吳玉強(qiáng)　薛文翰

中藥逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥的研究進(jìn)展

吳玉強(qiáng)薛文翰

白血病多藥耐藥是導(dǎo)致化療失敗的主要原因，其機(jī)制主要與膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、酶轉(zhuǎn)移系統(tǒng)及抗凋亡通路激活和抗凋亡基因表達(dá)等有關(guān)。由于西藥逆轉(zhuǎn)劑有很強(qiáng)的毒副作用，因此，從中藥復(fù)方中尋找高效、低毒、多靶點(diǎn)的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑已成為當(dāng)今的一個(gè)熱點(diǎn)。本文對(duì)近年來有關(guān)中藥逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥方面的研究做一綜述。

白血??；多藥耐藥；中藥

白血病（leukemia）是一種造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病，治療主要以化療為主。由于腫瘤多藥耐藥基因的表達(dá)和多藥耐藥（Multidrug resistance，MDR）現(xiàn)象的出現(xiàn)，導(dǎo)致機(jī)體對(duì)化療藥物的敏感性降低，極大程度地影響了白血病化療療效，其機(jī)制主要與膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、酶轉(zhuǎn)移系統(tǒng)及抗凋亡通路激活和抗凋亡基因表達(dá)等有關(guān)。目前西醫(yī)治療MDR主要有鈣通道阻滯劑（如異搏定）和免疫抑制劑（如環(huán)孢素A），因其分別有很強(qiáng)的心血管毒性和免疫抑制作用，因而未能在臨床上廣泛使用［1］?，F(xiàn)代中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)研究表明，很多中藥復(fù)方或制劑對(duì)白血病細(xì)胞多藥耐藥現(xiàn)象具有一定逆轉(zhuǎn)作用，臨床上被廣泛使用，療效顯著，具有價(jià)格低廉、副作用小等特點(diǎn)?，F(xiàn)將近年來有關(guān)中藥逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥的研究情況作一概述，為中藥抗白血病多藥耐藥的臨床應(yīng)用提供理論支持。

1　中藥逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的機(jī)制

多藥耐藥機(jī)制研究是腫瘤學(xué)界的一大熱點(diǎn)，MDR發(fā)生的機(jī)制極其復(fù)雜，目前中藥逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥研究較多的主要集中在跨膜P-糖蛋白（permerbilityglycoprotein，P-gp）轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，也稱經(jīng)典機(jī)制。P-gp蛋白是由Juliano與Ling等觀察對(duì)秋水仙堿耐藥的中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞，首先發(fā)現(xiàn)MDR現(xiàn)象的出現(xiàn)與細(xì)胞內(nèi)藥物濃度的降低有關(guān)，并證實(shí)P-糖蛋白是位于MDR細(xì)胞膜上的一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白［2］。P-gp蛋白主要由MDR1基因編碼，在白血病耐藥細(xì)胞內(nèi)處于高表達(dá)水平，能夠結(jié)合三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）釋放能量，通過離子通道將疏水性的抗癌藥物轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜外，從而影響腫瘤細(xì)胞內(nèi)化療藥物的蓄積，降低化療療效。除經(jīng)典機(jī)制外，還有非經(jīng)典機(jī)制的MDR研究，包括MRP、GST-π、TopoⅡ、NF-kB、Bcl-2和P53等。移動(dòng)相關(guān)蛋白（Motility-related-protein，MRP）也是一種跨膜糖蛋白，耐藥機(jī)制與P-gp蛋白相似，屬于ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族成員。GST-π是一種多功能藥物代謝酶，能催化一些藥物與谷胱甘肽結(jié)合，加速藥物排泄，阻止藥物在細(xì)胞內(nèi)有效蓄積，降低療效。TopoⅡ能與藥物結(jié)合形成穩(wěn)定復(fù)合物，使DNA裂解、死亡。一旦TopoⅡ突變，藥物無法與其結(jié)合，DNA裂解受限，最終形成耐藥。有研究發(fā)現(xiàn)NF-kB一定程度上能增加MDR1基因的表達(dá)，從而介導(dǎo)細(xì)胞耐藥［3］。Bcl-2是一種細(xì)胞凋亡抑制基因，通過限制細(xì)胞內(nèi)一些活性物質(zhì)，抑制細(xì)胞凋亡，從而誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生耐藥。P53基因恰好相反，具有誘導(dǎo)DNA損傷、促使細(xì)胞凋亡的功能。高娜［4］研究發(fā)現(xiàn)，非細(xì)胞毒濃度的復(fù)方當(dāng)歸注射液能使K562/A02細(xì)胞Topo II蛋白表達(dá)增加，而對(duì)MRP、GST-πmRNA及其蛋白的表達(dá)無明顯影響。有些中藥有效成分還能夠濃度依賴性地下調(diào)耐藥細(xì)胞NF-kB、MDR1 mRNA，抑制NF-kBp65的活性［5］。

2　逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的中藥復(fù)方

2.1中藥復(fù)方君子湯中藥復(fù)方君子湯是由四君子湯加黃芪、川芎等組成。廖斌，葛仁英等［6，7］發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方君子湯（FFJZ）對(duì)K562/VCR細(xì)胞的耐藥性有明顯的逆轉(zhuǎn)作用，其逆轉(zhuǎn)作用與環(huán)孢霉素A（CsA）、維拉帕米（VRP）相近。同時(shí)研究證實(shí)FFJZ能提高K562/VCR細(xì)胞對(duì)阿霉素（ADM）的敏感性，增加ADM在K562/ VCR細(xì)胞內(nèi)的濃度，而且作用強(qiáng)度接近于CsA。

2.2扶正祛邪中藥復(fù)方扶正祛邪復(fù)方主要由益氣養(yǎng)陰扶正藥人參、黃芪、麥冬、五味子與清熱解毒祛邪藥青黛、白花蛇舌草組成。祛邪不忘扶正，扶正不缺祛邪。李秀軍等［8-10］通過細(xì)胞學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，扶正祛邪復(fù)方含藥血清對(duì)多藥耐藥細(xì)胞株HL60/VCR具有一定的抑制作用，且能抑制耐藥相關(guān)基因Bcl-2的表達(dá)水平，同時(shí)發(fā)現(xiàn)聯(lián)合干擾素能下調(diào)耐藥細(xì)胞膜P糖蛋白（P-gp）。推測(cè)扶正祛邪中藥復(fù)方抗多藥耐藥可能是通過下調(diào)Bcl-2、P-gp表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。

2.3解毒化瘀復(fù)方解毒化瘀復(fù)方是治療難治性白血病的驗(yàn)方，由青黛、山慈姑、蚤休、莪術(shù)、川芎、丹參、補(bǔ)骨脂等組成，具有清熱解毒、活血通絡(luò)之功。馬武開等［11，12］從耐藥相關(guān)基因、信息通路、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白方面研究發(fā)現(xiàn)，解毒化瘀復(fù)方對(duì)人白血病耐藥細(xì)胞LH60/Adr具有逆轉(zhuǎn)作用。一方面，解毒化瘀復(fù)方能降低LH60/ Adr細(xì)胞P-170、Bcl的表達(dá)，阻滯藥物外排、增加耐藥細(xì)胞的凋亡；另一方面，解毒化瘀復(fù)方能降低LH60/Adr細(xì)胞survivin基因的表達(dá)，影響NF-κB-survivin信號(hào)通路?？梢姡舛净鰪?fù)方抗耐藥作用主要是通過膜糖蛋白介導(dǎo)藥物外排、基因凋亡調(diào)控等機(jī)制來獲得。

2.4益氣養(yǎng)陰方益氣養(yǎng)陰方由人參、炙甘草、茯苓、白術(shù)、黃芪、當(dāng)歸、女貞子、旱蓮草組成，方中四君子湯益氣健脾，當(dāng)歸補(bǔ)血湯養(yǎng)血補(bǔ)血，二至丸滋陰補(bǔ)腎。閆理想等［13］通過臨床觀察發(fā)現(xiàn)，益氣養(yǎng)陰方可提高患者骨髓緩解率、中醫(yī)癥候有效率，不良反應(yīng)發(fā)生率較低，且能夠上調(diào)骨髓細(xì)胞S期、G2/M期比例，有利于化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的有效殺傷，增加化療藥物的敏感性，起到逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥作用，提高了臨床療效。

3　逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的中藥制劑

3.1參芪扶正注射液參芪扶正注射液（SFPS）是以黨參、黃芪為原料，提取有效成分，總皂甙、總酚物質(zhì)、多糖類物質(zhì)配制而成。具有益氣扶正之功效，主要針對(duì)肺脾氣虛的患者。鐘陸行，熊建萍等［14］通過體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，參芪扶正注射液對(duì)K562/ADM細(xì)胞耐藥性具有一定逆轉(zhuǎn)作用。能明顯增加ADM對(duì)K562/ ADM的毒性作用與促凋亡作用，提高了K562/ADM細(xì)胞對(duì)ADM的敏感性，同時(shí)發(fā)現(xiàn)參芪扶正注射液可明顯抑制K562/ADM細(xì)胞Bc1-2基因表達(dá)。

3.2復(fù)方當(dāng)歸注射液汪中強(qiáng)等［15］通過細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方當(dāng)歸注射液能使耐藥細(xì)胞中MDR1基因及P-gp蛋白表達(dá)降低，TopoⅡ蛋白表達(dá)增高，而對(duì)MRP、GST-π基因及其蛋白的表達(dá)無明顯變化。復(fù)方當(dāng)歸注射液能部分逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞的耐藥性，其作用機(jī)制可能與下調(diào)K562/A02細(xì)胞MDR1 mRNA的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞膜上P-gp的表達(dá)量減少及在蛋白水平上調(diào)K562/A02細(xì)胞TopoⅡ的表達(dá)有關(guān)。

3.3復(fù)方中藥巖舒注射液復(fù)方中藥巖舒注射液（YSI）由苦參、土茯苓、白茯苓等多味中藥組成，含有苦參堿、氧化苦參堿、總黃酮等多種有效組分。陳陽、何琪楊［16］研究發(fā)現(xiàn)，巖舒注射液能增加高三尖杉酯堿對(duì)白血病耐藥細(xì)胞HL-60的增殖抑制作用，可明顯降低耐藥細(xì)胞P-糖蛋白表達(dá)水平，增加多柔比星在耐藥細(xì)胞內(nèi)的積聚。

3.4六神丸六神丸由珍珠粉、牛黃、麝香、蟾酥、冰片、雄黃組成，具有清熱解毒、化瘀止痛之功效。史哲新、楊文華等［17］通過對(duì)急性白血病患者隨機(jī)分組，治療組在常規(guī)化療基礎(chǔ)上給予六神丸治療，檢測(cè)兩組治療后P170蛋白、TopoⅡα、TopoⅡβ的表達(dá)水平。結(jié)果治療組P170蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，TopoⅡβ表達(dá)高于對(duì)照組，TopoⅡα組間比較無明顯差異。

3.5天佛參、復(fù)方三根制劑研究發(fā)現(xiàn)天佛參、復(fù)方三根制劑都能部分逆轉(zhuǎn)人白血病多藥耐藥細(xì)胞株，兩者都是通過部分下調(diào)細(xì)胞膜糖蛋白P-gp，增加耐藥細(xì)胞內(nèi)化療藥物蓄積濃度來實(shí)現(xiàn)。天佛參由西洋參、天門冬、倒卵葉五加、佛手、蟾酥等藥組成，有益氣養(yǎng)陰、攻毒抗癌、行氣祛痰、活血散瘀、消腫散結(jié)之功。復(fù)方三根制劑由虎杖根、藤梨根、水楊梅根、黨參、白術(shù)、茯苓、楂肉、甘草等組成，對(duì)惡性腫瘤有一定療效［18-20］。

4　結(jié)語

綜上所述，越來越多的實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)諸多中藥、復(fù)方對(duì)白血病細(xì)胞多藥耐藥性具有逆轉(zhuǎn)作用。中藥復(fù)方是根據(jù)中醫(yī)理論，通過辨證論治，相互配伍發(fā)揮臨床療效，在臨床上具有高效、低毒、價(jià)廉等特點(diǎn)。中醫(yī)藥對(duì)多藥耐藥性的研究目前較多的是中藥有效成分或中藥單藥方面的研究，而且研究機(jī)制較為單一，主要集中在P-gp相關(guān)多藥耐藥蛋白的測(cè)定與逆轉(zhuǎn)方面。關(guān)于中藥復(fù)方在白血病多藥耐藥機(jī)制方面的研究較少，目前多集中在為中藥單體或中藥有效成分的研究，忽視了中醫(yī)辨證論治、組方配伍的優(yōu)勢(shì)，且大多研究?jī)H限于體外試驗(yàn)，還需進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床試驗(yàn)予以證實(shí)。廣泛挖掘逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的有效中藥復(fù)方與中藥制劑，明確其調(diào)控耐藥相關(guān)的分子機(jī)制，為臨床中醫(yī)藥治療白血病的有效性提供理論與實(shí)驗(yàn)支持，充分發(fā)揮中醫(yī)中藥在治療白血病多藥耐藥方面的作用。

［1］Hill S，Rein DT，Riffelmann M，et a1.Anticancer drugs induce mdr 1 gene expression in recurrent ovarian cancer［J］.Antcancer Drugs，2006，17（9）: 104l-1044.

［2］Juliano RL，Ling V.A surface glycoprotein modulating drug permeability in Chinese hamaster ovary cell mutants［J］.Biochim Biophys Acta，1976，455（1）:152-162.

［3］Bentires-Alj M，Barbu V，F(xiàn)illet M，et al.NF-kappaB transeription factor inducesdrugresistance through MDR1 erpression incancer cells［J］. Oncogene，2003，22（1）:99-97.

［4］高娜.四種中藥對(duì)K562/A02細(xì)胞經(jīng)典及非經(jīng)典多藥耐藥途徑作用的實(shí)驗(yàn)研究［D］.揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué)，2008.

［5］薛芳.和厚樸酚對(duì)人急性白血病細(xì)胞株U973細(xì)胞增殖凋亡及耐藥性影響的研究［D］.石家莊:河北醫(yī)科大學(xué)，2008.

［6］廖斌，葛仁英，徐成波，等.中藥復(fù)方君子湯對(duì)白血病細(xì)胞株K562/ VCR耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用［J］.福建中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，21（4）:9-12.

［7］廖斌，葛仁英，陳霞，等.中藥復(fù)方君子湯聯(lián)合環(huán)孢霉素A逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞株K562/VCR耐藥性的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2007，15（4）:752-755.

［8］李秀軍，嚴(yán)魯萍，姚宇紅.扶正祛邪含藥血清對(duì)白血病HL60/VCR細(xì)胞Bcl-2表達(dá)水平的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013（11）:3406-3407.

［9］李秀軍，嚴(yán)魯萍，姚宇紅.扶正祛邪中藥復(fù)方含藥血清抗白血病細(xì)胞HL60及HL60/VCR細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)研究［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2012，33（7）:896-897.

［10］李秀軍，嚴(yán)魯萍，姚宇紅.扶正祛邪中藥復(fù)方聯(lián)合干擾素對(duì)白血病HL60/VCR細(xì)胞P糖蛋白表達(dá)水平的影響［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2014，35（5）: 663-664.

［11］馬武開，何詠梅，姚血明，等.解毒化瘀復(fù)方含藥血清對(duì)白血病HL60/Adr細(xì)胞耐藥的逆轉(zhuǎn)作用［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，（5）: 524-528.

［12］馬武開，姚血明，唐芳，等.解毒化瘀藥調(diào)控白血病HL60/adr細(xì)胞NF-κB-survivin通路研究［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，35（1）:25-28.［13］閆理想，史哲新，姜靜，等.益氣養(yǎng)陰方逆轉(zhuǎn)難治性急性白血病多藥耐藥臨床觀察［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，38（1）:68-72.

［14］鐘陸行，熊建萍，張錫泉.參芪扶正注射液對(duì)K562/ADM多藥耐藥的影響［J］.2006，46（4）:41-43.

［15］汪中強(qiáng)，張育，茆俊卿，等.復(fù)方當(dāng)歸注射液逆轉(zhuǎn)K562/A02細(xì)胞多藥耐藥的研究［J］.中國(guó)藥房，2010，（3）:205-208.

［16］陳陽，何琪楊.巖舒注射液影響人HL-60白血病耐藥細(xì)胞耐藥性的機(jī)制［J］.中國(guó)新藥雜志，2014，23（5）:523-526.

［17］史哲新，楊文華，湯毅，等.六神丸逆轉(zhuǎn)白血病細(xì)胞多藥耐藥作用及相關(guān)機(jī)制研究［J］.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，26（1）:11-13.

［18］楊國(guó)無，黨琦.天佛參逆轉(zhuǎn)K562/ADM細(xì)胞株耐藥性的作用及機(jī)制探討［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，11（19）:1865-1867.

［19］孔平孝.天佛參口服液治療中晚期惡性腫瘤的實(shí)驗(yàn)與臨床研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，6（21）:428.

［20］謝長(zhǎng)生，周維順，馮正權(quán)，等.復(fù)方三根制劑對(duì)MDR細(xì)胞株K562/ ADR和K562/VCR逆轉(zhuǎn)作用的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003，9（4）:26-30.

A

1004-2725（2016）04-0267-03

甘肅省中醫(yī)藥管理局科研項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：GZK-2008-13）

730000甘肅 蘭州，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合臨床學(xué)院（吳玉強(qiáng)）；730050甘肅 蘭州，甘肅省腫瘤醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科（薛文翰）

薛文翰，E-mail：xwh0235@163.com