大鼠腦、肝組織3種RNA相對(duì)表達(dá)量與死亡時(shí)間的關(guān)系

董智杰，陳 亮，吳 岳△

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院；2.青海省公安廳刑事技術(shù)研究管理中心)

大鼠腦、肝組織3種RNA相對(duì)表達(dá)量與死亡時(shí)間的關(guān)系

董智杰1，陳 亮2，吳 岳1△

(1.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院；2.青海省公安廳刑事技術(shù)研究管理中心)

目的 研究大鼠腦、肝臟組織3種RNA相對(duì)表達(dá)量與死亡時(shí)間的關(guān)系，比較兩組織用于死亡時(shí)間推斷的適用性。方法 將48只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，斷頸處死，分別于死后0、24、48、72、120、168 h取大鼠腦皮質(zhì)及肝右外葉。提取腦、肝組織總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR)技術(shù)檢測(cè)兩組織中miR(腦特異性miR-124、肝特異性miR-122)及甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)mRNA的循環(huán)閾值(cyclic threshold，Ct)。用BestKeeper程序篩選內(nèi)參，對(duì)目的RNA的Ct值進(jìn)行2-ΔΔCt轉(zhuǎn)換，用SPSS及GraphPad軟件對(duì)其進(jìn)行單因素方差分析，并對(duì)ΔCt值進(jìn)行曲線回歸分析。結(jié)果 miR-124和miR-122分別為腦、肝組織的內(nèi)參。腦組織GAPDH、β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)量在死后72 h內(nèi)逐漸增加，并于死后72 h達(dá)到峰值，之后逐漸下降(P<0.05)；而肝GAPDH、β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)量從死后48 h開始逐漸下降(P<0.05)。所有分子的最適回歸模型均為三次模型，且肝組織的相關(guān)系數(shù)r大于腦組織。結(jié)論 大鼠腦、肝組織中GAPDH、β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)量與死亡時(shí)間具有相關(guān)性，肝組織比腦組織更適用于死亡時(shí)間推斷。

大鼠腦肝臟組織RNA表達(dá)量死亡時(shí)間

準(zhǔn)確推斷死亡時(shí)間(postmortem interval，PMI)是刑事技術(shù)的一大挑戰(zhàn)，而傳統(tǒng)的PMI推斷方法易受外界環(huán)境因素、個(gè)體差異及檢驗(yàn)者主觀因素和經(jīng)驗(yàn)的影響，準(zhǔn)確性較差。近年來(lái)，研究者以分子生物學(xué)指標(biāo)為研究對(duì)象，將核酸(DNA、RNA)的降解[1]情況應(yīng)用于PMI推斷的研究中，但研究結(jié)果不一。本研究采用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)大鼠腦、肝臟組織miR(腦特異性miR-124、肝特異性miR-122)和GAPDH、β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)量，并分析其與PMI的關(guān)系，進(jìn)一步明確不同組織中不同RNA分子在PMI推斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

健康成年雄性Wistar大鼠48只，體重(250±20)g，購(gòu)于甘肅中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)SCXK(甘)2015-0002；于青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房適應(yīng)性飼養(yǎng)7天(自由進(jìn)食進(jìn)水)。將大鼠隨機(jī)分為死后0、24、48、72、120、168 h六組，每組8只。將大鼠斷頸處死，置于溫度12±1 ℃、濕度40±2%的環(huán)境中，于死后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取大鼠腦皮質(zhì)及肝右外葉，一部分組織凍存(-80℃)，一部分組織制片(4%多聚甲醛固定，HE染色)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑選擇

4%多聚甲醛(北京Solarbio公司)，無(wú)水乙醇、二甲苯(上海廣諾化學(xué)科技有限公司)，濃鹽酸、氨水、冰醋酸(西安三浦化學(xué)試劑有限公司)，蘇木素、伊紅(上海誠(chéng)凜生物科技有限公司)，中性樹膠、50×TAE(北京biotopped公司)，氯仿、異丙醇(上海中泰化學(xué)試劑有限公司)，Trizol(美國(guó)Sigma公司)，GeneGreen核酸染料、RNase-Free H2O、5*RNA電泳Loading Buffer(北京TIANGEN公司)，BiowestAgarose(西班牙Biowest公司)，RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit(美國(guó)Thermo公司)，gDNA Eraser、SYBR? Premix Ex TaqTMII (TliRNaseH Plus)(日本Takara公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器選擇

Leica TP1020型全自動(dòng)脫水機(jī)、Leica EG1150型石蠟包埋機(jī)、Leica EG1150C冷凍臺(tái)、Leica RM2126型輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)、攤片機(jī)、Leica H1220型烘片機(jī)(德國(guó)Leica公司)，Thermo PrintMate150型組織盒書寫儀、NanoDrop 2000c核酸分析儀(美國(guó)Thermo公司)，OLYMPUS BX41型系統(tǒng)顯微鏡(日本OLYMPUS公司)、IKAVortex Genius 3震蕩器(德國(guó)IKA集團(tuán))，SCILOGEXD1008E掌上離心機(jī)(美國(guó)SCILOGEX公司)，Eppendorf Centrifuge 5424 R離心機(jī)、EppendorfMastercyclerpro S梯度PCR儀(德國(guó)eppendorf公司)，F(xiàn)6/10 勻漿機(jī)(上海凈信科技)，ABI 7500RT-qPCR儀(美國(guó)ABI公司)，BIO-RAD GelDocXR+凝膠成像儀(美國(guó)Bio-Rad公司)，DYY-8C型電泳儀(北京市六一儀器廠)。

1.4 實(shí)驗(yàn)

1.4.1 總RNA提取

取50～100 mg腦或肝組織，加入1 mL Trizol，冰上勻漿，室溫放置10 min。加0.2 mL氯仿，劇烈振蕩15 s，室溫放置10 min。4 ℃，12000×g離心15 min。取上層無(wú)色水相至新1.5 mL EP管中，加入0.5 mL異丙醇，顛倒混勻，室溫放置10 min。4 ℃，12000×g離心10 min，管底可見白色沉淀。棄上清，加入75%乙醇1 mL，渦旋混合，4 ℃，12000×g離心5 min。重復(fù)上一步驟，棄上清。在濾紙上倒置吸干，室溫干燥5 min。腦組織總RNA中加入90 μLRNase-Free H2O使其溶解，肝加入360 μL。用NanoDrop 2000 c核酸分析儀檢測(cè)RNA的濃度及純度、1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的完整性。分裝后凍存(-80℃)。

1.4.2 引物合成

miR反轉(zhuǎn)錄采用莖環(huán)引物，miR-124：5＇-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATA

CGACGGCATT-3＇，miR-122：5＇-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCAAA

CA-3＇。miR-124、miR-122及GAPDH、β-actinmRNART-qPCR的引物序列均引自參考文獻(xiàn)[2-5]，并由上海生工生物工程股份有限公司合成，其序列見表1。

表1 各RNA指標(biāo)RT-qPCR引物序列

1.4.3 gDNA去除與cDNA合成

用gDNA Eraser去除總RNA中的gDNA，反應(yīng)體系10 μL：RNA 1 μg，gDNA Eraser 1 μL，5×gDNA Eraser Buffer 2 μL，RNase-Free H2O補(bǔ)足至10 μL；反應(yīng)條件：42 ℃ 2 min。用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒對(duì)上述RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系20 μL：①RNA 1 μg，miR加入莖環(huán)引物2 μL(10 pmol/μL)，GAPDH、β-actin mRNA加入Oligo(dT)18 primer 1 μL，RNase-Free H2O補(bǔ)足至12 μL；反應(yīng)條件：65 ℃ 5 min，冰上冷卻。②向上述12 μL體系中加入5×Reaction Buffer 4 μL，RiboLockRNase Inhibitor(20 U/μL)1 μL，10 mMdNTP Mix 2 μL，RevertAid M-MuLV RT(20 U/μL)1 μL；反應(yīng)條件：42 ℃ 60 min，70 ℃ 5 min。將上述反轉(zhuǎn)錄cDNA按1：10稀釋，分裝后凍存(-20℃)。

1.4.4 RT-qPCR檢測(cè)

用SYBR? Premix Ex TaqTMII 試劑盒進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)，反應(yīng)體系20 μL：SYBR Premix Ex Taq II(2×)10 μL，PCR Forward Primer(10 μM)0.8 μL，PCR Reverse Primer(10 μM)0.8 μL，ROX Reference Dye II(50×)0.4 μL，cDNA模板2 μL，RNase-Free H2O 6 μL。用ABI 7500RT-qPCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增條件：①Stage 1：95 ℃ 30 s；②Stage 2：95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，40 Reps；③ Stage 3：95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。每個(gè)樣本3個(gè)復(fù)孔。Ct值由7500 Software v2.0.6軟件測(cè)得。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用BestKeeper程序篩選腦、肝臟組織的內(nèi)參基因，將同一組織各候選基因的Ct值導(dǎo)入軟件，計(jì)算各基因標(biāo)準(zhǔn)差(SD)和變異系數(shù)(CV)的大小，其值越小，則該基因越穩(wěn)定。因此，選取標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)最小的RNA分子為內(nèi)參基因。除內(nèi)參外，以其余各RNA分子為目的基因，以大鼠死后0 h組為對(duì)照組，其余各組為處理組。將目的RNA分子的Ct值進(jìn)行2-ΔΔCt[ΔΔCt=(Ct目的RNA-Ct內(nèi)參)處理組-(Ct目的RNA-Ct內(nèi)參)對(duì)照組]轉(zhuǎn)換，表示處理組各樣本的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組的倍數(shù)，之后運(yùn)用SPSS 21.0及GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。并對(duì)內(nèi)參校正后的目的RNA分子的ΔCt(ΔCt=Ct目的RNA-Ct內(nèi)參)與PMI進(jìn)行曲線回歸分析。

2 結(jié)果

2.1 HE染色情況

組織大體改變：死后24、48 h時(shí)，腦、肝臟的形態(tài)未見明顯變化，之后組織變軟，色澤較晦暗。腦組織在死后72 h開始糊化，120 h及168 h時(shí)糊化加重，腦組織結(jié)構(gòu)尚完整。

鏡下結(jié)果：死后不同時(shí)間腦和肝臟組織形態(tài)學(xué)變化分界不明顯。死后即刻，腦組織形態(tài)學(xué)變化較肝組織明顯，腦組織可見神經(jīng)元腫脹及紅色神經(jīng)元。各組腦、肝臟組織實(shí)質(zhì)細(xì)胞均可見空泡形成，核固縮、碎裂、溶解。隨著死亡時(shí)間的延長(zhǎng)，肝細(xì)胞染色質(zhì)邊集逐漸明顯，死后168 h時(shí)，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，肝索排列紊亂，細(xì)胞核溶解消失，核數(shù)量明顯減少。見圖1～2。

A：0 h；B：24 h；C：48 h；D：72 h；E：120 h；F：168 h

A：0 h；B：24 h；C：48 h；D：72 h；E：120 h；F：168 h

2.2 RNA純度、濃度、完整性檢測(cè)及RT-qPCR結(jié)果

用NanoDrop 2000c核酸分析儀檢測(cè)總RNA的純度及濃度，測(cè)得所有樣本的OD260/280在1.8～2.1之間，表明RNA的純度良好。濃度在356 ng/μL～933 ng/μL之間。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見圖3。表明腦組織總RNA在死后168 h內(nèi)未見明顯降解，而肝組織總RNA在死后120 h開始明顯降解。

所有樣本的cDNA均進(jìn)行了有效擴(kuò)增，擴(kuò)增曲線良好，均得到Ct值。溶解曲線均為單峰，表明無(wú)引物二聚體及非特異性擴(kuò)增。

圖3 腦(左)和肝(右)組織總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖

2.3 內(nèi)參基因篩選結(jié)果

運(yùn)用BestKeeper程序篩選腦、肝臟的內(nèi)參基因，結(jié)果見表2。表2顯示，腦組織中miR-124的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)最小，肝組織中miR-122的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)最小。因此，將miR-124作為腦的內(nèi)參基因、miR-122作為肝的內(nèi)參基因。對(duì)兩組織中的GAPDH、β-actin mRNA的Ct值進(jìn)行內(nèi)參校正，得到ΔCt值。

表2 腦和肝組織3種候選內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性結(jié)果(Ct值)

2.4 各RNA的相對(duì)表達(dá)量2-ΔΔCt與PMI的單因素方差分析結(jié)果

大鼠死后不同時(shí)間腦和肝臟組織各RNA的相對(duì)表達(dá)量2-ΔΔCt的組間差異性比較結(jié)果見表3。大鼠腦組織GAPDH、β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)量在死后72 h內(nèi)逐漸增加，并于死后72 h達(dá)到峰值，之后逐漸下降(P<0.05)；而肝GAPDH、β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)量從死后48 h開始逐漸下降(P<0.05)。其變化趨勢(shì)見圖4。

表3 死后不同時(shí)間各RNA的相對(duì)表達(dá)量

*：與同組織該分子0 h組相比P<0.05；△：與同組織該分子72 h組相比P<0.05.

圖4 腦(左)和肝(右)組織各RNA相對(duì)表達(dá)量隨PMI的變化趨勢(shì)圖

2.5 各RNA的ΔCt值與PMI的曲線回歸分析結(jié)果

對(duì)腦和肝組織的GAPDH、β-actin mRNA的ΔCt值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以PMI為自變量x、ΔCt值為因變量y進(jìn)行曲線回歸分析，構(gòu)建一次、二次和三次模型，結(jié)果見表4，曲線圖見圖5。以腦GAPDH mRNA為例(見表4)，相關(guān)系數(shù)r三次(0.659)>r二次(0.645)>r一次(0.310)，且三個(gè)模型P<0.05。因此，三次模型可作為腦GAPDH mRNA的最適模型。同理，腦β-actin mRNA及肝GAPDH、β-actin mRNA的最適模型均為三次模型。腦組織與肝組織相比，腦組織兩RNA最適模型的相關(guān)系數(shù)r介于0.4～0.7之間，為中度相關(guān)，而肝組織的大于0.7，為高度相關(guān)。因此，肝組織比腦組織更適用于PMI推斷。

表4 各RNA的ΔCt值與PMI的回歸模型

注：#為RNA指標(biāo)的最適模型.

圖5 腦(A、B)和肝(C、D)組織GAPDH(A、C)、β-actin(B、D)mRNA的ΔCt值與PMI的回歸曲線圖

3 討論

本研究結(jié)果顯示，大鼠神經(jīng)元與肝細(xì)胞形態(tài)隨PMI發(fā)生變化，且大鼠腦和肝組織中GAPDH、β-actin mRNA的相對(duì)表達(dá)量與PMI具有相關(guān)性，肝臟比腦組織更適用于PMI推斷。

大鼠死后，各組織缺血缺氧，膜穩(wěn)定性下降，溶酶體膜破裂，釋放出各種水解酶，使核酸、蛋白質(zhì)等物質(zhì)逐漸降解，表現(xiàn)為核固縮、碎裂、溶解，隨著PMI的延長(zhǎng)，自溶加重，表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)不清直至消失。由于腦組織對(duì)缺氧更敏感，因此死后即刻神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化較肝細(xì)胞更為明顯。由于死后各組織缺血缺氧，導(dǎo)致細(xì)胞氧化磷酸化過(guò)程受阻，使ATP的合成減少，Na+-K+-ATP酶的功能下降，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)水、鈉潴留，表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹。

近年來(lái)，RNA的穩(wěn)定性[6]得到證實(shí)，通過(guò)RNA的降解情況尤其是定量檢測(cè)RNA的相對(duì)表達(dá)量推斷PMI成為研究的熱點(diǎn)。本研究通過(guò)RT-qPCR技術(shù)定量檢測(cè)大鼠死后不同時(shí)間腦和肝組織3種RNA的相對(duì)表達(dá)量來(lái)推斷PMI，不像普通RT-PCR技術(shù)只能在擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)行粗略定量(分析擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖像)，而RT-qPCR技術(shù)可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增全程，通過(guò)在DNA雙鏈間嵌入熒光基團(tuán)增加熒光信號(hào)強(qiáng)度，進(jìn)而監(jiān)測(cè)模板的表達(dá)量，更方便、準(zhǔn)確。RT-qPCR技術(shù)具有靈敏、快速、高效等優(yōu)點(diǎn)[7]，但其結(jié)果的準(zhǔn)確性依賴于內(nèi)參的正確選擇和較小的操作誤差。本研究應(yīng)用BestKeeper程序，通過(guò)計(jì)算各分子的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，以最小者作為內(nèi)參，并非在實(shí)驗(yàn)前默認(rèn)某個(gè)分子作為內(nèi)參，有效避免了因?qū)嶒?yàn)處理因素導(dǎo)致的內(nèi)參表達(dá)量的變化而引起的誤差；同時(shí)對(duì)每個(gè)樣本做3個(gè)復(fù)孔以減少人為操作誤差。本研究中腦和肝臟組織均選取3個(gè)候選內(nèi)參基因，miR在兩組織中表達(dá)最為穩(wěn)定，說(shuō)明其受PMI的影響較小，與Lv等[8-9]研究結(jié)果一致。miR的表達(dá)具有保守性和組織特異性，miR-124和miR-122分別在腦和肝臟組織中特異性高表達(dá)，可有效減少個(gè)體差異引起的誤差；且其僅含有22個(gè)左右核苷酸，片段小，穩(wěn)定性強(qiáng)，這些因素決定了miR為較理想的內(nèi)參，可提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本實(shí)驗(yàn)中miR在反轉(zhuǎn)錄的過(guò)程中采用莖環(huán)引物而非線性引物，莖環(huán)引物特異性高，可以區(qū)分miR前體及僅有個(gè)別堿基差異的miR分子[10]。

本研究選取管家基因GAPDH和β-actin推斷PMI，因?yàn)楣芗一蚴蔷S持細(xì)胞基本生命活動(dòng)所必需的基因，在所有組織細(xì)胞中高豐度且恒定表達(dá)，可減少個(gè)體差異造成的誤差。GAPDH是糖酵解過(guò)程中的酶，在缺氧條件下，機(jī)體通過(guò)上調(diào)GAPDH的表達(dá)量增加對(duì)葡萄糖的利用，以增加機(jī)體的能量供應(yīng)。機(jī)體死后一段時(shí)間，各組織細(xì)胞殘存部分活性，尚能感受機(jī)體缺氧狀態(tài)，此時(shí)GAPDH的增加速率大于降解速率。因此，GAPDH mRNA的相對(duì)表達(dá)量在死后一段時(shí)間內(nèi)升高；隨著PMI的延長(zhǎng)，糖酵解過(guò)程逐漸減弱，GAPDH的增加速率小于降解速率，表現(xiàn)為下降。腦組織處于相對(duì)封閉的環(huán)境中，有顱骨作為天然屏障，受外界因素影響較小[11]，因此腦組織GAPDH mRNA的相對(duì)表達(dá)量表現(xiàn)為先升高后下降；而肝臟位于腹腔中，與腸管相鄰，所處環(huán)境含有大量細(xì)菌，且肝臟本身含有大量的酶，均加速GAPDH mRNA的降解，因此肝臟中降解速率大于腦組織，肝臟GAPDH mRNA沒(méi)有出現(xiàn)升高而是逐漸下降。β-actin參與構(gòu)成細(xì)胞骨架，是微絲的組成成分，在缺氧條件下，細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)可能遭到破壞或成分發(fā)生改變，使其相對(duì)表達(dá)量升高；β-actinmRNA在腦組織和肝臟中的變化原因同GAPDH。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果與Lv[5]、Pan[12]、呂葉輝[13]等不同，可能與死因、環(huán)境、組織類型等有關(guān)。在后續(xù)研究中應(yīng)添加動(dòng)物及人體驗(yàn)證模型，以檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。目前，用RNA的相對(duì)表對(duì)量推斷PMI仍處于理論研究階段，如何將理論研究結(jié)果應(yīng)用于法醫(yī)實(shí)踐將是未來(lái)研究的重點(diǎn)。

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Relationship among relative expression levels of 3 kinds of RNA and postmortem intervalin brain and livertissues of rats

DONG Zhi-jie1，CHEN Liang2，WU Yue1

(1.Qinghai University Medical College；2.Department of Criminal Technology Research and Management Center，Qinghai Provincial Public Security)

Objective To study the relationship between the relative expression levels of 3 kinds of RNA and postmortem intervalin two different tissues of brain and liver in rats，and to compare the applicability of the two tissues in the estimation of PMI.Methods 48 Wistar rats were randomly divided into 6 groups，and all of them were killed by neck dislocation.Atthe postmortem 0 h，24 h，48 h，72 h，120 h，168 h，cerebral cortex and right hepatic lobe were taken.Thentotal RNA of brain and liver tissues were extracted，and the cyclic thresholds(Ct values)of miR(brain specific miR-124，liver specific miR-122)and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)，beta -actin(β-actin)mRNA in the two tissues were detected by real-time fluorescence quantitative PCR(RT-qPCR).Theinternal reference was selected by BestKeeper program，and the Ct value of target RNA was converted into 2-ΔΔCt.Single factor variance analysis was used to examine 2-ΔΔCtby SPSS and GraphPad software，and the curve regression analysis was used to examine ΔCtvalue.Results MiR-124 and miR-122 were the most suitable internal reference in brain and liver tissues respectively.The relative expression levels of brain tissue GAPDH and β-actin mRNA increased gradually within the postmortem72 h，and the peak was reached at the postmortem 72 h，after the postmortem 72 h the relative expression levels decreased gradually(P< 0.05).The relative expression levels of hepatic GAPDH and β-actin mRNA decreased gradually after the postmortem 48h(P<0.05).The optimal regression models of all RNA were the cubic model.The correlation coefficient of liver tissue was larger than that of the brain tissue.Conclusion The relative expression levels of GAPDH and β-actin mRNA in brain and liver tissues of rats are correlated with PMI.The liver tissue is more suitable forthe estimation of PMI than the brain tissue.

rats brain liver tissue RNA expression level postmortem interval

R89

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2016.04.008

2016-06-12

※：董智杰(1990～)，女，漢族，河南籍，青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院2014級(jí)碩士研究生.△：通信作者，碩士生導(dǎo)師，E-mail：1577697749@qq.com