陳言凱（1.福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建福州350002；2.國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（福州），福建福州350002）

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超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中6種農(nóng)藥殘留

陳言凱1，2
（1.福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建福州350002；2.國(guó)家加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心（福州），福建福州350002）

摘要：建立了高效液相色譜－電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)茶葉中滅多威、噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒、丁醚脲和氯噻啉6種農(nóng)藥殘留的方法。提取液經(jīng)過(guò)中性氧化鋁石墨化碳小柱凈化，超高效液相色譜-電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。在空白茶葉基質(zhì)中加入適量標(biāo)準(zhǔn)中間液，混勻后加乙腈提取、凈化，并以空白茶葉基質(zhì)提取液為稀釋溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，采用外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，啶蟲(chóng)脒和滅多威在0.20～40.0μg/L，噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉和丁醚脲在1.00～50.0μg/L，氯噻啉在5～200μg /L范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)≥0.9924，這6種農(nóng)藥測(cè)得平均回收率為70.3％～101％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.93％～9.0％。該方法簡(jiǎn)便、可靠、穩(wěn)定，可用于茶葉中多種農(nóng)藥殘留的快速篩選與檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：茶葉；多農(nóng)藥殘留；固相萃?。怀咝б合嗌V-串聯(lián)質(zhì)譜

1　引言

茶葉是我國(guó)出口的主要經(jīng)濟(jì)作物之一。來(lái)自中國(guó)茶葉流通協(xié)會(huì)數(shù)據(jù)，2013年全國(guó)茶葉總產(chǎn)量達(dá)189萬(wàn)噸，同比增長(zhǎng)6.5％，全國(guó)茶葉總產(chǎn)值首次突破1000億元。但是近年來(lái)歐盟不斷實(shí)施新的更為嚴(yán)格的茶葉農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)，大大削弱了我國(guó)茶葉的出口能力，農(nóng)藥殘留問(wèn)題已經(jīng)嚴(yán)重制約了我國(guó)茶葉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

雖然我國(guó)GB/T2763- 2014中規(guī)定，滅多威、噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒、丁醚脲和氯噻啉6種農(nóng)殘?jiān)诓枞~中的殘留限量較高[1]，但歐盟對(duì)茶葉中這幾種農(nóng)殘均是以?xún)x器檢出限作為限量值，這就要求我們建立更加穩(wěn)定、靈敏的檢測(cè)方法對(duì)這幾種目標(biāo)物進(jìn)行分析。液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法（LC- MS/MS）因具有靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，適用于分析茶葉基質(zhì)這種復(fù)雜、背景干擾嚴(yán)重的痕量化合物。目前測(cè)定茶葉中農(nóng)殘的方法主要為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[2-4]、液相色譜法[1-2]、氣相色譜[6]、氣質(zhì)聯(lián)用[7]，然而氣相色譜對(duì)于揮發(fā)性差、極性強(qiáng)、熱不穩(wěn)定的有機(jī)物存在一定局限性；液相色譜很難達(dá)到要求檢出限；目前鑒于LC- MS/MS同時(shí)分析茶葉中6種農(nóng)藥殘留的方法尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本文采用自制石墨化碳中性氧化鋁固相萃取小柱凈化，結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法建立了茶葉中6種常見(jiàn)農(nóng)藥殘留的分析方法，為茶葉中農(nóng)藥殘留的監(jiān)控提供了一種快速、可靠的監(jiān)測(cè)手段。

2　實(shí)驗(yàn)部分

2.1材料與試劑

液質(zhì)聯(lián)用儀：液相部分Agilent 1290（配有1290手動(dòng)進(jìn)樣器、1290雙元泵、1290柱溫箱），質(zhì)譜部分Agilent 6460三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀（配Agilent Jet Stream ESI電噴霧離子源，美國(guó)安捷倫科技公司）；色譜柱:Acquity BEH C18（1.7μm，50mm×2.1mm i.d.，美國(guó)Waters公司）；電子分析天平：Sartorius BSA 224S（塞多利斯科學(xué)儀器有限公司）；超聲振蕩器：DS- 8510DTH（上海弗魯克流體機(jī)械制造有限公司）；旋渦混勻器：Maxi Mix II；渦旋振蕩器（Thermo Fisher Scientific，美國(guó)）。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中（天津）；石墨化碳（安捷倫公司）；中性氧化鋁（國(guó)藥）；乙腈（色譜純，德國(guó)Merck公司）；甲醇（色譜純，德國(guó)Merck公司）；甲酸（色譜純，德國(guó)Merck公司）；實(shí)驗(yàn)用水來(lái)自Milli- Q超純水系統(tǒng)（美國(guó)，Millipore公司）。

2.2樣品前處理

固相萃取柱：在6mL萃取柱管里面先加墊片，壓實(shí)，加入約0.3g的石墨化碳，輕輕敲擊使其均勻分布，再加入約1g的中性氧化鋁，輕輕敲擊使其壓實(shí)，加入一墊片，用玻璃棒壓實(shí)即可得到所需固相萃取小柱。使用之前用2 mL乙腈活化。

樣品制備：稱(chēng)取樣品約2.5g，加入25mL乙腈，渦旋混勻，超聲提取30min，離心，準(zhǔn)確移取上清液2.00mL過(guò)固相萃取小柱，收集流出液，用約2mL乙腈淋洗，合并流出液，氮?dú)獯抵两?，?0％乙腈定容至2.00mL，渦旋混勻，過(guò)膜上機(jī)待測(cè)。

2.3LC-MS/MS條件

2.3.1色譜測(cè)定條件

柱溫40℃；進(jìn)樣量2.0μL；流速0.3mL/min；流動(dòng)相：A：0.3％甲酸水溶液，B：乙腈；梯度洗脫條件：0～2.00 min，流動(dòng)相B保持80％；2.01～3.5min，流動(dòng)相B由80％變到1％；3.51～5.50min，流動(dòng)相B保持1％的比例，5.51～7min，流動(dòng)相B保持80％的比例。

2.3.2質(zhì)譜測(cè)試條件

掃描方式：正離子模式；監(jiān)測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；干燥氣溫度：300℃；干燥氣流速：8L·min-1；霧化氣壓力：40psi；鞘氣溫度：350℃；鞘氣流速：12 L·min-1；毛細(xì)管電壓：3500V；噴嘴電壓：0V。碰撞能量及定性和定量離子對(duì)等質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

3　結(jié)果與討論

3.1固相萃取小柱的制備

由于茶葉基質(zhì)非常復(fù)雜，因此必須采用大量?jī)艋侄蝺艋蟛拍苌蠙C(jī)。石墨化碳由于其具有多層穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)和多向異性，與色素等雜質(zhì)具有較強(qiáng)的作用力，而本文所選擇的目標(biāo)物產(chǎn)生的作用比較單一，且不會(huì)保留所選目標(biāo)物，因此是非常理想的凈化基質(zhì)。中性氧化鋁對(duì)親脂性色素也具有一定的吸附性，且對(duì)農(nóng)藥無(wú)吸附作用。吸附劑粉末的用量是影響前處理凈化效果和回收率的重要因素，用量小，則凈化效果不明顯；用量大，凈化效果雖好，但回收率低，不能滿(mǎn)足檢測(cè)要求。當(dāng)石墨化碳低于0.2g時(shí)，色素不能完全被吸附；當(dāng)石墨化碳高于0.3g時(shí)，色素可以被完全吸附。通過(guò)實(shí)驗(yàn)探索，在6mL的固相萃取小柱中加入1g中性氧化鋁和0.4g的石墨化碳可以將色素完全吸附，且得到較好的回收率。

3.2方法的線(xiàn)性范圍、定量下限、回收率與精密度

在空白茶葉基質(zhì)中加入適量標(biāo)準(zhǔn)中間液，混勻后加入乙腈提取、凈化，并以空白茶葉基質(zhì)提取液為稀釋溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，采用外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，啶蟲(chóng)脒和滅多威在0.20～40.0μg /L；噻蟲(chóng)嗪、吡蟲(chóng)啉和丁醚脲在1.00～50.0μg /L；氯噻啉在5～200μg /L范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)≥0.9924，這6種農(nóng)藥測(cè)得平均回收率為70.3％～101％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.93％～9.0％，以各個(gè)農(nóng)藥的加標(biāo)水平下限為準(zhǔn)，按3倍信噪比（S/N）計(jì)算方法檢出限（LOD），氯噻啉1.0μg /L，吡蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)嗪和丁醚脲為0.1μg /L，啶蟲(chóng)脒和滅多威0.03μg/L。以10倍信噪比計(jì)算方法定量限（LQD）氯噻啉3.3μg/L，吡蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)嗪和丁醚脲為0.3μg/L，啶蟲(chóng)脒和滅多威為0.1 μg/L。

3.3實(shí)際樣品分析

采用本試驗(yàn)建立的分析方法對(duì)市售的50個(gè)批次茶葉樣品進(jìn)行分析，丁醚脲檢出6個(gè)，檢出濃度為5～23 μg/kg；滅多威檢出11個(gè)，檢出濃度為6～85μg/kg；吡蟲(chóng)啉檢出5個(gè)，檢出濃度為35～128μg/kg；啶蟲(chóng)脒、噻蟲(chóng)嗪和氯噻啉均未檢出。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法準(zhǔn)確、快速、可靠，可應(yīng)用于實(shí)際大批量樣品的快速分析。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：陳言凱（1987-），男，助理工程師，碩士，從事食品安全分析工作，18950420032，cyk521501@163.com。

基金項(xiàng)目：國(guó)家質(zhì)檢總局行業(yè)公益性科研專(zhuān)項(xiàng)資助（201210075）

收稿日期：2015- 12- 10

中圖分類(lèi)號(hào)：O657.63

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008- 553X（2016）02- 0089- 03

doi：10.3969/j.issn.1008- 553X.2016.02.028