食管胃結(jié)合部癌表皮生長因子-2基因擴增及蛋白表達與臨床病理的關(guān)系

韓鴻彬　王公平　陳　曄　金燦輝

(河南科技大學第一附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，河南　洛陽　471003)

食管胃結(jié)合部癌表皮生長因子-2基因擴增及蛋白表達與臨床病理的關(guān)系

韓鴻彬王公平陳曄金燦輝

(河南科技大學第一附屬醫(yī)院胃腸腫瘤外科，河南洛陽471003)

〔摘要〕目的探討表皮生長因子-2(Her-2)在胃食管結(jié)合部癌中的蛋白表達和基因擴增情況及其與胃食管結(jié)合部癌患者的臨床病理關(guān)系。方法采用免疫組織化學法(IHC)和熒光原位雜交技術(shù)(FISH)檢測80例手術(shù)切除的胃食管結(jié)合部癌組織中HER-2的蛋白表達和基因擴增情況，并分析與胃食管結(jié)合部癌的病理分化程度、浸潤深度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果應(yīng)用FISH技術(shù)檢測顯示在胃食管結(jié)合部癌組織中Her-2的蛋白陽性表達率22.5%，應(yīng)用IHC技術(shù)檢測其在癌組織表達率為15%，Her-2基因擴增和蛋白陽性表達與胃食管結(jié)合部癌的分化程度和臨床TNM分期有關(guān)(P<0.05)，而與年齡、性別和浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。結(jié)論Her-2蛋白過表達和基因擴增是胃食管結(jié)合部癌患者的一個預(yù)后指標，與其發(fā)生發(fā)展有關(guān)，聯(lián)合檢測HER-2蛋白表達水平及基因擴增程度對于胃食管結(jié)合部癌的治療和預(yù)后評估有一定指導意義。

〔關(guān)鍵詞〕胃食管結(jié)合部癌；表皮生長因子-2；免疫組織化學；熒光原位雜交

胃食管結(jié)合部是指食管末段和近側(cè)胃相連接的部位。胃食管結(jié)合部癌是指腫瘤中心位于解剖學上賁門遠近5 cm這段范圍內(nèi)的腺癌〔1，2〕。近年來胃食管結(jié)合部癌發(fā)病率在我國逐年增高，關(guān)于其發(fā)病率及發(fā)病機制的研究尚少。本研究通過檢測胃食管結(jié)合部腺癌組織中的表皮生長因子-2(Her-2)蛋白表達和基因擴增情況探討其臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料收集2009年12月至2012年12月在鄭州大學附屬洛陽市中心醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學確診的胃食管結(jié)合部腺癌組織蠟塊標本80例。所有病例術(shù)前未行化療或放療等抗腫瘤治療。男51例，女29例；年齡41～82歲，中位年齡61歲；分化程度為低分化50例，中-高分化30例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例；按AJCC(2010)病理學分期(pTNM):Ⅰ～Ⅱ期53例，Ⅲ～Ⅳ期27例。

1.2實驗方法

1.2.1免疫組化染色(IHC法)手術(shù)切除標本經(jīng)鄭州大學附屬洛陽中心醫(yī)院病理科用10%甲醛溶液固定。常規(guī)石蠟包埋、存檔。選取需要的蠟塊，使用切片機連續(xù)3～5 μm厚度切片，將組織切片置入56℃溫箱，烘片45 min，供免疫組化染色。運用二步法免疫組織化學檢測，按二步法免疫組化檢測試劑盒說明書進行操作。鼠抗人Her-2單克隆抗體用已知Her-2陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照，用PBS液代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定標準由兩位病理科醫(yī)師雙盲法進行。評分標準:-：無染色或<10%腫瘤細胞有膜染色；+:≥10%腫瘤細胞膜有微弱或勉強可見的膜，或細胞只有部分膜染色；:≥10%腫瘤細胞有弱到中度的完全或基底外側(cè)膜染色；:≥10%腫瘤細胞有中等到強的完全或基地外側(cè)膜染色，-、+為陰性,為可疑陽性、為陽性，IHC判定為Her-2陽性。

1.2.2熒光原位雜交GLP Her-2/CEP17雙色熒光探針及雜交緩沖液，購自北京金菩嘉公司。切片65℃烘烤過夜，甲醛固定液固定10 min,梯度乙醇脫水。①切片置于78℃甲酰胺變性液中變性15 min,依次置于-20℃預(yù)冷的70%、85%、100%乙醇脫水；②用16 μl GLP Her-2/CEP17探針和4 μl雜交緩沖液混勻制成探針混合液，78℃變性5 min后，45℃水浴箱中備用。切片自然干燥，加探針，置濕盒42℃恒溫箱雜交過夜，0.3%NP40和0.1%NP40分別洗滌后，DAPI復染，熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。Her-2評判標準：高倍油鏡下計數(shù)20個腫瘤細胞，紅色信號為Ratio>2.2判定為陽性。上述結(jié)果均由兩名病理醫(yī)師依據(jù)以上標準進行雙盲法判定。

1.3統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1IHC法檢測Her-2蛋白表達情況IHC法檢測80例胃食管結(jié)合部癌組織標本中，20例Her-2表達-，44例表達+，4例表達，12例表達，HER-2蛋白表達陽性率為15%。見圖1。

圖1　胃食管結(jié)合部癌組織Her-2蛋白表達(IHC法，×400)

2.2FISH法檢測Her-2的擴增情況FISH法檢測80例胃食管結(jié)合部癌標本，62例無基因擴增，18例呈點狀或簇狀擴增，與IHC對應(yīng)表達的12例相對應(yīng)的FISH檢測均Her-2基因擴增，陽性率為22.5%。

圖2　胃食管結(jié)合部癌組織Her-2擴增檢測(FISH法,×1 000)

2.4Her-2的表達與胃食管結(jié)合部癌的臨床病理體征的關(guān)系Her-2蛋白表達與患者的性別、年齡、浸潤深度、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P<0.05)，而與腫瘤分化程度及臨床分期明顯相關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1　Her-2的蛋白表達與胃食管結(jié)合部癌臨床

3討論

Her-2定位于人17號染色體，屬于表皮生長因子受體家族成員，毗鄰于拓撲異構(gòu)酶Ⅱa基因旁，Her-2調(diào)節(jié)基因?qū)Ω鞣N蛋白的表達來影響細胞分化、增殖和生存，從而可以促進腫瘤生長并誘導其惡性轉(zhuǎn)變〔3〕。在一些胃癌的研究中已顯示HER-2在胃腺癌中有過表達，并且與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)〔4〕。其高表達與胃癌的預(yù)后和侵襲有關(guān)。在乳腺癌研究中已經(jīng)證實有15%～25%的病例發(fā)生Her-2基因的擴增和Her-2蛋白的過表達，這類患者往往是腫瘤惡性程度高、進展迅速的病例，且化療緩解期短，對標準化療和內(nèi)分泌治療易產(chǎn)生耐藥，患者的無病生存和總生存期縮短，針對Her-2的抗腫瘤靶向治療藥物,批準用于胃癌臨床的有Her-2抑制劑郝賽汀，主要針對胃癌組織Her-2高表達的患者，并在臨床治療應(yīng)用中取得了一定的療效〔5,6〕。

目前世界許多國家和地區(qū)均出現(xiàn)胃遠端腫瘤發(fā)病率降低，而近端胃癌特別是胃食管結(jié)合部腺癌的發(fā)病率卻呈上升的趨勢，而且近年來的研究表明胃食管癌結(jié)合部腺癌的預(yù)后較單純食管癌和胃癌都差，示兩者生物學行為存在顯著差異〔7,8〕。Tanner等〔9〕認為在解剖學上賁門遠近5 cm這段范圍內(nèi)的胃癌發(fā)生率要遠高于胃部的胃癌，兩者Her-2的陽性表達率為24%vs12%，有顯著差異性。但在國內(nèi)也有研究表明：Her-2的陽性表達率和腫瘤的發(fā)生部位無關(guān)〔10〕。另有文獻報道Her-2蛋白在食管癌組織中的表達與分化程度相關(guān)，而與性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、浸潤深度和臨床分期等臨床指標之間，均未見明顯相關(guān)性〔11〕。

本研究結(jié)果表明IHC法檢測Her-2在癌旁組織中無表達，而在胃食管結(jié)合部癌組織中過表達陽性率為15%，采用FISH檢驗的HER-2蛋白表達陽性率為22.5%，這與國內(nèi)和一些國外研究結(jié)果基本一致〔12〕。本文通過用FISH檢測法和IHC法檢測Her-2基因擴增情況結(jié)果顯示，胃食管結(jié)合部癌IHC檢測為的病例完全不需再行FISH檢測即可判定為陽性病例，IHC檢測-和+的病例無需再行FISH檢測可判定為陰性病例，IHC的病例歸為可疑類型，需再行FISH檢測。此外本結(jié)果研究還顯示：Her-2蛋白表達與食管胃結(jié)合部腺癌的發(fā)生有密切關(guān)系，說明Her-2參與了食管胃結(jié)合部腺癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等行為〔13〕。

綜上所述，Her-2蛋白過表達及基因擴增可能有助于胃食管結(jié)合部癌惡性程度的判斷和預(yù)后情況的初步評估，隨著對胃食管結(jié)合部癌疾病的發(fā)生、發(fā)展的深入研究，Her-2在胃食管結(jié)合部癌的作用機制、蛋白表達和基因擴增狀況會進一步明確，這將為胃食管結(jié)合部癌的個體化治療提供更多的理論基礎(chǔ)和臨床依據(jù)。

4參考文獻

1Siewert JR,Feith M.Adenocarcinoma of the esophagogastric junction:competition between Barrett and gastric cancer〔J〕.J Am Coll Surg,2007;205(4):49-53.

2Langer R,Von Rahden BH,Nahrig J,etal.Prognostic significance of expression patterns of c-erbB-2,p53,p16INK4A,p27KIP1,cyclin D1 and epidermal growth factor receptor in esophageal adenocarcinoma:a tissue microarray study〔J〕.J Clin Pathol,2006;59(6):631-4.

3Moelans CB,van Diest PJ,Milne AN,etal.Her-2/neu testing and therpay in gastroesophageal adenocarcinoma〔J〕.Patholog Res Int,2010;2011(5):674182-5.

4劉俊林，李振凱，信芳杰，等.胃癌HER-2蛋白表達及基因擴增分析〔J〕.中華胃腸外科雜志，2013;16(9):898-901.

5Brand FX,Ravanel N,Gauchez AS,etal.Prospect for anti-her2 receptor therapy in breast cancer〔J〕.Anticancer Res,2006;26(1):715-22.

6張連海，季加孚.對胃癌預(yù)后判斷的分子標志物以及治療靶點的研究〔J〕.中華胃腸外科雜志，2013;16(2):193-6.

7Bang YJ，Van Cutsem E，F(xiàn)eyereislova A，etal.Trastuzumab in combination with chemotherapy versus chemotherapyalone for treatment of HER2-positive advanced gastric or gastro-oesophageal junction cancer(TOGA)：a phase 3，open-label，randomised controlled trial〔J〕.Lancet,2010;8(28):687-97.

8Saito H,Fukumoto Y,Osaki T,etal.Distinct recurrence pattern and outcome of adenocarcinoma of the gastric cardia in comparison with carcinoma of other regions of the stomach〔J〕.World J Surg,2006;30(10):1864-9.

9Tanner M,Hollmén M,Junttila TT,etal.Amplification of HER-2 in gastric carcinoma:association with Topoisomerase llalpha gene amplification,intestinal type,poor prognosis and sensitivity to trastuzumab〔J〕.Ann Oncol,2005;16(2):273-8.

10劉澤鋒，徐越超，盧晉，等.曲妥珠單抗治療人表皮生長因子受體-2高表達胃癌的研究進展〔J〕.中國老年學雜志，2013;33(2):723-5.

11吳健誼,石宏順,吳智勇,等.HER2表達與食管癌患者生存期的關(guān)系〔J〕.癌變·畸變·突變，2010;22(2):86-90.

12Lagarde SM,Ten FJ,Richel DJ,etal.Molecular prognostic factors in adenocarinoma of the esophagus and gastroesophageal junction〔J〕.Ann Surg Oncol，2007;14(2):977-91.

13張錫，薛英威.胃癌Her-2的表達與靶向治療〔J〕.實用腫瘤學雜志，2014;28(2):177-80.

〔2015-01-10修回〕

(編輯苑云杰/曹夢園)

〔中圖分類號〕R735.2

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2678-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.050

第一作者：韓鴻彬(1970-)，男，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事胃腸道腫瘤的臨床及基礎(chǔ)研究。