鄭文才 徐靜 楊革玲

（廣州廣牧豐生物技術(shù)有限公司，廣東廣州510663）

益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬生長性能、腸道形態(tài)及免疫指標的影響

鄭文才 徐靜 楊革玲

（廣州廣牧豐生物技術(shù)有限公司，廣東廣州510663）

本試驗旨在研究在飼糧中添加益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬生長性能、腸道形態(tài)及免疫指標的影響。試驗選用80頭28日齡、初始體重為（7.5±0.5）kg的健康“杜×長×大”三元雜交斷奶仔豬，隨機分為2個組，分別飼喂基礎(chǔ)飼糧（對照組）和在基礎(chǔ)飼糧中添加2000mg/kg益生菌和有機酸復合制劑的試驗飼糧（試驗組），每組5個重復，每個重復8頭仔豬。正式試驗期為42天。結(jié)果表明：與對照組相比，飼糧中添加益生菌和有機酸復合制劑1）可顯著降低仔豬料重比（P＜0.05）及腹瀉率（P＜0.05）；2）極顯著提高仔豬空腸絨毛高度（P＜0.01），顯著提高十二指腸、空腸、回腸絨毛高度/隱窩深度比值（P＜0.05）；3）極顯著提高仔豬胸腺指數(shù)（P＜0.01），顯著提高脾臟指數(shù)（P＜0.05）、血清IgG含量（P＜0.05）及回腸黏膜SIgA含量（P＜0.05）。結(jié)果提示，飼糧中添加益生菌和有機酸復合制劑可以改善斷奶仔豬腸道黏膜形態(tài)，提高腸道功能及部分免疫指標，緩解斷奶應(yīng)激引起的仔豬免疫功能下降，從而降低斷奶仔豬腹瀉率，提高飼料轉(zhuǎn)化率。

微生態(tài)制劑；生長性能；腸道形態(tài)；免疫指標；斷奶仔豬

斷奶是養(yǎng)豬生產(chǎn)過程中的重要環(huán)節(jié)，早期斷奶可以提高母豬的生產(chǎn)效率，降低飼養(yǎng)成本。但仔豬在斷奶期生長發(fā)育不健全，腸道菌群不完善，加上環(huán)境、飼料等改變引起斷奶應(yīng)激，豬只常表現(xiàn)為生長遲緩、免疫力低下、腹瀉或水腫。抗生素能夠有效地解決仔豬斷奶應(yīng)激等問題，但長期添加會造成抗生素在畜禽產(chǎn)品中的殘留及耐藥性，使患病動物難以治療，多種抗生素在飼料中已被禁止或限制使用。尋求新的添加劑替代抗生素的使用已迫在眉睫。

目前酸化劑和益生菌在仔豬上的單一使用已很廣泛。酸化劑具有調(diào)控動物腸道微生物平衡、增殖有益菌、抑制有害菌、降低腸道pH、提高消化酶活性、提高營養(yǎng)物質(zhì)消化率、減慢胃排空速度、提高動物抗應(yīng)激和免疫力等方面的功能。益生菌制劑含有活的微生物，影響腸道菌群的定植和組成，對宿主的消化和免疫有刺激作用。腸道菌群的定植影響腸道的局部免疫功能和全身免疫功能，研究發(fā)現(xiàn)許多菌種能產(chǎn)生免疫刺激作用。益生菌對免疫系統(tǒng)的有益作用是其替代抗生素的基礎(chǔ)，可改善動物的健康狀況，增強對致病因子的抵抗力。酸化劑和益生菌的聯(lián)合使用可能產(chǎn)生互作效應(yīng)。本試驗的目的是評定益生菌、有機酸等組成的新型復合飼料添加劑在斷奶仔豬上的應(yīng)用效果，為抗生素替代品的研發(fā)和應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗用的添加劑由益生菌和有機酸按一定的比例混合而成的復合制劑（商品名：牧喜多），由廣州廣牧豐生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗設(shè)計與動物

試驗選用80頭28日齡、初始體重為（7.5± 0.5）kg的健康“杜×長×大”三元雜交斷奶仔豬，按體重相近、公母各占1/2的原則，隨機分為2個組，分別飼喂基礎(chǔ)飼糧（對照組）和在基礎(chǔ)飼糧中添加2000mg/kg益生菌和有機酸復合制劑的試驗飼糧（試驗組），每組5個重復，每個重復8頭仔豬。試驗期為42天。

1.3 基礎(chǔ)飼糧

基礎(chǔ)飼糧為玉米型飼糧，參考NRC（1998）5～10kg、10～20kg斷奶仔豬營養(yǎng)需要，做適當調(diào)整，采用玉米-豆粕型常規(guī)飼糧。試驗分為2個階段，分別為試驗的第1-14天和第15-42天，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗組用益生菌和有機酸復合制劑替代等量玉米構(gòu)成試驗飼糧。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 飼養(yǎng)管理

每個重復的仔豬在同一圈舍內(nèi)，預試3天后進入正式試驗。自由飲水和采食，每日08：00和16：00飼喂兩次。試驗期間不對豬只使用任何抗生素類藥物，準確記錄豬只的腹瀉和健康狀況，每日打掃圈舍衛(wèi)生。

1.5 樣品采集與處理

于試驗第43天，每個重復選1頭接近平均體重的仔豬，空腹，前腔靜脈采血10 mL，制備血清，用于IgG的測定。采血后將豬完全放血屠宰，分別剪去十二指腸、空腸及回腸中段腸管（3 cm），用生理鹽水沖洗內(nèi)容物，將腸道組織置于10%甲醛磷酸緩沖液中固定，用于測定腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)。取空腸和回腸中段20 cm，沿縱軸剪開腸道，用冰的PBS溶液沖洗外壁和內(nèi)容物，用玻璃刮下粘膜，放入3 mL EP管中，-80℃保存，用于腸黏膜SIgA的測定。采集肝臟、胸腺及脾臟用于免疫器官指數(shù)的測定。

1.6 測定指標與方法

1.6.1 生長性能

試驗期間準確記錄每天每欄采食量，并分別在試驗第1、15、29和43天早上對仔豬進行空腹稱重，計算試驗第1-14天、第15-28天、第29-42天和第1-42天平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.6.2 腹瀉總評分

試驗期間每天08：00和20：00記錄腹瀉情況，并進行評分。腹瀉評分由同一個人觀察記錄，計算試驗第1-14天、第15-28天、第29-42天和第1-42天的腹瀉總評分。評分依據(jù)如下：0分，無腹瀉；1分，每欄腹瀉豬頭數(shù)小于該欄總頭數(shù)的20%；2分，每欄腹瀉豬頭數(shù)為該欄豬總頭數(shù)的20%～40%；3分，每欄腹瀉豬頭數(shù)大于該欄豬總頭數(shù)的40%。

腹瀉總評分=每個組早晚腹瀉評分總數(shù)/重復數(shù)。

1.6.3 腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)測定

固定后的腸道組織樣品經(jīng)脫水以石蠟包埋，連續(xù)切片（5μm），以蘇木精-伊紅（HE）對切片進行染色。用顯微鏡觀察腸道黏膜結(jié)構(gòu)，并以Motic Med 6.0圖像軟件分析。每張切片測定10根完整絨毛的絨毛高度和隱窩深度，選擇5張切片計算每個組織的平均值。

1.6.4 免疫器官指數(shù)

分別采集仔豬的肝臟、胸腺和脾臟，稱量濕重，計算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)（g/kg）=器官濕重（g）/活體重（kg）

1.6.5 血清、糞便和腸黏膜抗體含量測定

血清IgG含量采用比色法測定，檢測儀器為日本日立7160全自動生化儀；腸黏膜SIgA含量采用放射免疫分析法測定，試劑盒購自北京華英生物技術(shù)研究所，檢測儀器為r-911全自動放免計數(shù)儀。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010進行整理，采用SAS 8.1軟件的t檢驗進行2個組間試驗數(shù)據(jù)的分析，P＜0.05時為差異顯著，P＜0.01時為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬生長性能及腹瀉總評分的影響

由表2可見，與對照組相比，飼糧中添加2000 mg/kg益生菌和有機酸復合制劑顯著提高了試驗第15-28天仔豬平均日增重（P＜0.05），顯著降低了試驗第1-14天、15-28天、1-42天仔豬腹瀉總評分及1-42天仔豬料重比（P＜0.05），極顯著降低了試驗第1-14天仔豬料重比（P＜0.01）。

表2 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬生長性能及腹瀉總評分的影響

2.2 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

由表3可見，與對照組相比，飼糧中添加2000 mg/kg益生菌和有機酸復合制劑顯著提高了仔豬十二指腸、空腸及回腸絨隱比（P＜0.05），極顯著提高了空腸絨毛高度（P＜0.01），對回腸絨毛高度有提高的趨勢（P=0.07）。

2.3 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬免疫器官指數(shù)的影響

表3 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

表4 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬免疫器官指數(shù)的影響

由表4可見，與對照組相比，飼糧中添加2000 mg/kg益生菌和有機酸復合制劑顯著提高了仔豬脾臟指數(shù)（P＜0.05），極顯著提高了仔豬胸腺指數(shù)（P＜0.01）。

2.4 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬血清、糞便和腸黏膜抗體含量的影響

由表5可見，與對照組相比，飼糧中添加2000 mg/kg益生菌和有機酸復合制劑顯著提高了仔豬血清IgG含量（P＜0.05）及回腸黏膜SIgA含量（P＜0.05），對空腸黏膜SIgA含量（P=0.06）有提高的趨勢。

表5 益生菌和有機酸復合制劑對斷奶仔豬血清IgG、腸黏膜SIgA含量的影響

3 討論

仔豬生理機能發(fā)育不完善，消化酶分泌不足，胃中產(chǎn)酸力不足，腸道菌群不健全，斷奶會導致仔豬生長緩慢、食欲降低、消化不良、抗病力下降和腹瀉等癥狀。飼糧中添加有機酸降低了腸道pH，抑制有害微生物生長，為乳酸桿菌等有益菌創(chuàng)造了適宜的生存繁殖環(huán)境；同時，益生菌在體內(nèi)分解有機物的過程中又產(chǎn)生大量的有機酸，進一步降低胃腸道pH，抑制有害菌的生長和促進有益菌的增殖]。本研究結(jié)果表明，飼糧中添加有機酸與益生菌的復合制劑能夠顯著降低斷奶仔豬腹瀉率，提高飼料轉(zhuǎn)化率，與陳代文等（2005）研究結(jié)果一致。

腸絨毛是小腸上皮和固有層共同向腸腔突出形成的細小突起，可使腸腔的面積擴大約10倍，極大地增加了營養(yǎng)物質(zhì)的吸收面積。一般情況下，隱窩基部的細胞不斷地分化并向絨毛端部遷移，形成具有吸收能力的腸上皮細胞以補充絨毛正常脫落的腸上皮。仔豬斷奶后，腸道黏膜萎縮，腸黏膜上皮絨毛變短，隱窩變深，腸絨毛成熟細胞數(shù)量減少。絨毛變短，隱窩變深會減少營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，降低動物的生產(chǎn)性能。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加益生菌和有機酸的復合制劑顯著提高十二指腸、空腸、回腸絨隱比及空腸絨毛高度。說明益生菌和有機酸復合制劑為腸道細胞提供了較好的保護作用。

仔豬的中樞免疫器官包括骨髓和胸腺，外周免疫器官主要包括脾臟、淋巴結(jié)。脾臟內(nèi)約含40%的T細胞和60%的B細胞，在體液免疫中起重要的作用。動物免疫器官的重量及其指數(shù)是評價機體免疫狀態(tài)的常用指標，免疫器官重量的增加是生長發(fā)育快的表現(xiàn)，而免疫器官指數(shù)的提高則意味著免疫系統(tǒng)成熟較快。SIgA是外分泌液中存在的一種主要的抗體，主要由腸黏膜固有層中的IgA漿細胞分泌，是參與粘膜局部免疫的主要抗體，通過與相應(yīng)病原體結(jié)合，阻止病原體黏附到細胞表面，從而在局部抗感染中發(fā)揮重要作用。此外，黏膜固有層中存在較多的IgG分泌細胞，由IgG分泌細胞合成的IgG抗體能夠阻止相應(yīng)抗原穿透黏膜進入組織中。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加益生菌和有機酸的復合制劑顯著提高脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)，顯著提高血清IgG含量及回腸黏膜SIgA含量，對空腸黏膜SIgA含量有提高趨勢，表明益生菌和有機酸的復合制劑能夠促進免疫器官的發(fā)育而改善仔豬的免疫功能。

4 結(jié)論

4.1 益生菌和有機酸的復合制劑可以改善腸道黏膜形態(tài)，提高腸道功能，從而降低斷奶仔豬腹瀉率，提高飼料轉(zhuǎn)化率。

4.2 益生菌和有機酸的復合制劑可以提高斷奶仔豬機體的部分免疫指標，緩解斷奶應(yīng)激引起的仔豬免疫功能下降。

（略）

S828

A

1005-8613（2016）12-0025-04

2016-10-26