汶醫(yī)寧，史凡凡，羅文平，李 瑞，王永剛（.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心病科，陜西 咸陽(yáng) 7000；.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 7000）

?

參芪通脈顆粒對(duì)慢性充血性心力衰竭模型大鼠血漿BNP、ET水平影響

汶醫(yī)寧1，史凡凡1，羅文平1，李 瑞1，王永剛2
（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院心病科，陜西 咸陽(yáng) 712000；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712000）

［摘 要］目的：觀察參芪通脈顆粒對(duì)慢性充血性心力衰竭模型大鼠血漿腦鈉肽 （BNP）、內(nèi)皮素（ET）以及心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響。方法：用腹腔注射阿霉素（ADR）法復(fù)制慢性充血性心力衰竭（CHF）大鼠模型，采用組織切片、HE染色、光鏡觀察心肌組織病理變化；采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血漿BNP和ET含量。結(jié)果：參芪通脈顆粒組心肌細(xì)胞水腫、肥厚較模型組明顯減輕，心肌細(xì)胞橫（縱）紋存在；與模型組比較，卡托普利組、參芪通脈顆粒小劑量組、參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平明顯降低（P＜0．01或P＜0．05）；與卡托普利組比較，參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平無(wú)顯著性差異（P＞0．05）。結(jié)論：參芪通脈顆粒能抑制CHF大鼠的神經(jīng)內(nèi)分泌激活，降低CHF大鼠血漿BNP和ET水平，減少心肌纖維化，修復(fù)已損傷的心肌細(xì)胞，從而改善心功能，保護(hù)衰竭的心臟。

［關(guān)鍵詞］參芪通脈顆粒；腦鈉肽（BNP）；內(nèi)皮素（ET）；實(shí)驗(yàn)研究

2　結(jié) 果

心肌組織病理學(xué)檢查：光鏡下正常組未見明顯的組織學(xué)改變，心肌纖維排列整齊，橫紋清晰，細(xì)胞之間連接緊密，細(xì)胞核無(wú)明顯異型性。但心衰模型組可見肥大的心肌細(xì)胞群，細(xì)胞排列紊亂﹑斷裂﹑溶解以及不同程度的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和間質(zhì)水腫病變表現(xiàn)?？ㄍ衅绽M和參芪通脈顆粒組心肌細(xì)胞水腫﹑肥厚較模型組明顯減輕，心肌細(xì)胞橫（縱）紋存在，其中E組優(yōu)于C組，C組優(yōu)于D組，表明參芪通脈顆?？梢孕迯?fù)已損傷的心肌細(xì)胞，保護(hù)衰竭的心臟。

各組大鼠血漿BNP和ET含量測(cè)定見表1。模型組血漿BNP和ET水平明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.01），造模成功；與模型組比較，卡托普利組﹑參芪通脈顆粒小劑量組﹑參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平明顯降低（P＜0.01或P＜0.05）；與卡托普利組比較，參芪通脈顆粒大劑量組血漿BNP和ET水平無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表1　各組大鼠血漿BNP﹑ET含量測(cè)定 （pg/mL，±s）

表1　各組大鼠血漿BNP﹑ET含量測(cè)定 （pg/mL，±s）

注：與A組比較，*P＜0.01；與B組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別　n　BNP　ET A組　10　 554.30±27.61　36.88±4.14 B組　10　 1554.89±327.45*　52.14±6.74*C組　10　 654.76±45.43△△　38.67±5.62△△D組　10　 862.76±67.54△　44.05±7.57△E組　10　 614.82±50.22△△　35.65±6.91△△

3　討 論

CHF是各種病因所致心臟疾病的終末階段，隨著基礎(chǔ)和臨床研究的深入，CHF已不再被認(rèn)為是單純的血流動(dòng)力學(xué)障礙，更重要在于心室重構(gòu)和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子系統(tǒng)的激活，促使CHF持續(xù)發(fā)展。

BNP是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的利鈉多肽，由心室肌合成與分泌，具有強(qiáng)大的利尿﹑利鈉﹑舒張血管﹑抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)和交感神經(jīng)系統(tǒng)的作用［3］。心功能障礙能夠激活利鈉肽系統(tǒng)，導(dǎo)致BNP釋放，其增高的程度與心衰的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［4］。BNP與左心室功能密切相關(guān)，其含量與心室體積和心室舒張末期的壓力呈正比，是臨床評(píng)價(jià)心力衰竭﹑反映心功能級(jí)別的一項(xiàng)重要臨床生化指標(biāo)，對(duì)心力衰竭的診斷和治療具有重要意義［5］。

ET是一種極強(qiáng)的縮血管介質(zhì)，不但直接刺激或激活多種激素和細(xì)胞因子，而且參與心血管疾病的病理生理過(guò)程；臨床和實(shí)驗(yàn)研究顯示它在誘發(fā)和加重心力衰竭的進(jìn)程中起著重要作用［6］。血漿ET水平升高和心肌ET合成與釋放增加對(duì)CHF有重要的致病介質(zhì)作用，并與CHF病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)。人體CHF研究表明，PET水平顯著升高，直接引起病理生理性血管收縮和心臟增生與肥大。

阿霉素大鼠CHF模型與人的心肌病CHF相似，是臨床研究心肌病型心力衰竭較理想的模型，適合研究衰竭心臟心肌超微結(jié)構(gòu)改變﹑神經(jīng)內(nèi)分泌異常及血流動(dòng)力血變化［7］。

參芪通脈顆粒是多年臨床總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)方，由人參﹑黃芪﹑附子﹑丹參等組成，具有益氣溫陽(yáng)﹑活血利水功效。研究表明以人參﹑附子﹑丹參等為代表的益氣﹑溫陽(yáng)﹑活血中藥長(zhǎng)期應(yīng)用均具有明顯抑制神經(jīng)內(nèi)分泌的作用［8］。藥理研究證明人參皂苷對(duì)心血管的作用與強(qiáng)心甙相似，可強(qiáng)心，增強(qiáng)心肌收縮力，增加心輸出量，減少心肌損傷，促進(jìn)心肌細(xì)胞修復(fù)，提高心肌耐缺氧能力，同時(shí)可降低血黏度改善血流動(dòng)力學(xué)［9-10］。人參皂苷還能增加底物水平磷酸化，促進(jìn)三磷酸腺苷磷酸肌酸合成［11］。附子中去甲烏頭堿也有顯著強(qiáng)心作用，同時(shí)還具有增加冠狀動(dòng)脈血流和擴(kuò)張外周血管的作用。黃芪可以使CHF患者的血管緊張素Ⅱ﹑內(nèi)皮素等下降［12］。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明參芪通脈顆粒能抑制CHF大鼠的神經(jīng)內(nèi)分泌激活，降低CHF大鼠血漿BNP和ET水平，減少心肌纖維化，修復(fù)已損傷的心肌細(xì)胞，從而改善心功能，保護(hù)衰竭的心臟。

［參考文獻(xiàn)］

［1］ 何峰．腦鈉肽與心力衰竭的診治［J］．中國(guó)心血管雜志，2006，11（3）：229．

［2］ 范啟霞，陸文云，黃啟福，等．心復(fù)康口服液對(duì)實(shí)驗(yàn)性心衰模型大鼠心肌細(xì)胞自由基代謝和膜通透性的影響［J］．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2000，6 （2）：16-19．

［3］ Hasenfuss G，Herman HP，Pieske B．Dyspnea and norm al systolic function［J］．Herz，2004，29 （6）：602-608．

［4］ Parekh N，Maisel AS．Utility of B-natriuretic peptide in the evaluation of left ventricular diastolic function and diastolic heart failure［J］．CURR OPIN CARDIOL，2009，24（2）：155-160．

［5］ 葛詠梅，張立江．血漿BNP檢測(cè)在慢性心衰診斷與治療中的應(yīng)用［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13 （11）：1572-1573．

［6］ 唐文恒，王友桂．血漿內(nèi)皮素和降鈣素基因相關(guān)肽濃度與心力衰竭的相關(guān)性［J］．山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，31（1）：44-45．

［7］ 郭豫濤，譚毅．充血性心力衰竭的動(dòng)物模型［J］．上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2001，21：122-126．

［8］ 曾垂義，王振濤．溫陽(yáng)、益氣、活血中藥對(duì)心力衰竭大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌的遠(yuǎn)期療效［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（16）：158-159．

［9］ 賀運(yùn)河，陳鏡合，陳世偉，等．參附合香丹注射液治療肺心病急性發(fā)作期合并心力衰竭的臨床研究［J］．中國(guó)中醫(yī)急癥，2004，13（1）：21-22．

［10］ 魏群，周萍，徐軼，等．參附注射液治療心力衰竭伴高粘血癥50例［J］．醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，1999，18 （5）：35．

［11］ 鄭曙云，徐建國(guó)，趙振中．參附注射液對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響［J］．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004，24 （6）：541-544，548．

［12］ 張子彬，CHENG To，張平傳．充血性心力衰竭學(xué)［M］．北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2002：568-569．

藥物與試劑：參芪通脈顆粒（1g干浸膏粉相當(dāng)于13.5g生藥）由陜西省中藥基礎(chǔ)與新藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。使用時(shí)加蒸餾水配制成不同藥物濃度供實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。鹽酸阿霉素（ADR）（西山普德藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20120603）﹑卡托普利（廣東邦民制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0901121），均用蒸餾水稀釋成0.2mg/mL，滅菌后備用。腦鈉肽（BNP）試劑盒由北京尚柏生物制劑公司提供，內(nèi)皮素（ET）試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Wistar大鼠50只，體重250～300g，雌雄各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（陜）2012-003。動(dòng)物按性別分籠飼養(yǎng)于有空調(diào)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室內(nèi)，室溫（22±4）℃，相對(duì)濕度60%～80%。自由飲水和喂標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。

實(shí)驗(yàn)儀器：全自動(dòng)生化分析儀（Olympus AU 600型，日本）；全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（Sysmax XT-1800，日本）；全自動(dòng)血凝分析儀（AMAX-200型，德國(guó)）；MSE-25型高速冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；全自動(dòng)圖像分析系統(tǒng)（德國(guó)Leica公司）；LEICA DmLA顯微鏡（德國(guó)Leica公司）。

實(shí)驗(yàn)方法：參照模型制作［2］，將注射用ADR粉針用滅菌注射用水5mL溶解，9mL/L生理鹽水稀釋配成每lmL生理鹽水含藥0.8mg溶液，第1～3周按3mg/kg劑量給模型組和用藥組大鼠進(jìn)行腹腔注射，第4～6周按2mg/kg劑量進(jìn)行腹腔注射，每周1次；正常對(duì)照組大鼠注射等量的生理鹽水，每周1次。連續(xù)注射給藥6周。

動(dòng)物分組及給藥：動(dòng)物基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為對(duì)照組（A組） ，模型組（B組），卡托普利組（C組），參芪通脈顆粒小劑量組（D組），參芪通脈顆粒大劑量組（E組），每組10只，分籠飼養(yǎng)。C組給予卡托普利6.25mg/kg灌胃；D組和E組分別給予參芪通脈顆粒小劑量0.8g/kg﹑大劑量1.6g/kg灌胃，用藥劑量分別按動(dòng)物體表面積換算。A組給予等量的蒸餾水灌胃，日1次，自由飲食。連續(xù)治療30天。

指標(biāo)檢測(cè)：末次給藥24h后，用頸椎脫臼法處死大鼠，剖胸取出心臟，洗凈后取部分左心室組織，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，組織切片，HE染色，光鏡觀察心肌組織病理變化。取血，分離血漿，采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定BNP和ET含量（參照BALP試劑盒說(shuō)明操作）。

［中圖分類號(hào)］R255.214.161

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］B

［文章編號(hào)］1004-2814（2016）05-0496-03

［基金項(xiàng)目］陜西省教育廳科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)2014JK1190）
充血性心力衰竭（CHF）是各種心血管疾病終末階段，病死率高，存活率低［1］。近年來(lái)，大量的臨床和實(shí)驗(yàn)研究表明中藥治療心衰不僅可以強(qiáng)心﹑利尿﹑擴(kuò)血管以緩解癥狀而治標(biāo)，還可以干預(yù)神經(jīng)內(nèi)分泌過(guò)度激活﹑抑制心室重構(gòu)以治本。參芪通脈顆粒具有益氣溫陽(yáng)﹑活血利水，是臨床治療CHF的經(jīng)驗(yàn)方。本實(shí)驗(yàn)旨在制造CHF動(dòng)物模型，從細(xì)胞因子水平探討參芪通脈顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性CHF大鼠的作用機(jī)制，為臨床CHF的綜合治療提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1材料與方法

［收稿日期］2016-01-20