沈青山，張　婷，胡蘭蘭，胡梁斌（河南科技學(xué)院食品學(xué)院，河南新鄉(xiāng)　453003）

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幾種茶提取物對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的抑制作用

沈青山，張婷，胡蘭蘭，*胡梁斌
（河南科技學(xué)院食品學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003）

摘要：采用96孔板微量法，以氨芐青霉素作為陽性對(duì)照，研究幾種不同茶的水提物對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明，茶提取物對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，其中發(fā)酵茶和非發(fā)酵茶質(zhì)量濃度分別超過0.1 mg/mL和0.05 mg/mL時(shí)，隨著質(zhì)量濃度的增大抑制作用顯著增強(qiáng)；而作為陽性對(duì)照的氨芐青霉素質(zhì)量濃度達(dá)到30 μg/mL時(shí)，可以完全抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：茶提取物；金黃色葡萄球菌；抑制作用

0　引言

食源性病原物金黃色葡萄球菌（Staphalococcus aureus）屬革蘭氏陽性球菌。自然界中金黃色葡萄球菌無處不在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物中都可找到，是食品污染的常見微生物。每年食源性病原體導(dǎo)致數(shù)千萬人患病，且多數(shù)導(dǎo)致死亡[1]。金黃色葡萄球菌污染食品可以產(chǎn)生腸毒素；金黃色葡萄球菌是引起人類和動(dòng)物化膿感染的重要致病菌，也是造成人類食物中毒的常見致病菌之一[2]。美國(guó)疾病控制中心報(bào)告指出，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第2位，僅次于大腸桿菌；在我國(guó)金黃色葡萄球菌導(dǎo)致的疾病也時(shí)有發(fā)生。

近年來，抗生素的大量使用、菌株的耐藥性以及抗生素的殘留問題日趨嚴(yán)重。因此，采用天然抗菌物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)具有污染小、無不良過敏反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)而備受青睞。茶葉作為中國(guó)一種傳統(tǒng)的飲品具有良好的抗衰老功能，含有很多對(duì)人體具有生理調(diào)節(jié)功能的成分，可以有效預(yù)防和治療多種疾病[3-4]。茶葉中含有豐富的必需氨基酸和非必需氨基酸，其中一些非蛋白氨基酸具有良好的保健功效，γ-氨基丁酸具有降血壓、抗焦慮、治療哮喘、治療癲癇、調(diào)節(jié)激素分泌等作用[5-6]。普洱熟茶等發(fā)酵茶經(jīng)過渥堆、發(fā)酵、陳化及干燥等工藝加工而成，其中在渥堆微生物發(fā)酵的過程中會(huì)引起茶葉品質(zhì)以及一些活性成分發(fā)生變化，也會(huì)產(chǎn)生一些抗菌類物質(zhì)[7-8]。茶葉中的多酚類物質(zhì)具有抗菌活性。研究表明，茶中沒食子酸槲皮素等多酚類物質(zhì)能夠抑制黃曲霉毒素的產(chǎn)生[9-10]，并且槲皮素還可以阻止黃曲霉毒素B1向其環(huán)氧化物（具有致癌性）的轉(zhuǎn)化[11]。茶葉的水提物中茶多酚的含量較高，而且不同種類茶葉水提物的活性成分也不盡相同[12]。本文采用水浸提不同種類的茶葉，用茶葉浸提物研究了對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用，該研究為茶葉的開發(fā)利用及其抗菌活性的研究提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1料與試劑

菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923，購(gòu)于中國(guó)工業(yè)微生物菌種管理保藏中心；96孔板。

試驗(yàn)茶葉樣品產(chǎn)地見表1。

表1　試驗(yàn)茶葉樣品產(chǎn)地

氨芐青霉素（北京索萊寶科技有限公司）、酵母提取物、蛋白胨、氯化鈉、平板計(jì)數(shù)瓊脂，試劑及試驗(yàn)中所用到的其他試劑均為化學(xué)純。

1.2器與設(shè)備

多功能酶標(biāo)儀，Thermol公司產(chǎn)品；FD-1A-50型冷凍干燥機(jī)、真空抽濾裝置、SHZ-A型水浴搖床、UV-7200型可見分光光度計(jì)，上海龍尼可公司產(chǎn)品；SHP-160型智能恒溫培養(yǎng)箱，上海滬循科學(xué)儀器公司產(chǎn)品；HZQ-F160型智能恒溫?fù)u床，江蘇太倉(cāng)華利達(dá)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；磁力攪拌器、粉碎機(jī)。

1.3驗(yàn)方法

1.3.1 LB培養(yǎng)基及氨芐青霉素的配置

（1）LB培養(yǎng)基的制備。稱取酵母提取物5.0 g，蛋白胨10.0 g，氯化鈉5.0 g，瓊脂15.0 g，加水1 000 mL于磁力攪拌器上充分溶解，調(diào)節(jié)pH值為7.4～7.6，分裝三角瓶于121℃高壓滅菌20 min。（注：LB液體培養(yǎng)基不需要加平板計(jì)數(shù)瓊脂）。

（2）氨芐青霉素的配置。稱取適量的青霉素粉末于蒸餾水中溶解，必須要用無菌濾膜過濾且于-20℃條件下避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2茶提取物的制備

（1）粉碎浸提。將不同的茶葉于粉碎機(jī)中粉碎，取50 g粉碎的茶葉粉末于1 000 mL水中90～95℃條件下水浴振蕩提取1 h，用真空抽濾去掉浸提殘?jiān)?，收集濾液。

婚前一見面就親嘴，婚后一見面就斗嘴；婚前生活妙不可言，婚后日子苦不堪言；婚前謊話都是情話，婚后情話都是廢話；婚前的男人很幽默，婚后的男人很沉默；婚前做什么都浪漫，婚后做什么都浪費(fèi)；婚前情話綿綿，婚后謊話連連；婚前愛情是神話，婚后愛情是笑話！

（2）冷凍干燥。將收集到的濾液于冷凍干燥機(jī)中-40℃條件下冷凍干燥至粉末備用。

（3）茶葉提取物的配置。稱取適量的冷凍干燥粉末用無菌水溶解，無菌濾膜過濾，用于抑菌試驗(yàn)。

1.3.3金黃色葡萄球菌的活化培養(yǎng)

將菌種劃線培養(yǎng)，挑取金黃色葡萄球菌單克隆于50 mL LB液體培養(yǎng)基中，以37℃，轉(zhuǎn)速150 r/min搖床培養(yǎng)過夜，再重新吸取培養(yǎng)液200 μL于50 mL培養(yǎng)基中繼續(xù)用搖床培養(yǎng)至OD578為0.8，用于后期試驗(yàn)菌液。

1.3.4抑菌試驗(yàn)

取適量制備好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液，用液體LB培養(yǎng)基稀釋至OD578為0.02，置于96孔板中，每孔加入菌液200 μL，用不同的茶葉提取物處理，終質(zhì)量濃度為0，0.01，0.05，0.10，0.50，1.00 mg/mL，37℃靜置避光培養(yǎng)24 h，用酶標(biāo)儀測(cè)其OD578值，以吸光度的變化得出茶葉提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果。

取適量制備好的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液，用液體LB培養(yǎng)基稀釋至OD578為0.02，置于96孔板中，每孔加入菌液200 μL，分別用氨芐青霉素處理，終質(zhì)量濃度為0，10，15，20，25，30，35，40 μg/mL，每個(gè)處理做3個(gè)平行，于37℃下靜置避光培養(yǎng)24 h，用酶標(biāo)儀測(cè)其OD578值，以吸光度的變化得出氨芐青霉素對(duì)金黃色葡萄球菌抑制效果。

2　結(jié)果與分析

2.1同發(fā)酵茶對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用

不同發(fā)酵茶對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用見圖1。

圖1　不同發(fā)酵茶對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用

采用不同發(fā)酵茶（紅茶、普洱熟茶、布朗喬木熟茶）的提取物處理，金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)受到不同程度的抑制。當(dāng)茶提取物質(zhì)量濃度低于0.1 mg/mL時(shí)，隨著處理質(zhì)量濃度的增加，對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)起到了一定的促進(jìn)作用；質(zhì)量濃度大于0.1 mg/mL時(shí)，對(duì)金黃色葡萄球菌具有顯著的抑制效果，并且這種抑制效果呈現(xiàn)質(zhì)量濃度依賴關(guān)系。

2.2同非發(fā)酵茶對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用

不同非發(fā)酵茶對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用見圖2。

采用不同非發(fā)酵茶（綠茶，普洱散茶、生茶，茉莉花茶）的提取物處理，金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)受到顯著的抑制。抑制效果呈現(xiàn)出質(zhì)量濃度依賴效應(yīng)，當(dāng)茶提取物質(zhì)量濃度大于0.05 mg/mL時(shí)，隨著茶提取質(zhì)量濃度的增大，抑制效果增強(qiáng)；并且，相比之前茉莉花茶對(duì)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑制效果。

2.3照試驗(yàn)

圖2　不同非發(fā)酵茶對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用

氨芐青霉素對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用見圖3。

圖3　氨芐青霉素對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用

用氨芐青霉素處理金黃色葡萄球菌作為陽性對(duì)照。不同質(zhì)量濃度的氨芐青霉素處理金黃色葡萄球菌，其生長(zhǎng)受到顯著的抑制效果；當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到20 μg/mL時(shí)，金黃色葡萄球菌基本上不再生長(zhǎng)。

3　結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，高質(zhì)量濃度的發(fā)酵茶（＞0.1 mg/mL）和非發(fā)酵茶（＞0.05 mg/mL）雖然對(duì)金黃色葡萄球菌都有顯著的抑制效果，但是低質(zhì)量濃度條件的發(fā)酵茶卻促進(jìn)微生物生長(zhǎng)，這可能是由于在茶的發(fā)酵過程中產(chǎn)生了一些適合微生物生長(zhǎng)發(fā)酵的物質(zhì)；而未經(jīng)過發(fā)酵的茶中多酚類物質(zhì)更為豐富，因此表現(xiàn)出較好的抑菌效果。

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The Inhibitory Effect of Different Tea Extracts on the Growth of Staphalococcus aureus

SHEN Qingshan，ZHANG Ting，HU Lanlan，*HU Liangbin
（Department of Food Science，He'nan Institute of Science and Technology，Xinxiang，He'nan 453003，China）

Abstract：The inhibitory effect of different tea extracts on Staphalococcus aureus is researched in this study.It is found that the growth of Staphalococcus aureus is inhibited in the 96-well plates with the treatment of different concentration tea extracts and the ampicillin as the positive control.The results suggest that the growth of Staphalococcus aureus is inhibited by the tea extracts.And this inhibitory effect of fermented and unfermented tea extracts is more significant with the treatment concentrations more than at 0.1 mg/mL and 0.05 mg/mL while the positive control can completely inhibit Staphalococcus aureus at 30 μg/mL.

Key words：tea extract；Staphalococcus aureus；inhibition

中圖分類號(hào)：TS201.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.02.041

文章編號(hào)：1671-9646（2016）02b-0046-03

收稿日期：2015-10-31

作者簡(jiǎn)介：沈青山（1989—），男，碩士，研究方向?yàn)槭吃葱晕⑸锎x與污染控制。*通訊作者：胡梁斌（1979—），男，博士，副教授，研究方向?yàn)槭吃葱圆≡锟刂啤?/p>