馬慧麗石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司

長效DPP-4抑制劑奧格列汀含量及有關(guān)物質(zhì)的測定

馬慧麗
石藥集團中諾藥業(yè)（石家莊）有限公司

采用HPLC法測定了奧格列汀原料藥含量和有關(guān)物質(zhì)。色譜條件如下：色譜柱：Apo11o Cl8，檢測波長為263nm。結(jié)果表明：奧格列汀在0.5～3.5 μg/m L范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.95%，RSD為0.10%。此法操作簡便、準(zhǔn)確，可用于測定奧格列汀原料藥含量和有關(guān)物質(zhì)。

HPLC；奧格列??；有關(guān)物質(zhì)；含量

2型糖尿病的治療理念近年來已悄然發(fā)生改變，由過去簡單降血糖正逐漸演變?yōu)閷μ悄虿〖捌洳l(fā)癥的綜合治療。口服DPP-4抑制劑因其強效降糖、保護胰島功能、安全性良好等優(yōu)勢備受關(guān)注［1］。第一個上市的DPP-4抑制劑為西格列汀，目前銷售規(guī)模已達40億美元。然而，最近發(fā)展起來的長效口服DPP-4抑制劑，由于每周僅需給藥1次而提高了患者的便利性和依從性，其臨床價值和臨床地位或?qū)⒂型嵘?。迄今為止，已有兩個長效口服DPP-4抑制劑應(yīng)用于臨床，分別是于2015年3月26日和2015年9 月28日獲日本醫(yī)藥品與醫(yī)療器械綜管理局批準(zhǔn)的武田公司的琥珀酸曲格列汀和默克公司的奧格列?。?］。目前國內(nèi)關(guān)于奧格列汀的分析檢測方法尚未見報道，本文建立了該藥物原料藥的HPLC測定方法，該法靈敏、準(zhǔn)確、專屬性及重復(fù)性好，可用于奧格列汀的含量測定及有關(guān)物質(zhì)限量檢查。

1　實驗

1.1試劑與儀器

奧格列汀標(biāo)準(zhǔn)品，進口；奧格列汀原料藥樣品，自制；乙腈，色譜純；水為自制蒸餾水；其它試劑均為分析純。

日本島津1C一10AT高效液相色譜儀；德國賽多利斯CP-224S型電子分析天平。

1.2方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：Apo11o Cl8，5μm，250mm X 4.6mm；流動相：甲醇一0.03mol/l的磷酸二氫鉀溶液（7：3）；檢測波長為263nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL；理論板數(shù)按奧格列汀計算應(yīng)不低于2000；奧格列汀峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1.5。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

取奧格列汀標(biāo)準(zhǔn)品約25mg，精密稱定，置25mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。用流動相稀釋10倍作為對照品溶液。

1.2.3供試品溶液的配制

精密稱取奧格列汀原料藥，配制成1 mg/mL的溶液，作為供試品儲備液。用流動相稀釋10倍得到供試品溶液。

2　結(jié)果與討論

2.1系統(tǒng)適應(yīng)性

分別量取空白溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液，按1.2.1色譜條件進樣測定。結(jié)果表明，主峰保留時間5.1 min，拖尾因子為1.06，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)按奧格列汀峰計算不低于2000。

2.2專屬性考察

取5 m L奧格列汀標(biāo)準(zhǔn)品儲備液分別加入1 mol/L氫氧化鈉溶液、1 mol/L鹽酸溶液、30%過氧化氫溶液各2 mL和100℃水浴加熱1 h。中和后加流動相至10 m L，分別進樣10 μL，考察降解物的分離性能。經(jīng)酸、堿、高溫、氧化破壞后的降解物與主峰奧格列汀均能達到良好分離，分離度大于1.5，說明所建方法的專屬性強。

2.3線性及最低檢測限

精密量取奧格列汀標(biāo)準(zhǔn)品儲備液適量，加流動相稀釋制成濃度（μg/mL）分別為3.5、3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5系列溶液。各取10 μL進樣測定，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、進樣濃度（x）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得回歸方程y=1106.9x+2.972，R=0.9999，表明在0.5～3.5 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。在選定的色譜條件下，按信噪比（S/N=3），測得其最低檢測限為0.0028%。

2.4精密度

取奧格列汀濃度為1.0 μg/mL的供試品溶液，按1.2.1色譜條件進樣，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，主成分峰面積的RSD為0.6% （n=6），相關(guān)物質(zhì)峰面積的RSD為1.1%（n=6）。

2.5穩(wěn)定性

取“1.2.3”項下供試品溶液，按1.2.1色譜條件分別于0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h進樣10μL，記錄色譜圖，以峰面積計算主峰峰面積的RSD為0.2%（n=6），相關(guān)物質(zhì)峰面積的RSD為0.7%（n=6）。表明供試品溶液在48 h內(nèi)檢測穩(wěn)定性良好。

2.6重復(fù)性

取“2.5”項下的一份供試品溶液，按1.2.1色譜條件連續(xù)進針6次，計算奧格列汀的RSD為0.58%（n=6），表明重復(fù)性良好。

2.7加樣回收率

精密量取“1.2.3”項下供試品溶液9份，每份10 mL，按其濃度的80%、100%、120%分別加入105℃干燥至恒重的奧格列汀對照品各3份，按1.2.1色譜條件進樣10μL。平均加樣回收率為99.95%，RSD為0.10%，說明該方法的準(zhǔn)確度高。

2.8樣品測定

按1.2.1色譜條件測定3批次供試品，量取“1.2.3”項下供試品溶液各10μL進樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算奧格列汀含量分別為99.6%、99.9%、99.8%。

2.9有關(guān)物質(zhì)的測定

按1.2.1色譜條件進樣標(biāo)準(zhǔn)品溶液，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的2O%，再分別量取“1.2.2”項下標(biāo)準(zhǔn)品溶液和“1.2.3”項下供試品溶液各10μL進樣，記錄色譜圖，參照有關(guān)物質(zhì)測定方法測定，3批有關(guān)物質(zhì)含量分別為0.256%、0.269%、0.251%。

3　結(jié)論

建立了HPLC法測定奧格列汀的含量和有關(guān)物質(zhì)。色譜條件如下：色譜柱：Apo11o Cl8，5μm，250mm X 4.6mm；流動相：甲醇一0.03mol/l的磷酸二氫鉀溶液（7：3）；檢測波長為263nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL。該法簡便、精密、專屬、靈敏，可用于奧格列汀原料藥含量測定和有關(guān)物質(zhì)的檢查，可滿足企業(yè)質(zhì)量控制的要求。

［1］周辛波.關(guān)注長效口服降糖藥-DPP4抑制劑，臨床藥物治療雜志，2015年第5期，92頁

［2］全球首個每周一次口服降糖藥獲批，中國食品藥品監(jiān)管，2015年第4期，8頁

馬慧麗（1981-），女，河北省石家莊市人，工程師，主要從事醫(yī)藥研發(fā)、知識產(chǎn)權(quán)方面工作。