古金元，呂 林，胡東方，陳同煜，劉思當(dāng)（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 泰安 271018）

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一起豬藍(lán)耳病與局部水腫病混合感染病例的綜合診斷與防治

古金元，呂 林，胡東方，陳同煜，劉思當(dāng)*
（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 泰安 271018）

摘 要：2015年10月山東省聊城市某個體豬場發(fā)生一起以保育豬急性死亡為臨床特征的疫情，病豬皮膚局部水腫、精神沉郁、食欲不振、發(fā)燒、氣喘，普通抗生素治療無效。為明確引起此次疫情的致病病原，并制定針對性的防控措施，我們對該病例進(jìn)行了綜合診斷。根據(jù)臨床癥狀、剖檢病變、組織病理學(xué)變化、病原學(xué)檢測及細(xì)菌分離鑒定結(jié)果，最終確診此次疫情系豬藍(lán)耳病病毒與產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌混合感染所致。通過對健康豬群藥物保健，調(diào)整豬場的豬藍(lán)耳病免疫程序，成功控制了疫情蔓延，減少了經(jīng)濟(jì)損失，同時也為豬藍(lán)耳病與局部水腫病混合感染臨床病例的診斷與防控提供了新的經(jīng)驗(yàn)。

關(guān)鍵詞：豬藍(lán)耳??；水腫；混合感染；診斷；防控

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由動脈炎病毒科動脈炎病毒屬的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種高度接觸傳染性免疫抑制病，以引起母豬繁殖障礙、仔豬和育成豬呼吸道癥狀及高死亡率為主要特征，并且常常繼發(fā)其他病原感染。該病于1987年首次在北美發(fā)現(xiàn)，之后在世界范圍內(nèi)迅速傳播，給養(yǎng)豬業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類傳染病，我國也將其列為二類傳染病。郭保清等（1996） 首次在國內(nèi)疑似PRRSV感染的豬群中分離出PRRSV，從而證明了該病毒在我國的存在。目前，PRRSV也已成為我國重要豬傳染病病原之一。

豬水腫病又名豬胃腸水腫，是由產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的毒素引起斷奶仔豬的一種急性散發(fā)性疾病，以頭部水腫、運(yùn)動失調(diào)、驚厥、麻痹及剖檢時胃壁、腸系膜等水腫為特征，臨床上分為急性型和亞急性型。本病主要見于剛斷奶不久的仔豬，生長快、體況健壯的仔豬最為常見，瘦小仔豬少發(fā)生。一般呈散發(fā)，有時呈地方性流行，常限于某些豬場和某些窩的仔豬。飼料飼喂方法改變，飼料單一，氣候變化，被污染后的水，環(huán)境，用具等均可導(dǎo)致本病的發(fā)生幾率增加和癥狀加重。本病一年四季均可發(fā)生，但多見于春秋季，發(fā)病率一般不高，約為10%～35%，但死亡率可高達(dá)90%以上。

現(xiàn)就一豬藍(lán)耳病與局部水腫病混合感染的臨床病例進(jìn)行的綜合診斷，分析報告如下。

1 材料與方法

1.1 病例背景

山東省聊城市某個體自繁自養(yǎng)豬場存欄母豬40余頭，保育豬約350頭。2015年10月7日發(fā)現(xiàn)7頭40日齡左右的保育豬出現(xiàn)皮膚局部水腫、精神沉郁、食欲不振、氣喘等癥狀，發(fā)病豬體溫升高至40～40.5 ℃且稽留不退；豬場獸醫(yī)對病豬注射了青霉素、黃芪多糖注射液，注射后短時間內(nèi)有效，但病癥很快反復(fù)，治療效果差。3 d內(nèi)病情開始蔓延，并且陸續(xù)出現(xiàn)豬只死亡現(xiàn)象；7 d內(nèi)保育舍發(fā)病率達(dá)11.14%（39/350），死亡率28.21%（11/39），10月15日上午將病死豬送檢。

表1 PCR/RT-PCR引物序列

1.2 送檢病死豬的臨床檢查

對送檢病死豬進(jìn)行臨床檢查發(fā)現(xiàn)，病死豬主要表現(xiàn)為兩前肢、陰囊鞘及面部水腫明顯。

1.3 樣品采集

剖殺送檢病豬，對組織器官進(jìn)行病理學(xué)檢查，同時采集組織器官病料（腦、脾臟、肝臟、肺臟、腎臟、淋巴結(jié)及扁桃體），一份用液氮保存進(jìn)行分子生物學(xué)檢查，另一份用10%福爾馬林溶液固定，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，同時無菌采取組織水腫液進(jìn)行細(xì)菌分離。

1.4 實(shí)驗(yàn)室檢查

1.4.1 組織病理學(xué)檢查

將采集的組織病料經(jīng)10%中性福爾馬林固定后制作常規(guī)石蠟切片，經(jīng)蘇木素-伊紅（HE）染色后光鏡觀察。

1.4.2 病原學(xué)檢查

將凍存于液氮中的組織病料解凍后取適量加入滅菌PBS并研磨成勻漿，

10 000 r/min離心5 min后取上清，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/ RNA kit（批號：J10204）提取病毒核酸。根據(jù)Genbank公布的序列分別設(shè)計豬瘟病毒（CSFV）、豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）、偽狂犬病病毒（PRV）及豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）的特異性引物（見表1，經(jīng)驗(yàn)證均具有較好的特異性和擴(kuò)增效率），用PCR/RT-PCR方法擴(kuò)增后，將擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，紫外凝膠成像儀下根據(jù)條帶位置判定病豬的病原感染狀況。

1.4.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)

無菌取病豬的組織水腫液劃線接種于麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，觀察菌落在培養(yǎng)基中的生長情況，然后挑取典型菌落再劃線麥康凱瓊脂培養(yǎng)基做進(jìn)一步純化培養(yǎng)，純化的可疑菌落接種于三糖鐵斜面培養(yǎng)基中后置于37 ℃培養(yǎng)24 h，同時挑取典型菌落進(jìn)行革蘭氏染色。為進(jìn)一步驗(yàn)證，對純化好的可疑菌落按照青島海博生物技術(shù)公司提供的生化鑒定試劑盒（批號：HB4107）做以下生化實(shí)驗(yàn)：葡萄糖、硫化氫、尿素酶、衛(wèi)矛醇、甘露醇、枸櫞酸鹽、吲哚、硝酸鹽、甲基紅、氰化鉀（KCN）等。

1.4.4 藥物敏感試驗(yàn)

用滅菌接種環(huán)挑取麥康凱瓊脂平板上的純化菌于另一新鮮麥康凱瓊脂平板，均勻涂布后將藥敏片按照一定間隔貼于該板，置于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果，并根據(jù)抑菌圈直徑（φ）判定細(xì)菌對藥物的敏感程度。判定標(biāo)準(zhǔn)：φ＞25 mm為極度敏感；15 mm＜φ＜25 mm為高度敏感；10 mm＜φ＜15 mm為中度敏感；φ ＜10 mm為低度敏感；無抑菌圈則為耐藥。

2 結(jié)果與分析

2.1 病理剖檢結(jié)果

病豬體表可見兩前肢、面部及陰囊鞘水腫（圖1A）。剖檢病豬發(fā)現(xiàn)，皮下有膠凍樣物質(zhì)附著（圖1B）；并可見彌漫分布的水腫液（圖1C）；下頜淋巴結(jié)及腹股溝淋巴結(jié)出血腫大，被膜粘連（圖1D）；胸腔積液（圖1E）；肺臟與胸壁粘連（圖1F）；肺水腫（圖1G），心外膜有膠凍樣物質(zhì)包裹（圖1H）；胃黏膜出血、潰瘍（圖1I）；顱腔內(nèi)可見漫分布的水腫液（圖1J）。

2.2 病理組織學(xué)檢查結(jié)果

將采集的組織器官病料經(jīng)常規(guī)石蠟切片、HE染色后鏡檢，可見典型的病毒性腦炎病變，大腦血管周圍有大量淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤形成“腦血管袖套現(xiàn)象”（圖2A），神經(jīng)元變性壞死、被膠質(zhì)細(xì)胞吞噬，出現(xiàn)“噬神經(jīng)現(xiàn)象”（圖2B）；皮下因水腫組織疏松（圖2C）；肺泡壁毛細(xì)血管充血（圖2D）；淋巴結(jié)出現(xiàn)壞死性淋巴結(jié)炎病變（圖2E），表現(xiàn)淋巴細(xì)胞崩解壞死，胞核濃縮深染、崩解破碎、溶解消失；肺水腫，小葉間隙增寬（圖2F）；肝細(xì)胞變性、壞死（圖2G）；胃黏膜上皮細(xì)胞壞死、脫落（圖2H）。

圖1 病豬的剖檢病變

圖2 病豬的組織病理學(xué)變化

2.3 病原學(xué)檢查結(jié)果

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、病理剖檢及組織病理學(xué)檢查，初步懷疑豬藍(lán)耳病病毒感染，對采集的病料進(jìn)行了豬藍(lán)耳病病毒檢測，并對豬瘟病毒、偽狂犬病病毒及豬圓環(huán)病毒2型進(jìn)行了檢測，檢測結(jié)果顯示，送檢的病料樣品中僅檢出了豬藍(lán)耳病病毒，其他病毒未檢出（圖3）。

2.4 細(xì)菌分離培養(yǎng)檢測結(jié)果

2.4.1 細(xì)菌分離檢測結(jié)果

圖3 1.5%瓊脂糖凝膠電泳圖

將無菌采集的病料劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基后于37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后發(fā)現(xiàn)，優(yōu)勢菌落明顯，在平板上可見大小一致，直徑0.1～0.3 mm，邊緣光滑，濕潤，透明，黏稠的紅色圓形菌落。挑取菌落涂片后經(jīng)革蘭氏染色鏡檢后可見兩端鈍圓、無芽孢及莢膜的革蘭氏陰性小桿菌；三糖鐵瓊脂斜面黃色，底層變黃，產(chǎn)氣，不產(chǎn)生H2S。

2.4.2 生化鑒定

根據(jù)分離菌形態(tài)、培養(yǎng)特征和生化鑒定結(jié)果（表2）判定該分離菌為大腸桿菌。

2.4.3 藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果（表3）可知對分離出的該大腸桿菌高度敏感的藥物有慶大霉素、鏈霉素、頭孢拉定。試驗(yàn)結(jié)果判定參照NCCLS藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。

3 防治措施

結(jié)合臨床癥狀、病理剖檢及實(shí)驗(yàn)室檢測判定為豬藍(lán)耳病病毒和產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的混合感染。根據(jù)檢測結(jié)果，協(xié)助豬場實(shí)施以下綜合防控措施。

1）隔離病豬。對保育舍發(fā)病豬只立即進(jìn)行隔離治療，選用對分離出的大腸桿菌高敏的慶大霉素注射治療：每天2次，連用3 d。同時禁止病豬舍飼養(yǎng)人員隨意串舍，進(jìn)出豬舍必須嚴(yán)格消毒。

表2 生化實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果

表3 沙門氏菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果

2）嚴(yán)格消毒。發(fā)病豬舍立即進(jìn)行帶豬消毒，使用碘制劑等對豬刺激小但是效果好的消毒劑噴霧消毒，同時對豬圈及飼喂器具進(jìn)行徹底消毒。

3）調(diào)整日糧中蛋白質(zhì)的比例，應(yīng)用全價料飼養(yǎng)。避免日糧單一或蛋白質(zhì)偏高，要適量供給青綠飼料、礦物質(zhì)和微量元素。

4）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。立即停止豬場豬只的買賣，減少豬群應(yīng)激反應(yīng)，保持豬圈干燥，及時清理糞污，加強(qiáng)通風(fēng)換氣，降低飼養(yǎng)密度。

5）藥物防治。選用對大腸桿菌高敏的慶大霉素拌料治療，連用3～5 d；同時輔以黃芪多糖、維生素C等藥物，以增強(qiáng)病豬機(jī)體的抵抗力。

6）防治因豬藍(lán)耳病感染造成的繼發(fā)感染：針對仔豬氣喘問題，用氟苯尼考、替米考星等藥物拌料治療，連用3～5 d。

通過采取以上防治措施，半月之后回訪得知，發(fā)病豬群除個別發(fā)病嚴(yán)重豬只死亡之外，其余病豬均已逐漸康復(fù)，仔豬氣喘癥狀明顯減輕；新進(jìn)保育舍的仔豬未再出現(xiàn)發(fā)病，生長狀況良好，該個體豬場已經(jīng)基本恢復(fù)正常。

作者簡介：古金元（1989-），男，山東泰安人，在讀碩士研究生，研究方向?yàn)榕R床病理學(xué)。Email：gu1220jinyuan@163.com。

*通訊作者：劉思當(dāng)（1961-），男，山東泰安人，教授，博士生導(dǎo)師，博士。Email：liusid@sdau.edu.cn.

收稿日期：（2016-03-08）