林中民，　王　芳，　張泉波，　陳　霖，　陳三妹，　陳國(guó)榮△

(1溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，浙江 溫州 325015；2紹興文理學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江 紹興 312000)

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姜黃素衍生物B06對(duì)2型糖尿病大鼠睪酮合成的影響*

林中民1，王芳1，張泉波1，陳霖1，陳三妹2，陳國(guó)榮1△

(1溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，浙江 溫州 325015；2紹興文理學(xué)院醫(yī)學(xué)院，浙江 紹興 312000)

[摘要]目的： 研究姜黃素衍生物B06對(duì)2型糖尿病大鼠睪酮合成的影響。方法: 雄性SD大鼠35只，隨機(jī)均分為正常對(duì)照組(C組)、高脂組(H組)、高脂治療組(HT組)、糖尿病組(D組)和糖尿病治療組(DT組)，后4組高脂喂養(yǎng)4周后，D組及DT組用低劑量鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病，HT組和DT組用0.2 mg·kg-1·d-1的B06灌胃8周。微量血糖儀測(cè)定大鼠血糖濃度;ELISA法測(cè)定血胰島素水平，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù);光鏡和電鏡觀察睪丸形態(tài);放射免疫法測(cè)定血睪酮、雌二醇水平;免疫組化檢測(cè)Leydig細(xì)胞的類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)睪丸Leydig細(xì)胞StAR、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)、細(xì)胞色素P450 17A1(P450c17)、細(xì)胞色素P450芳香化酶(P450arom)、3β-羥基類固醇脫氫酶(HSD)及17β-HSD的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果: H組及D組血糖、胰島素抵抗指數(shù)升高，血清睪酮水平降低，經(jīng)B06治療后好轉(zhuǎn)；H組及D組睪丸曲細(xì)精管變形，生精細(xì)胞脫落，Leydig細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少且擴(kuò)張，胞核皺縮，染色質(zhì)稀疏，經(jīng)B06治療后病變減輕；D組的StAR蛋白表達(dá)減弱，經(jīng)B06治療后表達(dá)增強(qiáng)；H組及D組Leydig細(xì)胞StAR、P450scc mRNA表達(dá)降低，經(jīng)B06治療后升高，P450c17、P450arom、3β-HSD及17β-HSD mRNA表達(dá)未見明顯差異。結(jié)論: B06可緩解2型糖尿病大鼠睪丸病變，提高血清睪酮水平，這可能與B06改善機(jī)體代謝紊亂并上調(diào)Leydig細(xì)胞StAR及P450scc mRNA表達(dá)水平相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]糖尿??； 姜黃素衍生物B06； Leydig細(xì)胞； 睪酮； 類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白

研究指出，男性糖尿病患者常引起性腺機(jī)能減退[1]，其睪酮分泌水平降低，而雄性體內(nèi)95%的睪酮由睪丸Leydig細(xì)胞合成，故糖尿病患者睪酮水平的降低可能跟睪酮合成過程中的-系列酶密切相關(guān)。姜黃素已被證實(shí)具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗炎等[2]廣泛的藥理活性，而姜黃素衍生物B06(以下簡(jiǎn)稱B06)去除了不穩(wěn)定的基團(tuán)，其是否影響糖尿病睪酮的合成鮮有報(bào)道。本研究通過觀察B06對(duì)高脂飲食及2型糖尿病大鼠睪丸病理形態(tài)學(xué)及性激素水平變化的影響，檢測(cè)睪酮合成和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中的關(guān)鍵酶基因的表達(dá)水平，探討B(tài)06對(duì)高脂飲食及糖尿病機(jī)體睪酮合成的影響及機(jī)制。

材料和方法

1動(dòng)物

SPF級(jí)Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠35只，體重160～200 g，由溫州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2主要試劑

姜黃素衍生物B06由溫州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院梁廣教授惠贈(zèng)；鏈脲佐菌素購自廈門星隆達(dá)化學(xué)試劑有限公司；大鼠胰島素ELISA試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司；類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein，StAR)兔抗多克隆抗體購自Santa Cruz；廣譜 II 抗購自北京中杉金橋生物試劑公司；RT試劑盒購自Promega；2×PCR Master Mix購自天根生化科技有限公司；DNA Marker(100 bp-I ladder)購自上海捷瑞生物工程有限公司；Biowest Agarose購自Gene Tech；GoldView I型購自Solarbio；其它生化試劑均為進(jìn)口分裝或國(guó)產(chǎn)分析純。所用引物由上海生工生物工程股份有限公司根據(jù)設(shè)計(jì)合成，見表1。

表1　PCR引物及擴(kuò)增條件

F: forwad; R: reverse; P450scc: cholesterol side-chain cleavage enzyme; P450c17: cytochrome P450 17A1; P450arom: cytochrome P450 aromatizing enzyme; HSD: hydroxysteroid dehydrogenase.

3主要方法

3.1動(dòng)物分組及處理雄性SD大鼠35只，隨機(jī)均分為5組(n=7)：正常對(duì)照(control, C)組、高脂(high fat, H)組、高脂治療(high fat treatment, HT)組、糖尿病(diabetes mellitus, D)組和糖尿病治療(diabetes treatment, DT)組，C組以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，后4組以高脂飼料喂養(yǎng)。高脂喂養(yǎng)4周后，D組及DT組在禁食12 h后按30 mg/kg的劑量腹腔注射鏈脲佐菌素(溶于0.1 mmol/L的枸櫞酸緩沖液內(nèi)，配成濃度為6 g/L的溶液，pH 4.0)，72 h后尾靜脈測(cè)血糖，血糖>16.7 mmol/L者視為為糖尿病造模成功，C組、H組及HT組腹腔注射等容積枸櫞酸緩沖液。成模后，后4組均繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)，HT組及DT組按0.2 mg·kg-1·d-1的劑量灌胃B06(B06溶于1%羧甲基纖維素鈉)，其余組灌胃等量的1%羧甲基纖維素鈉，持續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)第12周末，禁食12 h后用10%水合氯醛麻醉大鼠，股動(dòng)脈放血處死大鼠，收集血清和睪丸。

3.2血清指標(biāo)的檢測(cè)用微量血糖儀測(cè)血糖，ELISA法測(cè)血胰島素水平，并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(insulin resistance index，IRI)， IRI = glucose×insulin/22.5；放射免疫方法測(cè)血清睪酮(testosterone，T)、雌二醇(estradiol，E2)水平。

3.3光鏡標(biāo)本的制備取睪丸組織于Bouin液中固定，常規(guī)脫水并石蠟包埋，制成3 μm厚的切片，HE染色后光鏡下觀察睪丸組織結(jié)構(gòu)。

3.4電鏡標(biāo)本的制備具體步驟見參考文獻(xiàn)[3]。

3.5免疫組織化學(xué)制成3 μm厚的切片，經(jīng)脫蠟、水化，3%過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10 min，置于0.1 mol/L的枸櫞酸緩沖液中高壓抗原修復(fù)3 min，PBS漂洗3次后用StAR抗體(1∶300)37 ℃孵育1 h，PBS漂洗3次后用 II 抗37 ℃孵育30 min，再次PBS漂洗后DAB顯色，蘇木素復(fù)染封片，光鏡下觀察并拍照。

3.6RT-PCR采用TRIzol法提取組織總RNA，用NanoDrop 2000超微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA純度和濃度。參照Promega 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒實(shí)驗(yàn)說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，擴(kuò)增20 μL的cDNA。采用Tiangen的PCR試劑，反應(yīng)體系為20 μL，其中cDNA 1 μL，2×PCR Master Mix 10 μL，上游引物1 μL(10 μmol/L)，下游引物1 μL(10 μmol/L)，ddH2O 7 μL。擴(kuò)增條件為：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s;退火30 s(不同引物退火溫度及循環(huán)數(shù)見表1);72 ℃ 60 s；72 ℃ 10 min。然后，取目的基因擴(kuò)增產(chǎn)物及Marker各5 μL，在2%瓊脂糖凝膠上電泳，穩(wěn)壓100 V，30 min后采用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)攝影保存結(jié)果，用圖像分析軟件GelPro32分析各目的基因與內(nèi)參照S16基因的條帶積分光密度(IA)之比。

4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間兩兩比較采用LSD法，方差不齊采用K-W秩和檢驗(yàn)，兩兩比較采用Nemenyi法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1B06對(duì)血糖、血胰島素、IRI、T及E2水平的影響

高脂組血糖、血胰島素及IRI顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，血清T顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，經(jīng)B06治療后，高脂治療組血糖、血胰島素及IRI較高脂組顯著下降(P<0.01)，血清T無明顯差異；糖尿病組血糖、IRI及血清E2顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，血清T顯著低于對(duì)照組，經(jīng)B06治療后，糖尿病治療組血糖、血胰島素、IRI及血清E2較糖尿病組顯著下降(P<0.01)，血清T顯著升高(P<0.01)，見表2。

表2　各組大鼠血糖、血胰島素、IRI、T及E2比較

*P<0.05,**P<0.01vsC group;##P<0.01vsH group;△△P<0.01vsD group.

2光鏡觀察

睪丸HE染色顯示，對(duì)照組睪丸曲細(xì)精管內(nèi)各級(jí)生精細(xì)胞排列規(guī)則、緊密。Leydig細(xì)胞呈簇狀分布在曲細(xì)精管間及血管周圍，胞質(zhì)嗜酸性，核仁明顯。高脂組睪丸曲細(xì)精管變形，生精細(xì)胞脫落，排列紊亂。Leydig細(xì)胞未見明顯變化。高脂治療組睪丸較高脂組結(jié)構(gòu)改善，生精細(xì)胞排列清晰，有序。Leydig細(xì)胞分布均勻，未見明顯差異。糖尿病組睪丸曲細(xì)精管嚴(yán)重萎縮、變形，生精細(xì)胞明顯減少、空泡變性，甚至脫落阻塞管腔，精子少。間質(zhì)稀疏，Leydig細(xì)胞數(shù)量未見明顯差異，但細(xì)胞縮小，胞核皺縮、淡染。糖尿病治療組睪丸曲細(xì)精管較糖尿病組明顯改善，生精細(xì)胞增多，排列規(guī)則，層次增多，但仍有部分生精細(xì)胞排列紊亂，空泡變性。Leydig細(xì)胞分布均勻，形態(tài)明顯改善，見圖1。

Figure 1.The structures of rat testes and leyding cells observed under light microscope cells (HE staining) and transmission electron microscope (TEM).

圖1光鏡下各組大鼠睪丸和電鏡下各組大鼠睪丸Leydig細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察

3透射電鏡觀察

睪丸Leydig細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)顯示，對(duì)照組Leydig細(xì)胞胞漿內(nèi)含豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體及含豐富嵴的線粒體；胞核多呈圓形或橢圓形，染色質(zhì)分布均勻，核膜清晰，可見核仁。高脂組Leydig細(xì)胞主要表現(xiàn)為胞漿內(nèi)線粒體腫脹，嵴結(jié)構(gòu)模糊不清，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少且擴(kuò)張；胞核略縮小，核膜增厚，染色質(zhì)稀疏，核仁不清。高脂治療組Leydig細(xì)胞胞漿內(nèi)線粒體較豐富，可見固縮，少見嵴模糊，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)見輕度擴(kuò)張；核膜微皺縮，染色質(zhì)分布均勻，核仁清晰。糖尿病組Leydig細(xì)胞體積縮小，胞漿內(nèi)線粒體明顯腫脹，嵴模糊不清，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少伴明顯擴(kuò)張；核固縮，核膜周隙變大，染色質(zhì)嚴(yán)重變稀疏、邊集。糖尿病治療組Leydig細(xì)胞胞漿內(nèi)線粒體豐富，其中有部分腫脹及嵴模糊，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張；核膜清晰，染色質(zhì)分布均勻，見圖1。

4免疫組織化學(xué)法檢測(cè)StAR蛋白的表達(dá)

大鼠睪丸Leydig細(xì)胞存在于曲細(xì)精管之間的間質(zhì)中及血管周圍，StAR蛋白在Leydig細(xì)胞均為胞漿表達(dá)陽性。與對(duì)照組相比，糖尿病組的StAR表達(dá)明顯減弱，經(jīng)B06治療后，糖尿病治療組StAR表達(dá)增加；對(duì)照組、高脂組和高脂治療組間未見明顯差異，見圖2。

Figure 2.The protein expression of StAR in the Leydig cells(immunohistochemical method).

圖2免疫組織化學(xué)法觀察各組大鼠睪丸Leydig細(xì)胞StAR蛋白表達(dá)

5B06對(duì)Leydig細(xì)胞StAR、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(cholesterol side-chain cleavage enzyme， P450scc)、細(xì)胞色素P450c 17A1(cytochrome P450c 17A1,P450c17)、細(xì)胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450 aromatizing enzyme,P450arom)、3β-羥基類固醇脫氫酶(hydroxysteroid dehydrogenase，HSD)及17β-HSD的mRNA表達(dá)水平的影響

與對(duì)照組相比，高脂組睪丸Leydig細(xì)胞StAR的mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01)，P450scc及17β-HSD的mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05)，P450c17、P450arom及3β-HSD的mRNA表達(dá)未見顯著差異；糖尿病組Leydig細(xì)胞StAR、P450scc、3β-HSD及17β-HSD的mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.01)，P450c17及P450arom的mRNA表達(dá)呈下降趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。經(jīng)B06治療后，高脂治療組Leydig細(xì)胞StAR的mRNA表達(dá)較高脂組顯著升高(P<0.01)，其余基因表達(dá)未見明顯差異；糖尿病治療組Leydig細(xì)胞StAR和P450scc的mRNA表達(dá)較糖尿病組顯著升高(P<0.01)，3β-HSD及17β-HSD的mRNA表達(dá)呈升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，P450c17及P450arom的mRNA表達(dá)未見顯著差異,見圖3、表3。

討論

2型糖尿病是一組以高血糖和胰島素抵抗為特征的內(nèi)分泌代謝性疾病，同時(shí)，高脂飲食被認(rèn)為是誘導(dǎo)胰島素抵抗及2型糖尿病獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。大量研究表明，糖尿病機(jī)體生精能力減弱，性功能及生殖能力障礙[4-5],其直接原因與持續(xù)高血糖引起的細(xì)胞代謝異常、氧化應(yīng)激及長(zhǎng)期的代謝紊亂導(dǎo)致的微血管病變有關(guān)[6-7]。而睪酮在促進(jìn)生精細(xì)胞的發(fā)生發(fā)育、維持性腺結(jié)構(gòu)及功能的完整上起到關(guān)鍵性的作用。本研究中生殖系統(tǒng)損傷的表現(xiàn)主要為睪丸組織損傷，伴有血清睪酮水平的降低，與我們以往的研究結(jié)果一致[8]。其中，高脂及糖尿病狀態(tài)下的睪丸電鏡表現(xiàn)主要為L(zhǎng)eydig細(xì)胞的線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少伴擴(kuò)張，以糖尿病更為嚴(yán)重。

體內(nèi)95%的睪酮有睪丸Leydig細(xì)胞合成和分泌[9]，睪酮分泌主要受下丘腦-垂體-睪丸軸調(diào)節(jié)。下丘腦和腺垂體依次分泌的促性腺激素釋放激素和黃體生成素與相應(yīng)的受體結(jié)合，進(jìn)而激活Leydig細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑[10-11]。位于線粒體外膜的StAR是類固醇激素合成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，它將膽固醇從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到位于線粒體內(nèi)膜的P450scc上，同時(shí)StAR可加速膽固醇向P450scc的傳遞，在類固醇生成系列酶的上游發(fā)揮作用。而孕烯醇酮被轉(zhuǎn)運(yùn)出線粒體到滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)后，在3β-HSD、P450c17、17β-HSD催化下，最終生成睪酮。睪酮合成后，可被P450arom部分轉(zhuǎn)化為雌二醇。因此，類固醇生成中最關(guān)鍵的是線粒體內(nèi)膽固醇向孕烯醇酮的轉(zhuǎn)換[12]。我們的研究中表明了Leydig細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在高脂及糖尿病機(jī)體睪酮合成的過程中可能起到關(guān)鍵作用。其中，高脂狀態(tài)下主要表現(xiàn)為L(zhǎng)eydig細(xì)胞StAR、P450scc及17β-HSD的mRNA表達(dá)降低，糖尿病狀態(tài)下主要表現(xiàn)為L(zhǎng)eydig細(xì)胞StAR、P450scc、3β-HSD及17β-HSD的mRNA表達(dá)降低，進(jìn)而導(dǎo)致睪酮合成下降。

Figure 3.The mRNA expression of rat Leydig cells by RT-PCR.

圖3大鼠睪丸Leydig細(xì)胞各mRNA的表達(dá)

表3各組大鼠睪丸Leydig細(xì)胞StAR、P450scc、P450c17、P450arom、3β-HSD和17β-HSD mRNA表達(dá)的比較

Table 3.The mRNA expression of StAR, P450scc, P450c17, P450arom, 3β-HSD and 17β-HSD in the rat Leydig cells with different treatments (Mean±SD.n=3)

GroupStARP450sccP450c17P450arom3β-HSD17β-HSDC1.54±0.101.58±0.540.75±0.280.40±0.261.95±0.100.71±0.26H0.91±0.17**1.10±0.38*0.64±0.330.25±0.061.43±0.440.30±0.09*HT1.31±0.22##1.25±0.140.62±0.290.42±0.201.68±0.230.35±0.08D0.58±0.07**0.37±0.16**0.52±0.260.17±0.080.86±0.41**0.22±0.11**DT1.20±0.10△△1.59±0.17△△0.76±0.250.13±0.051.42±0.380.48±0.25

*P<0.05,**P<0.01vsC group;##P<0.01vsH group;△△P<0.01vsD group.

相關(guān)的資料顯示，高脂飲食可引起大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖，進(jìn)而影響大鼠的生精能力和雄激素水平[13]。Premalatha等[14]還指出，組織內(nèi)睪酮的濃度可作為一個(gè)重要的指標(biāo)來評(píng)估類固醇代謝酶的表達(dá)活性，而高血糖已被證實(shí)能抑制類固醇合成，這與我們的研究中高脂及糖尿病狀態(tài)下睪酮合成相關(guān)基因的表達(dá)降低相符。另有豐富的生化、臨床和遺傳學(xué)的證據(jù)表明StAR是一個(gè)不穩(wěn)定的蛋白中介[15]，是睪酮合成過程中最關(guān)鍵的限速步驟之一，這同樣在我們的研究中得到證實(shí),表現(xiàn)為StAR蛋白的表達(dá)減弱。

我們以往的研究顯示，姜黃素衍生物具有降血糖、降血脂、增加胰島素敏感性及改善大鼠肝臟纖維化作用[16]。Sahoo等[17]指出姜黃素在睪丸組織的損傷中起增強(qiáng)抗氧化活性及減輕氧化應(yīng)激的作用，從而保護(hù)睪丸結(jié)構(gòu)和功能，并提高睪酮水平。我們的研究顯示，姜黃素衍生物B06的治療可以明顯緩解高脂及糖尿病大鼠的代謝紊亂，并改善睪丸的病理病變。同時(shí)，B06還能提高Leydig細(xì)胞StAR和P450scc的mRNA表達(dá)水平，進(jìn)而顯著提高睪酮含量，這可能與B06改善Leydig細(xì)胞的線粒體病變相關(guān)，在類固醇生成的上游發(fā)揮作用。但是，是否由于刺激不足而沒有引起3β-HSD、17β-HSD等其它酶的變化，各種酶之間的具體差異及機(jī)制，還需要進(jìn)一步研究。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 余小慧)

Effect of curcumin derivative B06 Bob on synthesis of testosterone from type 2 diabetic ratsLIN Zhong-min1, WANG Fang1, ZHANG Quan-bo1, CHEN Lin1, CHEN San-mei2, CHEN Guo-rong1

(1DepartmentofPathology,TheFirstAffiliatedHospital,WenzhouMedicalUniversity,Wenzhou325015,China;2MedicalCollege,ShaoxingUniversity,Shaoxing312000,China.E-mail:chengr1978@aliyun.com)

[ABSTRACT]AIM: To investigate the effect of curcumin derivatives B06(B06) on the synthesis of testosterone from type 2 diabetic rats. METHODS: Male Sprague-Dawley rats were evenly divided into 5 groups randomly: normal control group (C group), high fat group (H group), high fat treatment group (HT group), diabetes mellitus group (D group) and diabetes treatment group (DT group). The rats in the later 4 groups were fed with high fat diet, after 4 weeks of high fat diet feeding, the rats from D group and DT group were injected with low dose of streptozotocin intraperitoneally to induce diabetes mellitus, while the rats in HT group and DT group were gavaged with B06 at the dose of 0.2 mg·kg-1·d-1for 8 weeks. The blood glucose was detected by glucometer, blood insulin was assayed by ELISA and the insulin resistance index was calculated. The morphology of testes were observed by light and transmission electron microscopy. Serum testosterone and estradiol were measured by radioimmunoassay. The protein expression of steroidogenic acute regulatory protein (StAR) was detected by immunohistochemistry. The mRNA expression of StAR, cholesterol side-chain cleavage enzyme (P450scc), cytochrome P450 17A1 (P450c17), cytochrome P450 aromatizing enzyme (P450arom), 3β-hydroxysteroid dehydrogenase (HSD) and 17β-HSD was detected by RT-PCR. RESULTS: The levels of blood glucose and insulin resistance index were increased in H group and D group, and serum testosterone was decreased, all of which were reversed after the treatment of B06. Testicular seminiferous tubule was distorted, spermatogenic cells were dropped in H group and D group. In addition, leydig cells were found to have swelling mitochondria in H group and D group, endoplasmic reticulum was reduced, and there was karyopyknosis accompany with sparse chromatin, all of which were ameliorated by B06. The protein expression of StAR was decreased in D group. The mRNA expression of StAR and P450scc was decreased in H group and D group, all of which were increased in B06 treatment group. There was no significant difference in the mRNA expression of P450c17, P450arom, 3β-HSD and 17β-HSD. CONCLUSION: B06 may increase serum testosterone and relieve the damage of testes from type 2 diabetic rats. B06 improves metabolic disorder by up-regulating mRNA expression of StAR and P450scc.

[KEY WORDS]Diabetes mellitus; Curcumin derivative B06; Leydig cells; Testosterone; Steroidogenic acute re-gulatory protein

doi:10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.02.027

[中圖分類號(hào)]R587.1; R363

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

通訊作者△Tel: 0577-55579795； E-mail: chengr1978@aliyun.com

*[基金項(xiàng)目]浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.LY12p6002)；浙江省公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃項(xiàng)目(No.2011c23123)

[收稿日期]2015- 08- 10[修回日期] 2015- 10- 19

[文章編號(hào)]1000- 4718(2016)02- 0352- 07