馬 駿，張玲茜

（臺州市海洋環(huán)境監(jiān)測中心 浙江臺州 318000）

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液相色譜
—質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測漁用藥物殘留的方法

馬 駿，張玲茜

（臺州市海洋環(huán)境監(jiān)測中心 浙江臺州 318000）

摘 要：液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀是對有機(jī)物分析效果精準(zhǔn)的一款高端儀器，液相色譜能夠?qū)崿F(xiàn)對有機(jī)物成分的分離，而質(zhì)譜能夠?qū)Ψ蛛x后的物質(zhì)進(jìn)行分析，得出精確的有效信息。液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀在經(jīng)濟(jì)領(lǐng)域的應(yīng)用是非常廣泛的，可以應(yīng)用于多種物質(zhì)的檢測，能夠為檢測結(jié)果提供良好的數(shù)據(jù)依據(jù)。在漁業(yè)生產(chǎn)中，采用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測漁用藥物殘留是漁業(yè)生產(chǎn)技術(shù)性升級的標(biāo)志，通過液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的應(yīng)用，漁用藥物殘留的整體情況得到了印證，在具體實施過程中，液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀得到了有效地應(yīng)用，實現(xiàn)了技術(shù)升級對于經(jīng)濟(jì)發(fā)展的促進(jìn)作用，體現(xiàn)了科學(xué)技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)生活的良好效果。

關(guān)鍵詞：液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用儀 漁用藥物殘留 檢測方法

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀是結(jié)合了液相色譜和質(zhì)譜的共同優(yōu)勢，將二者的優(yōu)勢進(jìn)行互補(bǔ)，實現(xiàn)了高精度的鑒別能力。在現(xiàn)代分析技術(shù)中，液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀發(fā)揮了重要的作用。隨著液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的發(fā)展，該項技術(shù)對藥物分析的精確程度越來越高，在經(jīng)濟(jì)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛，已經(jīng)成為藥物分析檢測的核心技術(shù)類型。在漁用藥物殘留檢測中，運(yùn)用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀方法進(jìn)行檢測，是漁用藥物殘留檢測工作的需要，也是液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀應(yīng)用的實踐性體現(xiàn)。采用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測方法，需要在實踐中從多方面考慮，實現(xiàn)檢測方法的正確應(yīng)用，促進(jìn)漁用藥物殘留檢測工作的準(zhǔn)確性。

1 液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀采用的關(guān)鍵技術(shù)

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的主要構(gòu)成是高效液相色譜、接口裝置，也就是離子源，質(zhì)譜儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。液相色譜儀的主要作用就是把混合物的樣品進(jìn)行分離，這個儀器的關(guān)鍵組件是接口裝置，把溶劑進(jìn)行離子化，而接口的裝置就是離子源。質(zhì)譜儀的主要關(guān)鍵部分是質(zhì)量分析器，對離子進(jìn)行質(zhì)量分離，將分離后的離子按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比，同時記錄質(zhì)譜圖像。液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀采用的主要技術(shù)就是二者之間的聯(lián)合應(yīng)用，也就是說采用液相色譜作為分離系統(tǒng)，利用質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)，通過二者的結(jié)合進(jìn)行物質(zhì)的分離與分析。液相色譜技術(shù)與質(zhì)譜技術(shù)的聯(lián)用是兩項技術(shù)的基礎(chǔ)特性決定的，也是分離分析物質(zhì)需求的必然要求。通過樣品在質(zhì)譜分析過程中的流動相分離，被檢測物質(zhì)離子化后，經(jīng)過質(zhì)譜的質(zhì)量分析，將離子的碎片按照質(zhì)量數(shù)進(jìn)行劃分，通過檢測器的應(yīng)用，取得質(zhì)譜圖。

液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)合應(yīng)用是二者優(yōu)勢的彼此補(bǔ)充，能夠?qū)?fù)雜的物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確的分析，具有高選擇性、高精度、高靈敏性。在藥物分析方面，具有天然的優(yōu)勢，應(yīng)用的范圍很廣。

表1 磺胺類藥物的質(zhì)譜參數(shù)

2 漁用藥物殘留檢測采用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的原因

2.1 漁用藥物的類型和特性符合液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的檢測范圍

水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的集約化發(fā)展，一方面帶來了經(jīng)濟(jì)發(fā)展的繁榮，一方面也污染了水環(huán)境。水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，漁業(yè)養(yǎng)殖占據(jù)了主要份額。在漁業(yè)養(yǎng)殖過程中，為了保證水環(huán)境的良好，水中生物的質(zhì)量，就會投放一些漁用藥物。但是，漁用藥物在使用過程中，無法完全分解，就會有大量的藥物殘留在水中，造成魚類產(chǎn)品沾染上藥物殘留，影響水環(huán)境和魚類的整體質(zhì)量。對漁用藥物殘留的檢測工作，是漁業(yè)生產(chǎn)的要求，也是魚類產(chǎn)品高質(zhì)量的需求，更是漁業(yè)進(jìn)出口貿(mào)易的需要。采用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行漁用藥物殘留的檢測，是由于漁業(yè)藥物的類型決定的。漁用藥物的類型繁多，在使用后，能夠在水環(huán)境中殘留的藥物類型主要是喹諾酮類、磺胺類和呋喃類抗生素，或者一些激素類藥物。而液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的優(yōu)勢，就是能夠?qū)@些物質(zhì)進(jìn)行有效地分離分析，從而快速得出藥物殘留的基本情況。液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀在檢測過程中，具有操作的便宜性，也能夠?qū)悠坊蛘邔嶒炦^程進(jìn)行及時的調(diào)整，對于漁用藥物殘留檢測是最恰當(dāng)?shù)姆绞健?/p>

2.2 液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的本質(zhì)特性和檢測效果具有優(yōu)勢

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的本質(zhì)特性決定了對漁用藥物殘留的良好效果，在檢測過程中，利用液相色譜和質(zhì)譜的聯(lián)合技術(shù)，能夠把試樣進(jìn)行完整的分析。液相色譜能夠利用流動相將樣品進(jìn)行分離，而漁用藥物一般性質(zhì)復(fù)雜，在長久的沉淀后，就會發(fā)生性狀的改變，而且還會形成其他類型的新物質(zhì)。利用液相色譜進(jìn)行離子分離，就會把物質(zhì)之間進(jìn)行細(xì)致的分離，不同的因素在檢測過程中表現(xiàn)不同，分離后進(jìn)入質(zhì)譜，在進(jìn)入質(zhì)譜后會除去溶劑或者電離，通過高真空條件進(jìn)行匹配，離子之間就會顯現(xiàn)出本來的物質(zhì)特點。在進(jìn)入質(zhì)量分析器后，利用質(zhì)量分析圖的對比，就能夠很直觀的得到結(jié)論。液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)在漁用藥物檢測中，能夠發(fā)揮有效地作用，能夠在試驗后，得出準(zhǔn)確的結(jié)論，而且結(jié)論與結(jié)論之間的分析和對比以及討論，對于漁用藥物殘留的鑒定情況具有重要意義。液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用實際上就是從藥物檢測的具體細(xì)微處入手，體現(xiàn)出藥品檢驗檢測的高精準(zhǔn)度效果。

3 液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀在檢測漁用藥物殘留過程的主要應(yīng)用方法

3.1 實驗過程的整體控制

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的實驗過程是檢測工作的重點部分，在實驗過程中需要做的工作是細(xì)致而深入的。

圖1 藥物混合后的離子顯示

第一，選擇適宜的儀器與試劑。在儀器選擇上要根據(jù)漁用藥物殘留檢測的相關(guān)分析問題進(jìn)行儀器的具體配置?？梢赃x用質(zhì)譜聯(lián)用儀，高效液相色譜儀，混勻器，旋轉(zhuǎn)濃縮器，具塞離心管，濃縮瓶，濾膜，高純氮，實驗用水，超純水，乙腈，正已烷，稀鹽酸，稀磷酸。在標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置上，需要根據(jù)漁用藥物大致使用的藥物類型進(jìn)行配備，不同的漁用藥物投放類型不同，采用的方法也不同，例如對氟喹諾酮類藥物殘留的檢測，就要配置恩諾沙星，環(huán)丙沙星，諾氟沙星，氧氟沙星的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行配置。在配置溶液是用稀磷酸進(jìn)行配置，掌握好所需濃度，濃度要求要準(zhǔn)確，否則在檢測過程中，容易出現(xiàn)不必要的誤差。

第二，對樣品進(jìn)行相關(guān)處理。樣品的提取過程是檢驗檢測的中心環(huán)節(jié)，選擇要樣品要具有代表性，也要在不同的地點進(jìn)行選擇，才能夠使檢測工作具有全面性。把樣品搗碎放入離心管中，加入一定數(shù)量的鹽酸，在加入乙腈，在混勻器中混勻，在離心管中離心，然后取出上清液倒入濃縮瓶中，在35°氮氣保護(hù)下濃縮至干，把流動相溶液定容在1 ml。樣品提取后需要進(jìn)行凈化，在液體中加入5 ml正已烷，混勻2 min后將液體轉(zhuǎn)入離心管中，重復(fù)加正已烷兩次，每次混勻都要在離心后除去正已烷層，對于下層溶液通過濾膜后進(jìn)行液相色譜分析。第三，選擇液相色譜與質(zhì)譜的檢測條件。具體條件可以分為，色譜柱，柱溫度為20 ℃，流速為0/3L/min，流動相為乙腈—甲酸，進(jìn)樣體積為10 ml，電噴霧方式為ESI正離子，離子源溫度為5 500 ℃，去溶劑的溫度為540 ℃，孔電壓為76V，氣簾氣為25L/min，輔助氣為42L/min。

3.2 結(jié)果的分析與討論

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀在檢測后的分析，對于結(jié)果具有重要意義，對結(jié)果的分析和討論要與實驗過程緊密結(jié)合。

第一，對液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法的流動相選擇。在這個環(huán)節(jié)，需要對流動相中加入四丁基溴化氨，一般在質(zhì)譜檢測中不會使用四丁基溴化氨，可以選擇甲酸—乙腈流動體系。在液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用的條件下，漁用藥物殘留的主要物質(zhì)就要根據(jù)具體涉及的藥物類型進(jìn)行整理。不同的色譜柱對不同的藥物殘留有各自不同的反映，如果要將物質(zhì)進(jìn)行完整分離，就要掌握好液相色譜的色譜柱選擇。在質(zhì)譜中需要選擇離子對檢測結(jié)果進(jìn)行定性和定量，準(zhǔn)備檢測的化合物要做好與不同離子的對應(yīng)，在液相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用檢測中，確定性質(zhì)和數(shù)量。

第二，樣品前的處理條件選擇。對提取劑的選擇要保證符合實驗的要求。在實驗中選擇二氯甲烷，三氯甲烷，乙腈或者乙腈和三氯甲烷的混合液，這幾種提取液可以直觀的發(fā)現(xiàn)檢測結(jié)果的差異。漁用藥物殘留一般在氧化過程中，會變成多種成分的化合物，有的則會變成極性較強(qiáng)的化合物，因此，將乙腈當(dāng)作提取劑就是為了得到最優(yōu)質(zhì)的效果。

第三，掌握好提取酸度的干預(yù)。在酸性條件下，使用乙腈提取的效果是不同的，不同的酸性條件下提取的效率也是不同的。對于濃縮用的提取劑量，可以按照樣品10 g，用20 ml乙腈提取的方法，把提取液用來濃縮，所以提取液的準(zhǔn)確度和數(shù)量越少，得到的色譜分析效果越好，對色譜的干擾就越少。不同數(shù)量的提取液獲得的結(jié)果數(shù)據(jù)具有一定的區(qū)分性，在檢測過程中要根據(jù)藥物的特性進(jìn)行數(shù)量的選擇，這樣就會促進(jìn)檢測結(jié)果與實際漁用藥物殘留狀況的對接。

第四，濃縮方式的選擇。濃縮方式對于結(jié)果的影響是細(xì)致的，直接真空的濃縮和在氮氣保護(hù)下的濃縮對比，直接真空濃縮的回收率小于50%，后者就會大于70%。兩種濃縮提取液是不能完全濃縮干的，不然對測定的物質(zhì)損失很大。液相色譜分析技術(shù)需要借助線性概念，將在配置好的一定濃度的溶液，做熒光檢測測定和液質(zhì)測定，各個組分的峰面積對應(yīng)濃度繪制曲線，線性關(guān)系可以直觀的反映檢測數(shù)據(jù)。

第五，做好精密度的檢測試驗。漁用藥物殘留的檢測也需要進(jìn)行輔助性的測定，例如在樣品中加入輔助的試劑，以確定檢測結(jié)果的精密程度，通過液相色譜的離子對色譜圖對照，能夠明確的了解藥物殘留的整體狀況。液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的檢測結(jié)果具有高精準(zhǔn)度，在檢測漁用藥物殘留上具有實際意義。

4 結(jié)語

藥物檢驗檢測技術(shù)在發(fā)展過程中，需要在實踐中得出結(jié)果和經(jīng)驗，液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀檢驗檢測漁用藥物殘留只是這項技術(shù)實際應(yīng)用的一個縮影。液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測分析技術(shù)是當(dāng)前分離分析技術(shù)的應(yīng)用主體，在經(jīng)濟(jì)建設(shè)領(lǐng)域的多個部門，都會得到更加廣泛的使用。技術(shù)進(jìn)步對于經(jīng)濟(jì)建設(shè)發(fā)展具有決定性作用，技術(shù)進(jìn)步的優(yōu)勢應(yīng)用到經(jīng)濟(jì)發(fā)展領(lǐng)域，就是科學(xué)技術(shù)直接轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力的表現(xiàn)，就是新技術(shù)新方法對于經(jīng)濟(jì)發(fā)展促進(jìn)了有力證明。液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀的應(yīng)用方法，還需要在實踐中得以發(fā)展，以更加簡便快捷的操作，推動各個領(lǐng)域?qū)τ跈z驗檢測工作的實際發(fā)展。

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