張磊，廖成彬，黃榕波，馬娜，唐小婭，王秀鳳

(廣東藥學院 基礎(chǔ)學院，廣東 廣州 510006)

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右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛垂體-靶腺軸功能的動態(tài)變化

張磊，廖成彬，黃榕波，馬娜，唐小婭，王秀鳳

(廣東藥學院 基礎(chǔ)學院，廣東 廣州 510006)

摘要:目的 探究右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛過程中垂體-靶腺軸功能的動態(tài)變化規(guī)律。方法 SD大鼠90只隨機分為3組：正常組、模型組、右歸丸組；分別測定3個組早、中、晚期垂體-甲狀腺軸生物分子[促甲狀腺激素(TSH),三碘甲腺原氨酸(T3),四碘甲腺原氨酸(T4)]、垂體-腎上腺軸生物分子[促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH) 和 皮質(zhì)醇(CORT)]以及垂體-性腺軸生物分子[黃體生成素(LH),促卵泡激素(FSH),睪酮(T) ]的含量，利用成組比較及因子分析方法探究右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛時垂體-靶腺軸功能的動態(tài)變化規(guī)律。結(jié)果 右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早中晚3個時期除LH和ACTH外，垂體-靶腺軸其余生物分子指標值均隨著用藥時間增加而逐漸增大且差異有統(tǒng)計學意義；右歸丸組因子分析結(jié)果表明：早期主調(diào)控因子主要包括靶腺層生物分子，中期增加了1個垂體層生物分子，晚期增加了2個垂體層生物分子。結(jié)論 右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛相對西藥是一個較為緩慢長期的過程；右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛過程中首先對靶腺層起作用，進而反饋到垂體層。

關(guān)鍵詞:右歸丸； 腎陽虛； 垂體-靶腺軸； 因子分析

腎陽虛伴有機體廣泛的病理生理變化[1-3]，下丘腦-垂體-靶腺軸多個激素指標出現(xiàn)異常變化[4-5]，機體功能低下或紊亂。右歸丸出自《景岳全書》是一首溫補腎陽、填精養(yǎng)血的常用方具有溫補腎陽、填精益髓之功效[6]，是治療腎陽虛的經(jīng)典復方。

在課題組前期對右歸丸的藥效及腎陽虛大鼠垂體-靶腺軸功能的研究[7-13]基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)右歸丸是整體、多靶點、動態(tài)的調(diào)節(jié)機體，因此本研究選取垂體-靶腺軸(甲狀腺、腎上腺、性腺)8個激素指標，通過建立分時期的腎陽虛大鼠模型，同時利用統(tǒng)計學方法闡釋右歸丸對腎陽虛的動態(tài)整體的調(diào)節(jié)作用。

1材料與方法

1.1主要試劑

TSH(促甲狀腺激素)、T3(三碘甲腺原氨酸)、T4(四碘甲腺原氨酸)、LH(黃體生成素)、FSH(促卵泡激素)、T(睪酮)、ACTH(促腎上腺皮質(zhì)激素)和CORT(皮質(zhì)醇)放射免疫試劑藥盒由北京北免東雅生物技術(shù)研究所提供。

1.2動物及分組

雄性SD大鼠，體質(zhì)量220～250 g，廣東省實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(粵)2008-0002。購進后，適應環(huán)境5 d，隨機分為正常組、腎陽虛模型組、右歸丸組3組，每組30只，共90只。

1.3動物造模及處理[5]

①正常組：0.9%的生理鹽水0.3 mL后肢肌肉注射，每天1次。自由飲水、飲食，連續(xù)29 d；②腎陽虛大鼠模型復制：醋酸可的松混懸液充分混勻。按2.5 mg/100 g后肢肌肉注射，每天1次。自由飲水、飲食,連續(xù)29 d； ③右歸丸組:分別在腎陽虛大鼠模型復制后8 d起給予右歸丸灌胃，給藥容積1.0 mL/100 g。每天1次。自由飲水、飲食,連續(xù)29 d；④處理：采取毒理實驗常用的方法即分批宰殺。為了獲得動態(tài)可靠的實驗數(shù)據(jù)，對動物采取平行處理，即3組動物分別在第15天(10只)、第23天(10只)、第30天(10只)處死；取血清用放免法檢測TSH、T3、T4； ACTH、CORT、 FSH、LH、T。

1.4統(tǒng)計學方法

近幾年，隨著科學技術(shù)的提高，科學技術(shù)在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應用也在逐漸的提高，尤其是在農(nóng)作物的栽培技術(shù)研究中。茄子是茄科茄屬一年生草本植物，其營養(yǎng)價值高，不僅能幫助維持人體酸堿平衡，多吃還有抗癌的保健功效。茄子在種植的過程中由于栽培技術(shù)的局限，其產(chǎn)量和質(zhì)量都難以滿足人們的需求，故此，通過日光溫室栽培技術(shù)提高茄子的產(chǎn)量和質(zhì)量，滿足人們的日常需求，促進農(nóng)業(yè)經(jīng)濟作物的健康良性發(fā)展。

① 成組比較：對正常組、模型組及右歸丸組的早、中、晚3個時期的垂體-靶腺軸生物分子的指標值進行成組比較，驗證分時期的腎陽虛造模是否成功以及右歸丸的藥效及動態(tài)起效過程；②因子分析：因子分析是多元統(tǒng)計分析中的一個重要內(nèi)容，其基本思想就是根據(jù)變量內(nèi)部的相關(guān)性大小對變量分組，使組內(nèi)變量間高相關(guān)、組間變量間低相關(guān)[14]，得到的每一組組合的變量稱為公共因子，結(jié)合所研究問題的相關(guān)背景知識可以來分析每個公共因子的實際意義。本研究對右歸丸藥方組早、中、晚3個時期垂體-靶腺軸生物分子指標值進行因子分析，了解各生物分子之間相關(guān)關(guān)系的變化。通過主成分所占比重探討右歸丸在腎陽虛的不同時期對哪些生物分子作用大，進而闡釋右歸丸的動態(tài)作用機制。

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行成組比較及因子分析。在因子分析過程中利用主成分法進行因子提取，利用最大方差旋轉(zhuǎn)法進行因子旋轉(zhuǎn)，并將正交旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣作為提取公共因子的依據(jù)。

2結(jié)果與分析

2.1正常組、模型組、右歸丸組早、中、晚3個時期垂體-靶腺軸激素指標值的變化

結(jié)果見表1。模型組垂體-靶腺軸8個激素指標隨造模時間增加不斷下降，尤其是模型組晚期指標值下降明顯，模型組與正常組之間以及除垂體-甲狀腺軸3個激素早、中期外，模型組不同時期之間指標值差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明本實驗造模成功，且腎陽虛早、中、晚3個時期分割效果好；右歸丸組不同時期的指標值與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(除FSH早、中期外)，提示右歸丸有效。同時右歸丸組指標值隨著用藥時間的增加逐漸增大(除LH、ACTH外)，并且右歸丸組不同時期指標值之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，說明右歸丸起效是一個相對緩慢長期的過程。

2.2右歸丸組早、中、晚3個時期因子分析結(jié)果及分析

結(jié)果見表2。按照因子載荷值的大小將關(guān)聯(lián)程度分為3個層次，當因子載荷值小于0.4時，認為該生物分子與此公共因子關(guān)聯(lián)程度較弱；當因子載荷值大于0.6時，認為該生物分子與所在公共因子關(guān)聯(lián)程度較強；當因子載荷值處于0.4～0.6之間時，認為該生物分子與其所在的公共因子有一定關(guān)聯(lián)[15]。根據(jù)此原則并結(jié)合表2，右歸丸早、中、晚3個時期垂體-靶腺軸8個激素指標相關(guān)性分組見表3。

由表3可見右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早、中、晚3個時期，取前3個公共因子的總方差貢獻率均達到75%以上，即這3個公共因子可以在75%的程度上解釋所有生物分子包含的全部信息。同時由于方差貢獻率最大，因此稱之為右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的主調(diào)控因子。右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早期主調(diào)控因子包括T4、T、CORT，并且方差貢獻率為32.49%，即主調(diào)控因子包括垂體-甲狀腺軸，垂體-腎上腺軸及垂體-性腺軸的靶腺層生物分子，提示右歸丸早期主要對靶腺層生物分子起作用。中期主調(diào)控因子包括T4、FSH、CORT，并且方差貢獻率占32.78%，即中期主調(diào)控因子較之于早期增加一個垂體層生物分子；晚期主調(diào)控因子包括LH、T、ACTH、CORT，并且方差貢獻率占40.74%，較之于早期增加2個垂體層生物分子，且主調(diào)控因子方差貢獻率逐漸增大。

表1　正常組、模型組及右歸丸組早、中、晚3個時期垂體-靶腺軸激素的指標值

同一指標同一時期，與正常組比較:△P<0.01，與模型組比較：▲P<0.01；同一指標同一組別，與早期比較：☆P<0.01，與中期比較：★P<0.01。

表2 右歸丸組早、中、晚3個時期垂體-靶腺軸8個激素指標正交旋轉(zhuǎn)后的因子載荷矩陣(取前3列)

Table 2Rotated component matrix of 8 hormones on pituitary-target gland axes in the YP group during the early,middle and late periods (the first 3 arrays)

時期指標f1f2f3早期TSH-0.290-0.8410.218T3-0.0980.8720.077T40.6600.4710.017LH0.152-0.1210.832FSH0.3650.3200.420T-0.780-0.1160.241ACTH-0.4130.0070.722CORT0.740-0.1840.405

續(xù)表2

注：各列中有下劃線的因子載荷值對應的指標屬于其所在的公共因子

表3右歸丸組早、中、晚期垂體-靶腺軸8個激素指標相關(guān)性分組

Table 3Correlation grouping of 8 hormones on pituitary-target gland axes in the YP group during the early,middle and late periods

時期f1方差貢獻率/%f2方差貢獻率/%f3方差貢獻率/%總方差貢獻率/%早期T4TCORT32.49TSHT325.61LHACTHFSH17.7175.81中期T4FSHCORT32.78T3TACTH28.47TSHLH15.5176.77晚期LHTACTHCORT40.74TSHT330.98FSHT413.6685.38

3討論

模型組大鼠早、中、晚3個時期垂體-靶腺軸激素指標值的變化表明這種分時期的腎陽虛大鼠模型構(gòu)建成功。同時右歸丸組大鼠早、中、晚3個時期垂體-靶腺軸激素指標值的變化顯示右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛是一個相對緩慢長期的過程。

從右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早、中、晚3個時期的主調(diào)控因子可以看出，右歸丸早期主要對靶腺層生物分子起作用，隨著用藥時間的增長逐漸反饋到垂體層。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)垂體-腎上腺軸樞紐作用消失是腎陽虛發(fā)生的機制之一[12-13]。而右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的早、中期主調(diào)控因子包含垂體-腎上腺軸靶腺層生物分子CORT，晚期主調(diào)控因子包含了垂體-腎上腺軸垂體層和靶腺層的2個生物分子ACTH和CORT，提示在右歸丸的調(diào)節(jié)下隨著用藥時間增加垂體-腎上腺軸的功能逐漸恢復。

本研究通過建立分時期的腎陽虛大鼠模型，利用右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛，發(fā)現(xiàn)垂體-靶腺軸8個激素除LH、ACTH 2個垂體層激素外，其余激素均隨用藥時間增加而逐漸回升，可見右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛是一個相對緩慢長期的過程。同時因子分析的結(jié)果提示右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛的過程是先對靶腺層激素起作用，進而反饋到垂體層。后續(xù)研究將繼續(xù)深入研究和挖掘右歸丸調(diào)節(jié)腎陽虛時靶腺層對垂體層的反饋調(diào)節(jié)作用。

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(責任編輯：幸建華)

Dynamic changes of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by Yougui pill

ZHANG Lei,LIAO Chengbin,HUANG Rongbo,MA Na,TANG Xiaoya,WANG Xiufeng

(BasicSchoolofGuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To explore the change rule of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by Yougui pill (YP). Methods 90 SD rats were randomly divided into three groups,including the normal group,the model group and the YP group. The model of kidney yang deficiency was established by intramuscular injection of cortisone. The values of the hormones in pituitary-thyroid axis (TSH,T3 and T4),pituitary-adrenal axis (ACTH and CORT) and pituitary-gonadal axis (LH,FSH and T) in rats were measured in the early,middle and late periods,respectively. The t-test and factor analyses were used to examine the change rule of the pituitary-target gland axis function in the kidney yang deficiency modulated by YP. Results The values of hormones,except LH and ACTH,on pituitary-target gland axes were significantly increased in the YP group during the early,middle and late periods. Master regulatory factors mainly contained the hormones of the target gland layer in the early period,one hormone of the pituitary gland layer was involved in the middle period,and two hormones of the pituitary gland layer were involved in the late period. Conclusion YP treatment shows a slow process in modulation of kidney yang deficiency,which first affect the target gland layer and then feed back to the pituitary gland layer.

Key words:Yougui pill; kidney yang deficiency; pituitary-target gland axis; factor analysis

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2015110401

中圖分類號:R285.5

文獻標志碼:A

文章編號:1006-8783(2016)01-0102-05

作者簡介：張磊(1979—)，男，碩士，實驗師，主要從事生物系統(tǒng)數(shù)據(jù)挖掘研究工作，Email:zhanglei.st@163.com；通信作者：王秀鳳(1980—)，女，碩士生導師，副教授，主要從事生物系統(tǒng)與數(shù)據(jù)挖掘研究，Email:wxfsnow8012@126.com。

基金項目：國家自然科學基金項目(81403153)

收稿日期：2015-11-04

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-01-15 14:26網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160115.1426.002.html