活數(shù)周，在- 70℃或以下的環(huán)境中能夠凍干后能夠長期的存活。

參考文獻

［1］ 趙娣偉.流行性感冒病毒檢測方法的研究進展［J］.職業(yè)與健康，2014，30（11）：1553-1555．

［2］ 邢曉會，王大燕，舒躍龍.流行性感冒病毒耐藥性檢測方法研究進展［J］.中華預防醫(yī)學雜志，2013，47（5）： 463-465 ．

［3］ 陳燁.實時熒光PCR用于流感病毒檢測的效果分析［J］.醫(yī)藥與保健，2014（3）：100．

［4］ 卞家蓉，聶蔚，修清玉.流感病毒實驗室檢測技術研究進展［J］．國際病毒學雜志，2012，19（5）： 228-232．

［5］ 袁穎，常鑫，隋振耿.淺談病毒基因檢驗結果評價［J］.醫(yī)學信息，2013，26（4）：500-501．

［6］ 劉鳳.分子技術在流感病毒檢測中的應用［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2014，41（12）：2249-2251．

［7］ 姜法春，呂思祿，賈曉蓉，等.季節(jié)性滅活流行性感冒病毒裂解疫苗安全性和免疫原性及與甲型H_1N_1流行性感冒病毒的交叉免疫反應研究［J］.中國疫苗和免疫，2011（2）：143-146．

［8］ 劉述華.流行性感冒病毒的微生物檢驗［J］.醫(yī)學信息（下旬刊），2013，26（8）：521．

Microbiological Examination of Influenza Viruses

WANG Xu1MA Kejia1JIANG Yunfei1ZHAO Zhen21 Clinical Laboratory，Prevention and Control Center of Heilongjiang Provincial Land Reclamation Bureau，Harbin Heilongjiang 150090，China，2 College of Municipal and Environmental Engineering，Harbin Institute of Technology，Harbin Heilongjiang 150090，China

【Abstract】Objective To investigate the current situation of the microbial test of influenza virus in our hospital，to provide the basis for the prevention and treatment of influenza and to provide evidence for clinical diagnosis.Methods Selected during October 2014 to April 2015，in our hospital for medical treatment in 40 cases of patients with influenza like symptoms，the from nose，pharynx swabs or gargle samples for microbiological examination．Results By examining a patient's nose，throat swab and rinse fluid samples were detected in patients with influenza virus in 28 cases，the samples were detected positive rate of 70％.Conclusion Influenza virus is the pathogen of influenza，caused by the human，poultry，pigs，horses and other infection and disease and influenza virus infection usually have abrupt high fever，body pain，significant fatigue and other clinical symptoms．

【Key words】Influenza virus，Influenza，Microbiological examination

【中圖分類號】R446

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）07-0157-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．120

作者單位：1 黑龍江省農(nóng)墾總局疾病預防控制中心檢驗科，黑龍江哈爾濱 150090 2 哈爾濱工業(yè)大學市政環(huán)境工程學院，黑龍江 哈爾濱 150090