楊李廠, 周文兵, 丁 雋, 周新初, 張建平, 謝 東, 楊偉敏

(1. 上海睿智化學(xué)研究有限公司, 上海 201203; 2. 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院, 上海 200240; 3. 上海甲干生物技術(shù)有限公司，上海 201112)

四個(gè)品種小型豬血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定及比較

楊李廠1, 周文兵1, 丁 雋1, 周新初2, 張建平3, 謝 東1, 楊偉敏1

(1. 上海睿智化學(xué)研究有限公司, 上海 201203; 2. 上海交通大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物學(xué)院, 上海 200240; 3. 上海甲干生物技術(shù)有限公司，上海 201112)

目的 分析比較四個(gè)品種小型豬的血液學(xué)生物學(xué)特性。方法 分別選取上海地區(qū)飼養(yǎng)的巴馬小型豬、貴州小型豬和版納小型豬及陸川小型豬，每個(gè)品種雌雄各20頭，3～6月齡，測(cè)量其血液生理、血清生化與血凝指標(biāo)，然后進(jìn)行單因素方差分析，并進(jìn)行數(shù)據(jù)比較。結(jié)果 四個(gè)品種的小型豬血液生理14個(gè)指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，血清生化12個(gè)指標(biāo)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，血凝4個(gè)指標(biāo)差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。分別對(duì)各品種群體數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析，巴馬小型豬群體雌雄間血液常規(guī)、血清生化和血凝指標(biāo)差異顯著(P＜0.05)的指標(biāo)分別有6項(xiàng)、4項(xiàng)和3項(xiàng)，而貴州小型豬、版納小型豬和陸川小型豬雌雄間差異指標(biāo)較少或差異不顯著。四品種小型豬相同性別間比較，也有較多指標(biāo)差異顯著。結(jié)論 測(cè)定和比較的巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬和陸川小型豬在血液學(xué)、血清生化和血凝等方面數(shù)據(jù)，為應(yīng)用和選擇小型豬開(kāi)展相關(guān)生物醫(yī)學(xué)和藥物研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

巴馬小型豬; 貴州小型豬; 版納小型豬; 陸川小型豬; 血液生理; 血清生化; 血凝

中國(guó)小型豬品種資源豐富，1980年代已經(jīng)開(kāi)始開(kāi)發(fā)。上海本地雖沒(méi)有原產(chǎn)的小型豬品種，但上海在國(guó)內(nèi)最早制定了實(shí)驗(yàn)用小型豬地方標(biāo)準(zhǔn)[1]，首先詳細(xì)規(guī)定了實(shí)驗(yàn)用小型豬的遺傳分類方法，規(guī)范了環(huán)境與設(shè)施的技術(shù)要求。由于小型豬在解剖學(xué)、生理學(xué)、營(yíng)養(yǎng)代謝等方面與人類相似,近年來(lái)被廣泛應(yīng)用在藥物代謝動(dòng)力學(xué)、藥效動(dòng)力學(xué)、藥理以及毒理學(xué)研究中。

小型豬是模擬人類疾病模型的重要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在模型研究中血液學(xué)特性的檢測(cè)尤為重要，本試驗(yàn)測(cè)定飼養(yǎng)于上海地區(qū)的巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬和陸川小型豬的血液學(xué)特性，并比較了各品種間的差異，以期為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 3～6月齡普通級(jí)巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬各40頭,雌雄各半，由上海市浦東新區(qū)老港鎮(zhèn)華新特種養(yǎng)殖場(chǎng)提供 [SCXK (滬) 2012-0013]，種源分別來(lái)自廣西、貴州和云南原產(chǎn)地; 3～6月齡普通級(jí)陸川豬40頭，雌雄各半，由上海甲干生物科技有限公司提供[SCXK(滬)2010-0028]，種源來(lái)自廣西陸川。

1.1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)條件 普通級(jí)環(huán)境,每日定時(shí)、定量飼喂豬飼料, 自由飲水。

1.2 方法

1.2.1 血樣采集 所有動(dòng)物采血前禁食過(guò)夜(12～15 h),清醒狀態(tài)下前腔靜脈取血, 每只動(dòng)物采血量為5～6 mL,分別用于血液學(xué)、血清生化和血凝指標(biāo)的測(cè)定。

1.2.2 血液生理指標(biāo)檢測(cè) 取1 mL全血用EDTA抗凝,以SysmexXT-200iv全自動(dòng)五分類動(dòng)物血液分析儀檢測(cè)各品種小型豬的紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、白細(xì)胞數(shù)(WBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞比積(HCT)、平均紅細(xì)胞體積(M C V)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞容積分布寬度(RDW)、血小板數(shù)(PLT)、中性粒細(xì)胞數(shù)(NE)、淋巴細(xì)胞數(shù)(LY)、嗜酸粒細(xì)胞數(shù)(EO)、單核細(xì)胞數(shù)(MO)、嗜堿粒細(xì)胞數(shù)(BA)等14項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.3 血清生化指標(biāo)的檢測(cè) 取3 mL非抗凝血離心分離血清, 用Olympus AU400全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、總膽紅素(TBIL)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)等12項(xiàng)生化指標(biāo)。

1.2.4 血凝指標(biāo)檢測(cè) 取1.8 mL全血用檸檬酸鈉抗凝，Destiny Plus全自動(dòng)血凝儀(Trinity Biotech)檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原含量(FIB)、凝血酶時(shí)間(TT) 等4項(xiàng)指標(biāo)。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 檢測(cè)結(jié)果以表示，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。多組均數(shù)比較首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，然后進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血液生理指標(biāo)

2.2 血清生化指標(biāo)

通過(guò)對(duì)12個(gè)項(xiàng)目血清生化檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示四個(gè)品種間血清生化指標(biāo)全部呈顯著差異 (P＜0.05) ，特別是堿性磷酸酶 (ALP) 和肌酸激酶(CK)。巴馬小型豬群體有4項(xiàng)血清生化指標(biāo)(ALT、ALB、ALP和TC)性別間差異顯著。四品種小型豬雄性群體比較，血清生化指標(biāo)中只有TBIL差異不顯著，其余11項(xiàng)目指標(biāo)均呈差異顯著;雌性群體比較，血清生化指標(biāo)只有ALB差異不顯著，其余11項(xiàng)目指標(biāo)均呈差異顯著。詳見(jiàn)表2。

2.3 血凝指標(biāo)

血凝檢測(cè)結(jié)果如表3。所有4個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目中，四個(gè)品種間差異都達(dá)到顯著水平 (P＜0.05)。巴馬小型豬群體有3項(xiàng)血凝指標(biāo)PT、APTT和FIB在雌雄間呈顯著差異。四品種小型豬各品種雌雄群體分別比較，所有雌性和雄性品種群體間4項(xiàng)血凝指標(biāo)都呈差異顯著。

3 討論

本研究表明，相對(duì)于其它小型豬品種，巴馬小型豬的性別間血液學(xué)指標(biāo)差異較大，巴馬小型豬與另外三品種小型豬之間存在顯著差異的指標(biāo)較多，尤其是雄性群體之間差異更明顯。這些在相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)都需要特別關(guān)注。

不過(guò)國(guó)內(nèi)的小型豬資源豐富，除目前已經(jīng)培育成功的巴馬小型豬、貴州小型豬、版納小型豬、五指山小型豬和西藏小型豬等幾個(gè)常用品種外，各地都有利用當(dāng)?shù)匦⌒拓i資源進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究，并陸續(xù)被應(yīng)用于心血管疾病模型、代謝研究、口腔疾病模型甚至神經(jīng)學(xué)等諸多領(lǐng)域[2]。生物學(xué)特性作為小型豬的基礎(chǔ)應(yīng)用研究，各品種的相關(guān)研究頗多，但是類似本文對(duì)多個(gè)品種小型豬的比較研究很少。由于缺少比較數(shù)據(jù)，使用不同種小型豬進(jìn)行醫(yī)學(xué)研究，將所獲得的大量研究成果進(jìn)行比較也會(huì)缺乏基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。

本試驗(yàn)首次選取了上海地區(qū)引入和飼養(yǎng)的四個(gè)品種小型豬進(jìn)行血液學(xué)特性的檢測(cè)與比較分析，得到了較為可靠的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。取得的數(shù)據(jù)與中國(guó)實(shí)驗(yàn)用小型豬[3]的9項(xiàng)指標(biāo)WBC、RBC、PLT、MCHC、RDW、HGB、HCT、MCV和MCH進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)各項(xiàng)均值都相近。本試驗(yàn)巴馬小型豬WBC均值大于陳克研報(bào)道[4]的數(shù)據(jù)，其他指標(biāo)差異較小; RBC與胡延廷等報(bào)道[5]的數(shù)據(jù)差異顯著, 其余指標(biāo)均值差異小或是無(wú)顯著性差異。與連林生等報(bào)道[6]的版納小型豬的血液生理均值相比，本試驗(yàn)中的版納小型豬的WBC、HGB、HCT和PLT差異較大。在已有的參考指標(biāo)，四個(gè)品種血液生理指標(biāo)數(shù)值接近北京DB11T 828.4-2011的參考數(shù)據(jù)[7]。

表1 四品種小型豬血液生理指標(biāo)

血清生化指標(biāo)在4個(gè)品種小型豬兩個(gè)性別群體間的差異明顯，與已有文獻(xiàn)[4-6,8]報(bào)道的小型豬生化檢測(cè)結(jié)果相比，數(shù)據(jù)范圍相近。與丹麥的哥廷根小型豬參考范圍相比[9]，四個(gè)品種小型豬的大部分血清生化指標(biāo)與其都接近, 數(shù)據(jù)范圍同北京DB11T 828.4-2011的參考范圍也都接近。

儀器和試劑等因素雖然能對(duì)同類試驗(yàn)的結(jié)果產(chǎn)生重大影響，但是這兩個(gè)因素也最容易控制。本試驗(yàn)重點(diǎn)排除了動(dòng)物相關(guān)的外界因素如生理狀態(tài)、飼養(yǎng)環(huán)境和反應(yīng)應(yīng)激等對(duì)結(jié)果的干擾。生理因素是影響血液生理指標(biāo)的重要因素之一， 如動(dòng)物年齡、性別、品種、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況、飲食及用藥情況等都會(huì)影響血液生理檢測(cè)結(jié)果。有研究報(bào)道[10]，幼齡犬貓的RBC計(jì)數(shù)低于成年犬貓，國(guó)外研究結(jié)果[11]顯示幼齡小型豬的RBC、HGB、HCT、MCHC和MCV比成年小型豬低。動(dòng)物在劇烈運(yùn)動(dòng)或是外界因素刺激下, 腎上腺素分泌會(huì)升高，導(dǎo)致嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)增加。因?yàn)槿粘Ｅc小型豬接觸最多的是飼養(yǎng)員，本實(shí)驗(yàn)的小型豬在采血時(shí)由飼養(yǎng)員抓取保定，熟練實(shí)驗(yàn)技術(shù)員采集血樣，盡量減小人為因素對(duì)小型豬生理以及血樣質(zhì)量的影響。

表2 四品種小型豬血清生化指標(biāo)

表3 四品種小型豬血凝指標(biāo)

影響血清生化的動(dòng)物相關(guān)因素也非常眾多，并且同一因素還可能對(duì)不同指標(biāo)產(chǎn)生相反的影響。例如仔豬離乳前后血清AMYL活性一直在升高，差異極顯著; 血清TP、ALB、GLU含量在離乳后下降, 差異顯著或極顯著[12]。對(duì)于國(guó)內(nèi)養(yǎng)殖場(chǎng)而言，最需要考慮的影響因素應(yīng)該是高溫和飼料添加劑。現(xiàn)有研究[13]表明, 高溫條件下豬的血清總蛋白(第2 天)、球蛋白(第21天)、葡萄糖(第2天)、總膽固醇(第1、2、4天)及甘油三酯(第1天)含量均會(huì)顯著降低。目前養(yǎng)殖企業(yè)使用的飼料添加劑種類眾多，尤其是抗生素添加很普遍。絕大部分抗生素都會(huì)對(duì)動(dòng)物的肝功能和腎功能產(chǎn)生影響。但是營(yíng)養(yǎng)性的添加劑也可能導(dǎo)致豬群體血清生化指標(biāo)的差異。對(duì)離乳仔豬日糧中添加植酸酶研究[14]表明，42日齡的仔豬血清中的葡萄糖、血清尿素氮和血清堿性磷酸酶水平，分別降低15.2%、22.2%和29.5%; 不過(guò)T3、T4和胰島素水平卻分別提高了15. 6%、4.4%和10.9%。

本試驗(yàn)采集的動(dòng)物樣品均來(lái)自實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)，采用符合上海市地方標(biāo)準(zhǔn)的動(dòng)物飼料，養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)也有較一般養(yǎng)殖場(chǎng)更嚴(yán)格的溫度控制措施。因此，其研究數(shù)據(jù)能夠?yàn)槲磥?lái)的醫(yī)學(xué)模型研究和藥物研究提供更好基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支持。

[1] DB31/T 240-2001, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)用小型豬[S].

[2] 袁進(jìn), 顧為望. 小型豬作為人類疾病動(dòng)物模型在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用 [J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2011, 32(2):108-111.

[3] 馮媛媛, 白雪源, 賀津, 等. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)用小型豬血液指標(biāo)正常參考值分析[J]. 2013, 40(6):139-141.

[4] 陳克研, 師文, 孫倩, 等. 巴馬小型豬在遼寧地區(qū)的適應(yīng)性觀察及血液生理生化指標(biāo)檢測(cè)[J]. 2014, 41(12):182-185.

[5] 胡建廷, 屈卉錦, 王韶艷, 等. 普通級(jí)巴馬小型豬部分血液學(xué)指標(biāo)的測(cè)定 [J]. 動(dòng)物學(xué)進(jìn)展, 2011, 32(9):66-68.

[6] 連林生, 王鶴云, 徐家珍, 等. 版納微型豬的生物學(xué)特性 [J].上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 1993, 13(4):185～191.

[7] DB11/T 828.4-2011 [S]. 實(shí)驗(yàn)用小型豬 第4部分: 病理學(xué)診斷規(guī)范.

[8] 郭雄明, 姚春濤, 趙玉瓊, 等. 兩個(gè)品系普通級(jí)和SPF級(jí)小型豬部分血液學(xué)指標(biāo)的比較 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 19(2):40-42.

[9] Ellegaard L, Jorgensen KD, Klastrup S, et al. Hematologic and clinical chemical values in 3 and 6 months old Gottingen minipigs[J]. Scand J Lab Anim Sci , 1995, 22(4):239-248

[10] 何玉英, 陳艷云, 夏兆飛. 淺談犬貓血常規(guī)檢驗(yàn)的影響因素[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志, 2012, 48 (4):70-71.

[11] Yeom SC, Cho SY, Park CG, et al. Analysis of reference interval and age-related changes in serum biochemistry and hematology in the specific pathogen free miniature pig[J]. Lab Anim Res, 2012, 28(4):245-253.

[12] 李玉冰. 仔豬斷奶應(yīng)激對(duì)血清生化影響的研究[C]. 京津冀畜牧獸醫(yī)科技創(chuàng)新交流會(huì)暨新思想、新觀點(diǎn)、新方法論壇論文集. 河北: 2008.

[13] 劉圈煒, 盧慶萍, 張宏福,等. 持續(xù)高溫對(duì)生長(zhǎng)豬血清生化指標(biāo)及肌肉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2010, 22(5):1207-1213.

[14] 蔡青和, 計(jì)成, 岳洪源. 玉米豆粕型日糧中添加植酸酶對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能、養(yǎng)分消化率及血清生化指標(biāo)的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2004, 16(2):15-21.

Investigation on Biological Characteristics of Blood for Four Breeds of Minipigs

YANG Li-chang1, ZHOU Wen-bing1, DING Jun1, ZHOU Xin-chu2, ZHANG Jian-ping3, XIE Dong1, YANG Wei-min1
(1. Shanghai Chempartner Co. Ltd, Shanghai 201203, China; 2. School of Agriculture and Biology, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China; 3. Shanghai Jiagan Bio-tech Co. Ltd, Shanghai 201112, China)

Objective To analyze and compare of the biological characteristics of the blood of four breeds of minipigs.MethodThe four breeds of minipigs including Bama minipigs, Guizhou minipigs, Banna minipigs and Luchuan minipigs at the age of 3 to 6 months reared in Shanghai area were selected to determine the hematology, serum biochemistry and blood coagulation values with 40 (half males and half females) in each breed. All data were analyzed by one-way ANOVA method and then compared.ResultAmong the four breeds of minipigs, 14 parameters of hematology, 12 parameters of serum biochemistry and 4 parameters of blood coagulation were significant different (P＜0.05). Compared the results between males and females, 6 hematologic parameters, 4 serum biochemistry parameters and 3 blood coagulation parameters in Bama minipig were significantly different (P＜0.05), a few parameters or no parameters of blood in Guizhou minipigs, Banna minipigs and Luchuan minipigs were significant different. There are many parameters existing significant different between same gender among four minipigs breeds. ConclusionThe parameters of hematology, serum biochemistry and blood coagulation of Bama minipigs, Guizhou minipigs, Banna minipigs and Luchuan minipigs provide the abundant biological data support when applying and selecting minipig for medical science model research and pharmaceutical research.

Bama minipig; Guizhou minipig; Banna minipig; Luchuan minipig; Hematology;

Q95-33

A

1674-5817(2016)06-0441-06

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.06.008

2016-06-21

上海市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目 (13140900200)

楊李廠(1981- ), 男, 碩士, 研究方向: 動(dòng)物生理/生化。 E-mail: lchyang@chempartner.cn

楊偉敏, 高級(jí)實(shí)驗(yàn)師, 研究方向: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理。 E-mail: wmyang1@chempartner.cn

Serum biochemistry; Blood coagulation