米合熱古力·司馬義，胡　昕，王　晶，楊曉萍，李　魯，王　菲，齊曼古力·吾守爾(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸科，老年病科，健康體檢中心，檢驗(yàn)中心，烏魯木齊　800;昌吉分院，新疆　昌吉　800)

?

解整合素-金屬蛋白酶33基因F1、L1、T1位點(diǎn)多態(tài)性與維吾爾族成人哮喘的相關(guān)性研究

米合熱古力·司馬義1，胡昕1，王晶2，楊曉萍3，李魯4，王菲5，齊曼古力·吾守爾5
(新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院1呼吸科，2老年病科，3健康體檢中心，4檢驗(yàn)中心，烏魯木齊830054;5昌吉分院，新疆昌吉831100)

摘要:目的探討解整合素-金屬蛋白酶33基因(ADAM33)F1、L1、T1位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與新疆維吾爾族成人支氣管哮喘的相關(guān)性。方法采用限制性片段長度多態(tài)性方法分析206例維吾爾族成人支氣管哮喘患者(哮喘組)與140例維吾爾族成人健康體檢者(對照組)ADAM33基因F1、L1、T1位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性，并對其中部分進(jìn)行基因檢測驗(yàn)證。結(jié)果兩組ADAM33基因T1位點(diǎn)3種基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10．472，P=0．005)，等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11．192，P=0．001，OR=1．883，95%CI=1．296～2．737)。與AA基book=258,ebook=8因型比較，G等位基因的攜帶者(AG、AG+GG)基因型均能明顯增加哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)(P分別為0．003、0．009，OR分別為3．889、1．815，95%CI分別1．523～9．928、1．156～2．850)。結(jié)論ADAM33基因T1位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與新疆維吾爾族成人支氣管哮喘具有明顯相關(guān)性。

關(guān)鍵詞:解整合素-金屬蛋白酶33基因;支氣管哮喘;單核苷酸多態(tài)性

近年來，支氣管哮喘(簡稱哮喘)發(fā)病率和急性加重率明顯增加，環(huán)境因素和遺傳基因是發(fā)病的主要原因，通過氧化應(yīng)激和損傷、炎癥通路和異常免疫反應(yīng)、增強(qiáng)過敏原的敏感性和氣道重塑機(jī)制誘發(fā)和加重哮喘［1］。其中，去整合素-金屬蛋白酶33基因(ADAM33，a disintegrin and metalloproteinase 33)基因的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)成為研究熱門，其在不同種族、民族的人群中與哮喘及其相關(guān)表型的關(guān)系不盡相同。本研究采用病例-對照的研究方法，探討ADAM33基因F1、L1、T1位點(diǎn)與維吾爾族哮喘的關(guān)系，為哮喘個(gè)體化治療和預(yù)后提供線索。

1　資料與方法

1．1研究對象選擇2012年4月－2013年4月經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸科明確診斷哮喘的維吾爾族患者206例(哮喘組)。選擇新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院健康體檢中心的維吾爾族的健康體檢者140例為對照組。根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會哮喘學(xué)組2008年制定的支氣管哮喘防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］明確診斷為哮喘。所有研究對象均為長期居住在新疆3代或3代以上。哮喘組:男性81例，女性125例，平均年齡(42．89±14．03)歲;對照組:男性55例，女性85例，平均年齡(40．22±14．56)歲。兩組年齡、性別差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。該研究已通過新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會審核，且所有受試對象均取得知情同意。

1．2主要實(shí)驗(yàn)儀器PCR反應(yīng)擴(kuò)增儀(美國，Mycycler)，凝膠成像系統(tǒng)(美國，Gel-Doc 2000)。

1．3方法

1．3．1全血基因組DNA提取提取－80℃冰箱中冷凍儲存的外周靜脈血2 mL，用全血基因組DNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司)提取基因組DNA。

1．3．2PCR擴(kuò)增(1)PCR反應(yīng)體系:總體系20μL，包括基因組DNA 2μL、PCR Mix 10μL、上下游引物(10μmoL/L)各0．5μL、去離子水7μL(上下游引物和Tap酶見表1);(2)PCR反應(yīng)條件:預(yù)變性95℃5min，變性95℃30s，退火68℃45s，延伸72℃60s，20個(gè)循環(huán)，每循環(huán)退火溫度降低0．5℃，變性95℃30s，退火58℃30s，延伸72℃40s，20個(gè)循環(huán)，修復(fù)延伸72℃6 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖見圖1。

表1　ADAM 33基因PCR引物序列與擴(kuò)增參數(shù)

圖1　PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳圖

1．3．3 SNP-RFLP檢測步驟(1)酶切體系:PCR反應(yīng)體系10μL，酶(10Μ/μL)0．1μL，去離子水3．4μL，10×Bμffer R 1．5μL，37℃溫箱中過夜;(2)酶切產(chǎn)物滴入濃度為3%瓊脂糖凝膠梳孔中，放入電泳槽中電泳，時(shí)間為30min，在紫外線下觀察結(jié)果并保存分析。(3)DNA序列測定:部分送往上海生工生物工程有限公司行DNA序列測定。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS16．0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩樣本計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多樣本計(jì)量資料比較采用F檢驗(yàn)，組間基因型和等位基因頻率的比較采用χ2檢驗(yàn)，不同基因型和等位基因?qū)ο南鄬ξｋU(xiǎn)度用單變量Logistic回歸分析。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2．1 ADAM 33基因各位點(diǎn)的Hardy-W einberg(HW)遺傳平衡定律的檢驗(yàn)按照Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，T1位點(diǎn)為P＞0．05，結(jié)果表明兩組研究樣本的群體代表性好，符合H-W遺傳平衡定律，T1位點(diǎn)PCR產(chǎn)物酶切片段電泳圖，見圖2;F1、L1位點(diǎn)P＜0．05，不符合H-W遺傳平衡定律(圖3、4)，故不予以討論(表2)。

圖2　T1位點(diǎn)PCR產(chǎn)物酶切片段電泳圖

圖3　F1位點(diǎn)PCR產(chǎn)物酶切片段電泳圖

圖4　L1位點(diǎn)PCR產(chǎn)物酶切片段電泳圖

2．2 ADAM 33基因各位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率哮喘組和對照組中ADAM33基因T1位點(diǎn)3種基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10．472，P=0．005)。ADAM33基因T1位點(diǎn)等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11．192，P=0．001，OR= 1．883，95%CI=1．296～2．737)(表3)。

經(jīng)過單變量的Logistic回歸分析結(jié)果表明，與AA基因型比較，G等位基因的攜帶者(AG、AG+ GG)基因型均能明顯增加哮喘發(fā)生的危險(xiǎn)(P分別為0．003、0．009，OR分別為3．889、1．815，95%CI分別1．523～9．928、1．156～2．850)(表4)。

表2　哮喘組和對照組中ADAM 33基因SNP位點(diǎn)的Hardy-Weinberg遺傳平衡檢測

表3　兩組ADAM 33基因T1位點(diǎn)基因型與等位基因頻率分布比較/例(%)

表4　T1位點(diǎn)不同基因型與發(fā)生哮喘的相關(guān)性/例

3　討論

哮喘是臨床上最常見的慢性氣道疾病之一，而全球哮喘患者的控制率仍低于GINA指南的要求［3］，已經(jīng)成為一個(gè)值得關(guān)注的公共衛(wèi)生問題。以往研究結(jié)果顯示:ADAM33基因目前已經(jīng)確定為哮喘的易感基因，但是該已經(jīng)在不同地域、不同人群中表達(dá)不同，與哮喘的關(guān)聯(lián)性結(jié)果不盡相同［4－5］。維吾爾族是一個(gè)較少與外界通婚的民族，其遺傳背景相對穩(wěn)定。

本研究顯示:維吾爾族人群ADAM33基因F1、L1位點(diǎn)的不符合H-W遺傳平衡定律，群體代表性欠佳，因此未予以討論，有待于進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量再做進(jìn)一步的闡述和探討。ADAM33基因T1位點(diǎn)3種基因型分布頻率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與漢族、高加索人群有所不同，可推斷其基因多態(tài)分布具有民族特異性。等位基因T1(G)位點(diǎn)增加哮喘的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。本研究與Hirota等［6］、邱玉明等［7］研究結(jié)果較為一致。熊俊艷等［8］在研究廣州市哮喘兒童時(shí)發(fā)現(xiàn)ADAM33基因T1位點(diǎn)多態(tài)性與其發(fā)病無明顯相關(guān);余宏川等［9］研究顯示陜西關(guān)中地區(qū)漢族兒童哮喘與ADAM33基因T1位點(diǎn)多態(tài)性不相關(guān)，也不影響血漿IgE水平，與本研究結(jié)果不一致。

本研究初步探討了維吾爾族人群哮喘與ADAM33基因T1位點(diǎn)多態(tài)性的關(guān)聯(lián)性，ADAM33基因的功能、蛋白等方面有待進(jìn)一步研究，深入探討該基因在哮喘發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)制，可為哮喘個(gè)體化治療提供一定的依據(jù)，更好地防治哮喘。

參考文獻(xiàn):

［1］Nishimura KK，Galanter JM，Roth LA，et al．Early-life air pollution and asthma risk in minority children．The GALA II and SAGE II studies［J］．Am JRespir Crit Care Med，2013，188(3):309-318．

［2］中華醫(yī)學(xué)會呼吸病分會哮喘學(xué)組．支氣管哮喘的定義、診斷、治療和管理方案［J］．中華結(jié)核和呼吸雜志，2008，31(3): 177-185．

［3］蘇楠，林江濤，劉國棟，等．我國八省市支氣管哮喘患者對疾病管理與認(rèn)知現(xiàn)狀調(diào)查［J］．中華內(nèi)科雜志，2015，54(8): 680-683．

［4］Primakoff P，Myles DG．The ADAM gene family:surface proteins with adhesion and protease activity［J］．Trends Genet，2000，16 (2):83-87．

［5］Tripathi P，Awasthi S，Prasad R，et al．Association of ADAM33 gene polymorphisms with adult-onset asthma and its severity in an Indian adult population［J］．JGenet，2011，90(2):265-273．

［6］Hirota T，Hasegawa K，Obara K，et al．Association between ADAM33 polymorphisms and adult asthma in the Japanese population ［J］．Clin ExpAllergy，2006，36(7):884-891．

［7］邱玉明，羅雅玲，賴文巖，等．ADAM33基因Met764Thr位點(diǎn)多態(tài)性與支氣管哮喘發(fā)病及患者肺功能的相關(guān)性［J］．中華結(jié)核和呼吸雜志，2007，30(7):518-521．

［8］熊俊艷，何啟強(qiáng)，蔣卓勤，等．ADAM33基因T1位點(diǎn)多態(tài)性與支氣管哮喘發(fā)病的相關(guān)性［J］．實(shí)用臨床兒科雜志，2009，24 (16):1241-1243．

［9］余宏川，陳強(qiáng)國，李延琪，等．解整合素-金屬蛋白酶33基因T1位點(diǎn)多態(tài)性與哮喘相關(guān)性研究［J］．臨床兒科雜志，2011，29 (9):852-855．

(本文編輯楊晨晨)

Correlation study on polymorphism in ADAM 33 gene and bronchial asthma in adults in Xinjiang Uyghur population

M ihereguli SimayiI1，HU Xin1，WANG Jing2，YANG Xiaoping3，LI Lu4，WANG Fei5，QimanguliW ushouer5
(1Department of Respiration，2Department of Geratology，3Physical Examination Center，4Medical Laboratories，The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，
Urumqi830054，China;5Changji Branch，The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Changji831100，China)

Abstract:Objective To investigate the correlation of the F1，L1，T1 locus in ADAM33 gene polymorphism with bronchial asthma of Uyghur adults in Xinjiang．M ethods PCR-RFLP was used to determine polymorphism of F1，L1，T1 locus in ADAM33 gene in 206 Uygur patientswith bronchial asthma(asthma group)and 140 Uygur healthy individuals(control group)，in which a part of the samples were detected for genetic verification．Results The comparison of three genotypes of the T1 in ADAM33 had statistical significance in asthma group and control group (χ2=10．472，P=0．005)．Allelic frequencies had statistical significance．Compared with“AA”，G allele carriers (both AG and AG+GG)could elevate the risk of asthma occurs(P=0．003，0．009;OR=3．889，1．815，95%CI =1．523－9．928，1．156－2．850)．Conclusion The polymorphism of the T1 locus in ADAM33 gene possessed significant correlation with Uygur population in Xinjiang．

Keywords:ADAM33gene;bronchial asthma;single nucleotide polymorphism

［收稿日期:2015-12-06］

通信作者:齊曼古力·吾守爾，女(維吾爾族)，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向:支氣管哮喘的臨床應(yīng)用與基礎(chǔ)研究，E-mail:qimenw@hotmail．com。

作者簡介:米合熱古力·司馬義(1967－)，女(維吾爾族)，本科，副主任醫(yī)師，研究方向:支氣管哮喘的臨床應(yīng)用。

基金項(xiàng)目:國家自然科學(xué)基金(81160004，81100026)

doi:10．3969/j．issn．1009-5551．2016．03．001

中圖分類號:R562．2+5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

文章編號:1009-5551(2016)03-0257-04