陶凌云, 周 潔, 倪麗菊, 陳懿斐, 高 誠

(上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心, 上海 201203)

·經(jīng)驗(yàn)交流·

典型發(fā)達(dá)國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人道終點(diǎn)的選擇

陶凌云, 周 潔, 倪麗菊, 陳懿斐, 高 誠

(上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心, 上海 201203)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為生命科學(xué)研究的重要實(shí)驗(yàn)材料，在達(dá)到科學(xué)目標(biāo)和目的后必然涉及人道終點(diǎn)的選擇, 典型發(fā)達(dá)國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的法律法規(guī)相對完善，人道終點(diǎn)的選擇也有具體的章法，研究典型發(fā)達(dá)國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物法律法規(guī)中人道終點(diǎn)的選擇和做法，對我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利立法有啟示作用。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物; 人道終點(diǎn); 動(dòng)物福利

實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)發(fā)生在達(dá)到科學(xué)目標(biāo)和目的后。人道終點(diǎn)(humane endpoint)是指實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的疼痛或不適得到阻止、終止或緩解。在某些實(shí)驗(yàn)臨近實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)，動(dòng)物即將遭受無法減輕的或劇痛和不適，有時(shí)可能是死亡，此時(shí)采用人道終點(diǎn)代替實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，是一個(gè)很好的優(yōu)化范例。人道終點(diǎn)應(yīng)恰當(dāng)且可靠[1]。早在19世紀(jì)末，西方國家就開始關(guān)注實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的問題，英國是最早立法保護(hù)動(dòng)物的國家，其他歐盟國家和北美地區(qū)等發(fā)達(dá)國家吸取了英國的經(jīng)驗(yàn)，也積極制定了動(dòng)物福利法案及其相關(guān)規(guī)定，細(xì)化了人道終點(diǎn)實(shí)施的時(shí)機(jī)和方法。

1 歐洲公約

英國在動(dòng)物福利立法方面有五個(gè)顯著特點(diǎn)：最早、最多、對世界影響最大、最先提出動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的“3R”原則、非政府機(jī)構(gòu)參與執(zhí)法。歐盟和其他國家制定的動(dòng)物福利法，大都是以英國動(dòng)物福利法為基礎(chǔ)，結(jié)合本國情況而制定[2]。

《動(dòng)物居住與管理指南》(Guidelines for Accomodation and Care of Animals)根據(jù)現(xiàn)有知識和良好實(shí)踐對動(dòng)物的飼養(yǎng)和護(hù)理提出了指導(dǎo)性要求, 對《用于實(shí)驗(yàn)及其他科學(xué)目的的脊椎動(dòng)物保護(hù)歐洲公約》(European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for Experimental and other Scientific Purposes, 1986, 以下簡稱“歐洲公約”)[3]第5條款中的基本原則進(jìn)行了說明和補(bǔ)充。指南指出, 各種動(dòng)物人道處死方式均需要具備專業(yè)經(jīng)驗(yàn)，這些專業(yè)經(jīng)驗(yàn)只能通過適當(dāng)培訓(xùn)獲得。動(dòng)物處死所采用的方法宜遵循歐洲委員會(huì)關(guān)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物施行安死術(shù)推薦意見中規(guī)定的原則(第1部分和第2部分)。深度昏迷的動(dòng)物可采用放血法處死, 但是, 未提前實(shí)施麻醉的情況下, 不宜使用在失去知覺前造成肌肉麻痹的藥物、產(chǎn)生箭毒樣作用的藥物以及電流不通過大腦的電擊法。確認(rèn)死亡前, 不宜對動(dòng)物進(jìn)行處置[4]。

科學(xué)處死動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)方法已列入1986年的“歐洲公約”中，處死動(dòng)物應(yīng)采用無痛致死法。①CO2吸入法：適用于嚙齒類和鳥類動(dòng)物。動(dòng)物先置于含30% CO2空氣中，逐漸增加到70%，致使動(dòng)物死亡。動(dòng)物在移出容器前，要嚴(yán)格檢查是否真實(shí)死亡或再補(bǔ)以斷頸。剛出生的動(dòng)物，使用本法時(shí)應(yīng)預(yù)先得到批準(zhǔn)。②麻醉劑短暫吸入法：適用于小嚙齒類動(dòng)物。處死程序要在小室內(nèi)或有良好通風(fēng)條件下進(jìn)行，避免操作者在麻醉劑氣味下工作時(shí)間過長。③麻醉劑注射法：適用于各種類動(dòng)物，特別是大型的動(dòng)物。使用時(shí)，允許用較大劑量的麻醉劑，以靜脈或腹腔注射，要有效地保證動(dòng)物快速失去知覺和死亡。④放血法：在麻醉劑作用下，采用放血的方式使動(dòng)物死亡，但應(yīng)預(yù)先得到批準(zhǔn)。⑤物理法：斷頸式法可用于小嚙齒類的動(dòng)物，小家兔和較大些的鳥類。敲擊動(dòng)物腦后部法限定頭蓋骨相對較薄的動(dòng)物，如小型嚙齒類和小鳥類[5]。

2013年1月1日開始，歐盟27國開始實(shí)施新的保護(hù)實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物的指令——2010/63/EU(Directive 2010/63 /EU of the European Parliament and of the council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purpose)[6]，取代實(shí)施了26年的86/609/EEC[7]。指令對于動(dòng)物痛苦非常嚴(yán)重的程序是被禁止的，如條款23第15條規(guī)定“如果涉及到可能是長期的而不能緩解的劇烈疼痛、痛苦或不適, 成員國應(yīng)確保該項(xiàng)目不被執(zhí)行”。第13條規(guī)定: 死亡作為實(shí)驗(yàn)的終點(diǎn)，“應(yīng)盡可能避免，并取而代之以更早期和仁慈的終點(diǎn)”。強(qiáng)制性人道處死動(dòng)物是第6條和附件Ⅳ的內(nèi)容，并給出不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的具體指南[8]。

2 北美地區(qū)

2.1 美國

美國《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物飼養(yǎng)管理和使用指南》第八版 (Guide for the Care and Use of Laboratory Animal，Eighth Edition )中，關(guān)于獸醫(yī)對麻醉，止痛和施行安死術(shù)的督導(dǎo)主要是體現(xiàn)在以下 3 個(gè)方面。首先，需要有成文的關(guān)于麻醉藥，止痛藥和安定藥，以及施行安死術(shù)方法的選擇和使用的指南，并且獸醫(yī)(或聯(lián)合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì),簡稱 IACUC)需要對此指南定期審閱。其次，獸醫(yī)必須有授權(quán)確保在適宜的時(shí)間及時(shí)地實(shí)施麻醉，鎮(zhèn)痛和施行安死術(shù)以減輕 /消除動(dòng)物的疼痛和痛苦，如果在 IACUC 已批準(zhǔn)的試驗(yàn)方案里沒有關(guān)于不能使用上述措施的特別說明。最后，獸醫(yī)必須盡其最大努力基于其專業(yè)知識和經(jīng)驗(yàn)選擇最適宜的藥物和方法來減輕動(dòng)物的疼痛和痛苦，以對動(dòng)物提供人道的護(hù)理并且盡量避免對試驗(yàn)的目的造成太多的影響，以免導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無效而需要重復(fù)[9]。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)最終都必須人道地實(shí)施終點(diǎn)。課題負(fù)責(zé)人對于實(shí)驗(yàn)的目的和所申請的模型具有豐富的知識，應(yīng)負(fù)責(zé)鑒定和說明終點(diǎn)的方法，并將該人道的科學(xué)的終點(diǎn)方法加入動(dòng)物使用方案中。人道終點(diǎn)的鑒定往往很具挑戰(zhàn)性，因其需要衡量多重要素，如：模型、動(dòng)物種類(有時(shí)還需考慮品系或品種)、動(dòng)物健康狀況、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹C(jī)構(gòu)政策和法規(guī)要求，有時(shí)還會(huì)與科學(xué)文獻(xiàn)相沖突 。人道終點(diǎn)方法的選用，需由課題負(fù)責(zé)人、獸醫(yī)人員和IAUCC共同討論得出，并且如果可能，在實(shí)驗(yàn)開展之前就應(yīng)決定好[10]。

在研究方案結(jié)束時(shí)，或在用鎮(zhèn)痛劑、鎮(zhèn)靜劑或其他措施無效時(shí)，作為解除疼痛或痛苦的一種手段，可能都必須采用施行安死術(shù)。研究方案的內(nèi)容包括實(shí)施施行安死術(shù)的判定依據(jù)，例如，軀體或行為缺陷的程度或腫瘤的大小，都是獸醫(yī)人員和研究人員判斷的依據(jù)，以保證其終點(diǎn)既符合人道，又能盡可能地達(dá)到研究方案的目標(biāo)。

供施行安死術(shù)的具體藥物和方法的使用，需依據(jù)動(dòng)物的種類、年齡以及研究方案的目標(biāo)而定。通常, 化學(xué)藥物(例如，巴比妥酸鹽類、無爆炸性吸入麻醉劑類)要優(yōu)于物理學(xué)方法(例如，頸椎脫臼法、斷頭法和擊暈穿刺法)。然而, 從科學(xué)研究方面考慮, 有些研究方案可能不宜使用化學(xué)藥物。

盡管采用CO2施行安死術(shù)是嚙齒類動(dòng)物施行安死術(shù)的常用方法，但作為一種吸入式施行安死術(shù)劑，針對其一些不好的特點(diǎn)一直有所爭議，這方面至今仍是非常值得研究的領(lǐng)域,今后的研究需要尋求優(yōu)化嚙齒類動(dòng)物CO2安死術(shù)施行方法。對CO2是否能夠被接受作為嚙齒類動(dòng)物施行安死術(shù)劑, 應(yīng)當(dāng)在有新文獻(xiàn)數(shù)據(jù)可以查閱時(shí)才能評定。另外，由于嚙齒類動(dòng)物新生兒對CO2的缺氧誘導(dǎo)作用能夠耐受，在對該類動(dòng)物施行安死術(shù)術(shù)時(shí)，需要更長時(shí)間地暴露在CO2中，或者采用其他方法(例如，注射化學(xué)試劑、頸椎脫臼法或斷頭法)。

所有施行安死術(shù)方法均必須由獸醫(yī)和IACUC進(jìn)行審閱和批準(zhǔn)[1]。

2.2 加拿大

加拿大《動(dòng)物管理政策和指南》(Canadian Council on Animal Care Policies and Guidelines)由加拿大動(dòng)物管理委員會(huì)(Canadian Council on Animal Care，CCAC)編輯出版。CCAC是負(fù)責(zé)監(jiān)督研究、教學(xué)和試驗(yàn)中動(dòng)物的使用的組織。

加拿大《動(dòng)物管理政策和指南》一般指導(dǎo)意見為：涉及動(dòng)物，存在任何實(shí)際或潛在的疼痛、痛苦或不適的實(shí)驗(yàn)，為了減少或減輕它們，在兼容研究的科學(xué)目標(biāo)情況下，應(yīng)該選擇最早的終結(jié)點(diǎn)。調(diào)查員對這種端點(diǎn)的選擇應(yīng)當(dāng)咨詢實(shí)驗(yàn)動(dòng)物獸醫(yī)和動(dòng)物管理委員會(huì)。

運(yùn)用初步實(shí)驗(yàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)是確定終結(jié)點(diǎn)非常有用的方法，尤其是對動(dòng)物處理的效應(yīng)還不明確的時(shí)候。使用少量動(dòng)物的預(yù)實(shí)驗(yàn)可以幫助確定發(fā)病率，效果的時(shí)間推移，并有助于確立早期終結(jié)點(diǎn)要求的觀測頻率。預(yù)實(shí)驗(yàn)還可以提供不同實(shí)驗(yàn)組間產(chǎn)生不同反應(yīng)的表現(xiàn)，從而可用于為主體實(shí)驗(yàn)設(shè)立更準(zhǔn)確的小組個(gè)體數(shù)。預(yù)實(shí)驗(yàn)的開展還能使所有人有機(jī)會(huì)熟悉預(yù)期的癥狀和體征。

對制定和確定終結(jié)點(diǎn)而言，每個(gè)人的職責(zé)應(yīng)明確界定，并建立上報(bào)的清晰流程。施行安死術(shù)的最終決定權(quán)必須取決于獸醫(yī)，并得到動(dòng)物管理委員會(huì)的認(rèn)可[11]。

3 日本

日本作為亞洲實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)展先驅(qū)，于1973年10月1日制定了《動(dòng)物愛護(hù)及管理法》, 并于1983年12月2日修訂。而后于1996年7月和8月分別頒布了《動(dòng)物處理方法規(guī)則》(日本總理府告示第40號)、《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物施行安死術(shù)規(guī)則》(社團(tuán)法人日本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物協(xié)會(huì))。

根據(jù)《動(dòng)物處理方法規(guī)則》的一般原則, 管理者及處理實(shí)施者在不得不處死動(dòng)物時(shí)，在充分理解被處理動(dòng)物的生理、生態(tài)、習(xí)性、尊重生命的尊嚴(yán), 以不增加動(dòng)物苦痛的方法執(zhí)行。處理動(dòng)物時(shí)應(yīng)采取不危害人生命、身體及財(cái)產(chǎn), 不危害和污染周圍生活環(huán)境的方法執(zhí)行。應(yīng)盡可能地使用能使動(dòng)物意識喪失、不感苦痛的，同時(shí)動(dòng)物的心機(jī)能、肺機(jī)能是非可逆性停止的化學(xué)及物理方法處理動(dòng)物，這些方法應(yīng)被社會(huì)所承認(rèn)?！秾?shí)驗(yàn)動(dòng)物施行安死術(shù)規(guī)則》是日本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物協(xié)會(huì)為了使本協(xié)會(huì)會(huì)員更好地執(zhí)行《動(dòng)物處理方法規(guī)則》而制定的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物施行安死術(shù)是管理者的責(zé)任，但管理者也可以委托給其他熟練的人。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)施處理時(shí)，管理者及處理實(shí)施者應(yīng)互相協(xié)作并分擔(dān)責(zé)任[4]。

4 我國現(xiàn)狀

我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)事業(yè)起步較晚，國家科技部 2006 年發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》結(jié)束了我國沒有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利法律法規(guī)和政府文件規(guī)定的歷史，填補(bǔ)了我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利法規(guī)的空白，維護(hù)了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利，促進(jìn)人與自然和諧發(fā)展，適應(yīng)科學(xué)研究、經(jīng)濟(jì)建設(shè)和對外開放，為國內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育、生產(chǎn)、運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)提出了要求——善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。尤其是在繁育、生產(chǎn)、運(yùn)輸、實(shí)驗(yàn)等方面如何善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提出了具體措施，制定了符合國際慣例的條款(30條)，使我國在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理方面與國際接軌的腳步向前邁出了可喜的一步[12]。

《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》第十八條中明確指出：“在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定的情況下，應(yīng)選擇‘仁慈終點(diǎn)’，避免延長動(dòng)物承受痛苦的時(shí)間。”并在文末對“仁慈終點(diǎn)”進(jìn)行了定義：是指動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中，選擇動(dòng)物表現(xiàn)疼痛和壓抑的較早階段為實(shí)驗(yàn)的終點(diǎn)[13]。

2014年國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 27416-2014《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu) 質(zhì)量和能力的通用要求》正式頒布，其中對人道終止時(shí)機(jī)也進(jìn)行了定義：人道終止時(shí)機(jī)也稱人道終止點(diǎn)，是指此時(shí)已經(jīng)滿足了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的要求，且對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成的傷害相對最輕。在實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)隨時(shí)觀察，適時(shí)對符合人道終止?fàn)顟B(tài)的動(dòng)物及時(shí)終止實(shí)驗(yàn)。條款7.4.6中，對人道終止的時(shí)機(jī)進(jìn)行了相應(yīng)的規(guī)范[14]。

5 對我國的啟示

借鑒并且總結(jié)美國、加拿大、英國、日本等國家先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)，遵循國際規(guī)范并充分考慮國情,完善我國現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利法律法規(guī)，應(yīng)當(dāng)明確實(shí)驗(yàn)動(dòng)物法律地位，突破原有立法目的，將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利法律條文具體化并且增強(qiáng)其可操作性，依法建立相關(guān)監(jiān)督管理體系，必須動(dòng)員和聯(lián)合國家各領(lǐng)域力量，以人類生存發(fā)展關(guān)懷作為立足點(diǎn)，通過立法來理性規(guī)范人類的行為，才能達(dá)到人類發(fā)展與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的福利和諧共贏。

在實(shí)驗(yàn)程序的操作方面：①在多種試驗(yàn)方法存在的情況下，應(yīng)選擇動(dòng)物使用量少、動(dòng)物生理和心理負(fù)擔(dān)最小、持續(xù)傷害最少而且能提供準(zhǔn)確結(jié)果的實(shí)驗(yàn)。②實(shí)驗(yàn)中應(yīng)采取麻醉或無痛的方法，除非麻醉、無痛方法帶來的福利損害大于實(shí)驗(yàn)帶來動(dòng)物痛苦，或與實(shí)驗(yàn)?zāi)康南噙`背。③實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物做出適當(dāng)?shù)奶幹谩υ趯?shí)驗(yàn)中遭受痛苦的動(dòng)物，若決定讓其繼續(xù)存活，則應(yīng)由專業(yè)人員進(jìn)行照料。除非它們已經(jīng)恢復(fù)到健康狀態(tài)，否則不得運(yùn)用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。若該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繼續(xù)存活將遭受持續(xù)性痛苦，應(yīng)盡快采取人道的方法處死。

許多國家都認(rèn)為遺棄、虐待動(dòng)物的行為是犯罪，在美國甚至有一些州把虐待動(dòng)物的行為作為重罪來制裁。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利問題得到越來越多關(guān)注的趨勢下，應(yīng)動(dòng)員各方面力量探求如何切實(shí)提高國民及整個(gè)社會(huì)對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的保護(hù)程度。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利問題得到重視不但體現(xiàn)著人與動(dòng)物協(xié)調(diào)發(fā)展的趨勢，也代表著社會(huì)的進(jìn)步。

[1] NRC. Guide for the Care and Use of Laboratory Animal(Eight Edition)[M]. Washington DC: The National Academies Press, 2011.

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[3] http://www.coe.int/en/web/conventions/full-list/-/conventions/ treaty/123[DB].

[4] 史光華, 呂京. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu)認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)實(shí)用手冊(國際篇)[M]. 北京: 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2014.

[5] 徐新來. 英國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和建筑指南[J]. 北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 1992, 9(3):46-51.

[6] https://www.gov.uk/government/publications/animal-procedures-committee-formal-response-on-the-european-directive-2010-63-eu[DB].

[7] European Commission. Directive 2010 /63 /EU of the European Parliament and of the council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purpose[S]. Official Journal of the European Union L 276 /33, 2010.

[8] 劉超, 程樹軍, 羅苑妮, 等. 歐盟保護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新指令 2010/ 63/EU介紹及比較分析[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 22 (5):72-76.

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[12] 程津津, 任萍萍. 學(xué)習(xí)《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》后的體會(huì)[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 2011, 28(3):78-79.

[13] 國科發(fā)財(cái)字[2006]398號.關(guān)于發(fā)布《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》的通知[Z].

[14] GB/T 27416-2014. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu) 質(zhì)量和能力的通用要求[S].

Choice of Humane Endpoint of Laboratory Animals in Typical Developed Countries

TAO Ling-yun, ZHOU Jie, NI Li-ju, CHEN Yi-fei, GAO Cheng
(Shanghai Laboratory Animal Research Center, Shanghai 201203, China)

As the important experimental materials for life science, laboratory animals will be faced with the choice of humane endpoint after achieved the scientific goals and objectives. Laboratory animal welfare laws and regulations are relatively perfect in typical developed countries. Studying the choice and practice of humane endpoint in the laws and regulations of experimental animals in typical developed countries has the enlightenment function to laboratory animal welfare legislation in China.

Laboratory animals; Humane endpoint; Animal welfare

Q95-33

A

1674-5817(2016)06-0451-04

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.06.010

2016-06-23

上海市科委科技創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃(13140901002), 上海市科委2015年度研發(fā)公共服務(wù)平臺能力提升項(xiàng)目(15DZ2292400)

陶凌云(1981-), 女, 副研究員, 碩士, 主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳方面的研究。E-mail: shirlytao8118@hotmail.com

高 誠(1961-), 男, 研究員, 主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)研究。E-majl: gaochengdgb@126．com