李論宇，別明江，阿忠，扎西努宗，李長山，杜寶中

(1.西藏大學(xué)，西藏 拉薩 850000;2.四川大學(xué)，四川 成都 610000;3.西藏自治區(qū)第三人民醫(yī)院，西藏 拉薩 850000;4.西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，西藏 拉薩 850000)

西藏地區(qū)135株結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析

李論宇1，別明江2，阿忠3，扎西努宗3，李長山4，杜寶中1

(1.西藏大學(xué)，西藏 拉薩 850000;2.四川大學(xué)，四川 成都 610000;3.西藏自治區(qū)第三人民醫(yī)院，西藏 拉薩 850000;4.西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，西藏 拉薩 850000)

了解西藏地區(qū)結(jié)核分枝桿菌對(duì)抗結(jié)核藥物的耐藥情況，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。以西藏自治區(qū)第三人民醫(yī)院的痰涂片標(biāo)本抗酸菌檢測陽性的肺結(jié)核患者作為監(jiān)測對(duì)象，采用WHO推薦的堿處理法對(duì)痰標(biāo)本進(jìn)行處理后、培養(yǎng)，成功分離的結(jié)核分枝桿菌的菌株，然后對(duì)這135例患者的菌株藥敏實(shí)驗(yàn)，抗結(jié)核藥物包括異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇、阿卡米星、左氧氟沙星。結(jié)果 135例患者的菌株中，耐藥菌株 86例，總耐藥率達(dá) 64.3%(86/135)，總耐多藥率達(dá) 20.7%(28/135)，對(duì) INH、RFP、SM、EMB、AKM、LVX 的耐藥率分別為 39.3%(5/135)、36.9%(50/135)、44.9%(61/135)、19.3%(26/135)、5.9%(8/135)和 8.0%(11/135)。經(jīng)檢驗(yàn)，x2具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：西藏地區(qū)肺結(jié)核患者的耐藥率高。

西藏地區(qū);結(jié)核分枝桿菌;耐藥性

近幾十年來,結(jié)核病的蔓延呈現(xiàn)重新上升趨勢。引起全球結(jié)核感染疫情回升的主要因素之一是耐藥結(jié)核分枝桿菌,尤其是耐多藥結(jié)核分枝桿菌的出現(xiàn)及其引起疾病的蔓延。我國結(jié)核的耐藥形勢十分嚴(yán)峻,總耐藥率為27.8%,耐多藥率高達(dá)10.7%,由此而造成的結(jié)核病患病率和死亡率居高不下。我國為 22 個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，同時(shí)也是 27 個(gè)耐多藥結(jié)核病流行嚴(yán)重的國家之一[1]西藏是結(jié)核病的高發(fā)地區(qū)，呈發(fā)病率高、耐藥率高的特點(diǎn)。耐多藥肺結(jié)核傳染期長、治療難度大、費(fèi)用高，有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道其病死率可達(dá) 37%而治療有效率僅為 56%[2]。通過對(duì)耐藥結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行耐藥性監(jiān)測，來增加耐藥結(jié)核病治愈率、降低病死率，給臨床醫(yī)師提供及時(shí)準(zhǔn)確的耐藥數(shù)據(jù)以便其制定最佳方案實(shí)施治療。為了解西藏地區(qū)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌的耐藥現(xiàn)狀，通過對(duì) 2015年 8 月至2016年11月間分離培養(yǎng)的135株結(jié)核分枝桿菌菌株進(jìn)行了耐藥性研究。

1 材料

2015年8月至2016年11月從西藏自治區(qū)第三人民醫(yī)院肺科獲得肺結(jié)核患者痰培養(yǎng)陽性的結(jié)核分枝桿菌菌株135株。結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株 H37Rv(ATCC27294)由國家疾病預(yù)防控制中心提供，西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室真空冷凍保存。

酸性羅氏培養(yǎng)基、改良羅氏培養(yǎng)基及對(duì)硝基苯甲酸(PNB)培養(yǎng)基根據(jù)中國防癆協(xié)會(huì)《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》[2]方法自行配制使用；藥敏試驗(yàn)藥物種類及培養(yǎng)基內(nèi)藥物終濃度如下：異煙肼(INH)0.2μg/ml、利福平(RFP)40μg/ml、鏈霉素(SM)4μg/ml、乙胺丁醇(EMB)20μg/ml、阿米卡星(AMK)10μg/ml、左氧氟沙星(LVX)20μg/ml。

2 方法

試驗(yàn)菌株的分離培養(yǎng)鑒定操作方法步驟遵照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。痰液標(biāo)本經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.0%Na OH處理20min后接種至酸性羅氏培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)5-8周。分離培養(yǎng)的結(jié)核分枝桿菌菌株轉(zhuǎn)接至改良羅氏培養(yǎng)基37℃?zhèn)鞔囵B(yǎng)4-5周，待其生長良好后采用PNB生長試驗(yàn)對(duì)其菌群進(jìn)行初步鑒定。PNB培養(yǎng)基上無菌落生長即為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群菌株，以結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv進(jìn)行對(duì)照。

采用WHO推薦的比例法進(jìn)行INH、RFP、SM、EMB、KM和LVX藥物敏感性試驗(yàn)。操作步驟遵照《結(jié)核病診斷實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)：耐藥百分比=含藥培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)/對(duì)照培養(yǎng)基上菌落數(shù)×100%。若耐藥百分比大于1%，則認(rèn)為受試菌對(duì)該抗結(jié)核藥物耐藥。

若稀釋菌液(10-4mg/ml)在對(duì)照培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)少于20個(gè)菌落，則應(yīng)從對(duì)照管傳代培養(yǎng)，重復(fù)試驗(yàn)。每批試驗(yàn)用結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv評(píng)價(jià)含藥培養(yǎng)基的質(zhì)量。

單耐藥：結(jié)核分枝桿菌對(duì)任一抗結(jié)核藥物耐藥；多耐藥：結(jié)核分枝桿菌對(duì) 2 種及以上抗結(jié)核藥物耐藥，不包括同時(shí)對(duì)INH和RFP耐藥；耐多藥(MDR)：至少同時(shí)對(duì)INH和RFP具有耐藥性。

3 藥敏結(jié)果

所研究的 135株結(jié)核分枝桿菌臨床分離菌株中，對(duì)所試6種抗結(jié)核藥物的藥敏結(jié)果如下：全敏感49株，占35.7%，86株對(duì)一種或一種以上藥物耐藥，總耐藥率為64.3%，耐多藥28株，耐多藥率為20.7%。對(duì)6種所試藥物耐藥率由高到低依次為：鏈霉素44.9%(61/135)、異煙肼39.3%(5/135)、利福平36.9%(50/135)、乙胺丁醇19.3%、左氧氟沙星8.0%(11/135)、阿米卡星5.9%(8/135)。

4 討論

流動(dòng)人口結(jié)核病人、耐藥結(jié)核病人、HIV/TB雙重感染是當(dāng)今結(jié)核病控制工作中的三大重點(diǎn)難點(diǎn)[3]。耐藥結(jié)核病，尤其是耐多藥結(jié)核病產(chǎn)生，給結(jié)核病的預(yù)防、治療帶來了新問題，使結(jié)核病發(fā)病率“卷土從來”。

對(duì)初治病人采用正規(guī)的個(gè)性化療方案和 DOTS管理也是今后結(jié)核病控制策略中的重點(diǎn)。應(yīng)該認(rèn)識(shí)到，耐藥結(jié)核病是結(jié)核病疫情回升的主要原因，也是治療一大難點(diǎn)[4]。一旦發(fā)生耐藥結(jié)核病人，不但影響治療效果，而且通過調(diào)整治療方案，使用二線抗結(jié)核藥物，將使結(jié)核病患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)大大增加。故采取切實(shí)有效措施，減少耐藥結(jié)核病的發(fā)生，仍是控制結(jié)核病疫情之上策[5]。

[1] 肖東樓．全國結(jié)核病耐藥性基線調(diào)查報(bào)告(2007 - 2008年)/中華人民共和國衛(wèi)生部編[M]．北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:4．

[2] 莊玉輝，王國志，翟秉祥．結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程[J]．中國防癆雜志，1996(18):30．

[3] 趙東陽，要玉霞，謝春雨．成人結(jié)核病耐藥原因分析[J]．醫(yī)藥論壇雜志，2005,26(20):1.

[4] 馮俊華．四聯(lián)聯(lián)合治療耐多藥結(jié)核病[J]．中國防癆雜志，2004(26):46.

[5] 謝榮華．120例耐藥肺結(jié)核治療效果分析[J]．中國防癆雜志，2004(26):46-47.

李論宇(1988-)，男，碩士研究生西藏大學(xué)，研究方向：結(jié)核分枝桿菌耐藥性。

杜寶中，男，漢族，河南鄭州人，西藏大學(xué)副教授，研究方向：病原微生物致病性及耐藥機(jī)制。

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1671-1602(2016)24-0036-01