魏煥輝

(伊春區(qū)畜牧獸醫(yī)站,黑龍江伊春 153000)

兔痘的診斷方法及防控措施

魏煥輝

(伊春區(qū)畜牧獸醫(yī)站,黑龍江伊春 153000)

兔痘病毒除了對(duì)兔具有致病性外,幾乎與馬痘、牛痘病毒沒有區(qū)別。本病僅發(fā)生于穴兔繁殖群,臨床表現(xiàn)為病兔皮膚痘疹和鼻、眼內(nèi)流出多量分泌物。各年齡均可感染,但以4～12周齡兔易感。

兔痘;診斷;防控

1 病理學(xué)診斷

（1）病理剖檢變化：皮膚損傷具有特征性，其嚴(yán)重程度可以僅有少數(shù)局部斑疹到嚴(yán)重的、有廣泛壞死和出血的皮膚損害不等。皮下水腫及口和其他天然孔的水腫是兔痘的常見病變。胃腸道主要在腹膜和網(wǎng)膜上出現(xiàn)灶性斑疹。肺、肝、脾腫大，有肉眼可見的青白色粟粒大的結(jié)節(jié)，膽囊也有小結(jié)節(jié)。睪丸、卵巢和子宮也布滿白色結(jié)節(jié)，睪丸發(fā)生明顯水腫和壞死，子宮有時(shí)發(fā)生灶性膿腫。

（2）病理組織學(xué)變化：斑疹或結(jié)節(jié)的組織中央壞死，周圍是單核細(xì)胞浸潤，相鄰組織水腫或出血，或可見由大量單核細(xì)胞、壞死組織細(xì)胞、出血和水腫構(gòu)成的彌漫性病變，血管上皮明顯腫脹，細(xì)小血管阻塞。兔痘引起的肺炎以血管周圍單核細(xì)胞和多形核細(xì)胞浸潤為特征。骨髓內(nèi)有單核細(xì)胞浸潤，并伴有散在的出血和壞死。脾臟嚴(yán)重充血，紅髓內(nèi)有大量單核細(xì)胞浸潤，脾小體水腫，甚至出現(xiàn)灶性到彌漫性壞死。淋巴結(jié)，特別是小腸結(jié)合淋巴濾泡可發(fā)生廣泛性壞死。膽管區(qū)單核細(xì)胞浸潤，睪丸組織有水腫壞死灶，甲狀腺、腎上腺、胸腺、唾液腺和子宮細(xì)胞變性、壞死及單核細(xì)胞浸潤。有時(shí)在上述各受害器官內(nèi)可看到特征性的胞漿內(nèi)包涵體。

2 病原學(xué)診斷

（1）病料采集和處理：①樣品采集：心肌、肝、脾、肺、腎，以及淋巴結(jié)、睪丸、子宮材料、呼吸道分泌物和水腫液等均可作為病毒檢驗(yàn)材料。雞胚絨毛尿囊膜的痘皰病灶以及細(xì)胞培養(yǎng)物亦可作為被檢材料。皮膚材料采集時(shí)，先用棉球了占70%乙醇或乙醚，清洗病變皮膚的表面，收集痂皮及其病灶頂部的材料。②樣品處理：將被檢材料放入玻璃研磨器內(nèi)，加10%生理鹽水后研磨。每毫升加入青霉素、鏈霉素各1000IU，37℃孵育1h后經(jīng)3000轉(zhuǎn)/min離心10min，吸取上清液作為雞胚接種、細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物接種材料，分裝保存。

（2）病原分離：①雞胚接種：第一步：接種。將上述材料按常規(guī)方法接種10～13日齡的SPF雞胚絨毛尿囊膜上，每胚接種0.2ml，每份材料接種4個(gè)雞胚，39～40℃培養(yǎng)48～72h。第二步：收獲觀察。接種后第2d檢卵，棄去死胚，待培養(yǎng)48～72h后，按常規(guī)方法收獲絨毛尿囊膜。第三步，結(jié)果觀察。如收獲的絨毛尿囊膜出現(xiàn)白色的痘斑時(shí)，可以認(rèn)為是兔痘病毒感染。在絨毛尿囊膜上分離病毒的方法是比較簡(jiǎn)單而又可靠的實(shí)驗(yàn)診斷方法，但這并不是惟一的病毒分離方法，還可以用組織培養(yǎng)和動(dòng)物接種分離法分離病毒。動(dòng)物接種時(shí)，取上述材料家兔腹部皮膚劃痕接種，或同時(shí)作睪丸內(nèi)接種及家兔角膜劃痕接種。②細(xì)胞培養(yǎng)。兔痘病毒可在兔腎、睪丸和兔胚單層細(xì)胞內(nèi)繁殖。取細(xì)胞2～4管，吸掉上清液。每管接種上述標(biāo)本0.2ml，室溫下吸附30min。加入維持液0.8時(shí)，37℃培養(yǎng)6～7d，每天觀察細(xì)胞病變。結(jié)果觀察：在有病變的細(xì)胞漿內(nèi)可見包涵體形成。③動(dòng)物接種：取上述接種材料，以皮膚劃痕法，接種易感兔，或每兔皮下注射0.5～1.0ml，或每兔滴鼻感染0.2～0.5ml。一般在感染后5d左右開始發(fā)病，癥狀和病變與自然發(fā)病病例相同。

（3）病毒鑒定：①包涵體檢查：將病料組織、絨毛尿囊膜、細(xì)胞培養(yǎng)物作涂片或觸片，或?qū)⒉∽兘M織、絨毛尿囊膜、細(xì)胞培養(yǎng)物制成組織切片，姬姆薩染色，可見細(xì)胞漿內(nèi)紫色包涵體。②血凝試驗(yàn)與血凝抑制試驗(yàn)：痘皰型毒株能凝集雞紅細(xì)胞，利用這一特性對(duì)采集的樣品進(jìn)行檢查。方法1：玻片法。取上清液一滴，滴于玻片上，加等量1%雞紅細(xì)胞，室溫下混勻后不斷搖動(dòng)，3min內(nèi)出現(xiàn)凝集者判為陽性反應(yīng)。方法2：試管法。取9支清潔的試管置于試管架內(nèi)排成一排，每管加入0.25ml生理鹽水。吸取0.05ml待檢樣品加入第一管中，混勻后取0.25ml加入到第二管中，如此類推直至第八管，最后從第八管吸出0.25ml，棄去。第九管不加被檢樣品，作為對(duì)照。每管加入0.25ml 1%雞紅細(xì)胞懸液，充分混勻后置于37℃水浴內(nèi)30min。結(jié)果判定：“＋＋＋＋”雞紅細(xì)胞在管底四周呈顆粒狀；“＋＋＋”少數(shù)紅細(xì)胞集中于管底中央，大部分分散成顆粒狀；“＋＋”半數(shù)紅細(xì)胞集中于管底中央，呈圓碟狀；“＋”75%紅細(xì)胞集中于管底，呈圓碟狀；“－”全部紅細(xì)胞集中于管底，呈圓碟狀。試驗(yàn)中以被檢樣品的最大稀釋管顯示“＋＋＋＋”凝集現(xiàn)象者為一個(gè)血凝單位。

對(duì)于血凝試驗(yàn)陽性的樣品，必須用已知的標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，只有被檢樣品的血凝性可被特異性的陽性血清所中和者，才能判為兔痘病毒陽性。

3 預(yù)防措施

對(duì)本病無特效藥物治療。一旦發(fā)病，需立即采取嚴(yán)格的隔離措施，消毒并撲殺病兔，尸體深埋或焚燒，做無害化處理，其余兔包括健康兔緊急接種牛痘疫苗，進(jìn)行免疫預(yù)防，接種后很快能產(chǎn)生抵抗力，免疫期能達(dá)半年左右。注意加強(qiáng)飼養(yǎng)管護(hù)，對(duì)兔場(chǎng)及器具進(jìn)行徹底清潔和嚴(yán)格消毒。引進(jìn)種兔時(shí)要嚴(yán)格檢疫，并隔離飼養(yǎng)，確定無病后，方可進(jìn)場(chǎng)。

[1] 張占江.兔痘的流行和診療方法[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2016，（7）：128-129.

魏煥輝（1964—），男，大專學(xué)歷，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病防控工作。