王維健， 政 峰

(上海電力醫(yī)院普外科，上海 200050)

?

·臨床研究·

王維健， 政 峰

(上海電力醫(yī)院普外科，上海 200050)

目的 探討血清三葉因子-3(trefoil factor-3， TFF-3)和半乳糖凝集素-3(Galectin-3)在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及在甲狀腺良惡性腫瘤鑒別診斷中的意義。方法 選擇2014年1月至2015年12月在我院就診的甲狀腺乳頭狀癌患者110例，為甲狀腺乳頭狀癌組。選擇同期在我院就診甲狀腺腺瘤患者40例，為甲狀腺腺瘤組。選擇同期在我院行健康體檢者30例，為健康對(duì)照組。用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組TFF-3和Galectin-3水平。觀察甲狀腺乳頭狀癌組，甲狀腺腺瘤組和健康對(duì)照組血清TFF-3和Galectin-3，甲狀腺乳頭狀癌患者血清TFF-3和Galectin-3水平與臨床病理因素的關(guān)系，手術(shù)后機(jī)體TFF-3和Galectin-3水平的變化，及TFF-3和Galectin-3水平相關(guān)性分析。結(jié)果 甲 狀腺乳頭狀癌組血清TFF-3水平明顯低于甲狀腺瘤組和健康對(duì)照組(P<0.01)，甲狀腺瘤組低于健康對(duì)照組(P<0.01)，而甲狀腺乳頭狀癌組的Galectin-3表達(dá)水平明顯高于甲狀腺腺瘤組和健康對(duì)照組(P<0.01)，而甲狀腺腺瘤組明顯高于健康對(duì)照組最低(P<0.01)。甲狀腺乳頭狀癌患者血清TFF-3和Galectin-3水平與腫瘤直徑，腫瘤分期，腫瘤分級(jí)和腫瘤是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯相關(guān)性(P<0.05或<0.01)，與年齡，性別，腫瘤是否侵犯包膜和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P>0.05)，甲狀腺癌根治術(shù)后血清TFF-3較手術(shù)前明顯升高(P<0.01)，而Galectin-3水平較治療前明顯降低(P<0.01)。甲狀腺乳頭狀癌患者的血清TFF-3水平與Galectin-3水平呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.737，P<0.05)。結(jié)論 TFF-3和Galectin-3參與了甲狀腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，其在甲狀腺良惡性腫瘤鑒別診斷上具有重要意義。

三葉因子-3； 半乳糖凝集素-3； 甲狀腺乳頭狀腫瘤； 鑒別診斷

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma， PTC)是常見的內(nèi)分泌腫瘤，其發(fā)病率呈逐年增加的趨勢，對(duì)患者的生命健康產(chǎn)生了極大的影響，因此明確腫瘤的發(fā)病機(jī)制和早期鑒別良惡性腫瘤已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)[1]。目前組織活檢作為鑒別良惡性甲狀腺腫瘤的最好工具，但PTC與良性甲狀腺腫瘤在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的區(qū)別有一定的困難，因此發(fā)掘新的腫瘤指標(biāo)輔助診斷PTC成為學(xué)者們的努力方向。三葉因子-3(trefoil factor-3， TFF-3)是一種小分子多肽，在多種腫瘤中呈高表達(dá)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[2-3]。半乳糖凝集素是一種內(nèi)源性凝集素，以半乳糖凝集素-3(Galectin-3)最為多見，在細(xì)胞的生長，分化，炎癥和凋亡的過程中起到重要作用[4]。在甲狀腺癌的研究中，TFF-3和Galectin-3主要集中在組織病理學(xué)的表達(dá)，而血清檢測方面研究較少。本組檢測甲狀腺乳頭狀癌患者血清中TFF-3和Galectin-3表達(dá)，觀察其臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2014年1月至2015年12月在我院就診甲狀腺乳頭狀癌患者110例，其中男45例，女65例，平均年齡43.67±10.64歲，25～60歲為甲狀腺乳頭狀癌組。選擇同期在我院就診病理確診甲狀腺腺瘤患者40例，其中男7例，女33例，平均年齡43.27±9.67歲，25～60歲，為甲狀腺腺瘤組。兩組患者均第一次性手術(shù)治療，手術(shù)后有明確的病理明確診斷。選擇同期在我院行健康體檢者30例，男5例，女25例，平均年齡43.95±9.15歲，25～60歲，為健康對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)： 無口服甲狀腺激素的病史；所有患者均知情同意，均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過。排除有甲狀腺功能亢進(jìn)或者減退的病史；排除有嚴(yán)重心肝腎等重要功能不全；孕婦、哺乳期婦女；排除有放化療，有其他類型的良惡性腫瘤。3組在年齡，性別等一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血液標(biāo)本的抽取和指標(biāo)檢測 各組入院時(shí)和甲狀腺乳頭狀癌組手術(shù)后15d空腹取肘靜脈血，將標(biāo)本分別裝與干燥試管中4ml。干燥試管中的血液標(biāo)本予以室溫下靜置1h，離心半徑9cm，以3000r/min 的速度，離心5min，將血清保存在-70℃ 的冰箱中保存待檢測。試劑盒購自武漢博士德股份有限公司。TFF-3和Galectin-3進(jìn)行測定，使用酶標(biāo)儀(BIO-RAD伯樂酶標(biāo)儀)檢測450nm的吸光度(D值)，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出相應(yīng)的濃度，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，批內(nèi)變異系數(shù)為3%，批間變異系數(shù)為3%。

1.2.2 觀察指標(biāo) 觀察甲狀腺乳頭狀癌組，甲狀腺腺瘤組和健康對(duì)照組血清TFF-3和Galectin-3，甲狀腺乳頭狀癌患者血清TFF-3和Galectin-3水平與臨床病理因素的關(guān)系，手術(shù)后機(jī)體TFF-3和Galectin-3水平的變化，及TFF-3和Galectin-3水平相關(guān)性分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 各組血清TFF-3和Galectin-3表達(dá)量的變化

甲狀腺乳頭狀癌組血清TFF-3和Galectin-3表達(dá)水平分別為(0.51±0.13)g/L和(2.37±0.98)μg/L，甲狀腺腺瘤組分為(0.86±0.21)g/L和(1.24±0.46)μg/L，健康對(duì)照組分為(1.65±0.18)g/L和(0.98±0.23)μg/L，三組經(jīng)方差分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，甲狀腺乳頭狀癌患者的TFF-3水平明顯低于甲狀腺腺瘤和健康對(duì)照組，而甲狀腺腺瘤組明顯低于健康對(duì)照組；Galectin-3水平甲狀腺乳頭狀瘤明顯高于甲狀腺腺瘤組(P<0.01)，而甲狀腺腺瘤組明顯高于健康對(duì)照組最低(P<0.01)。

2.2 甲狀腺乳頭狀癌患者血清TFF-3和Galectin-3表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性

從表1可知甲狀腺乳頭狀癌患者血清TFF-3和Galectin-3水平與腫瘤直徑，腫瘤分期，腫瘤分級(jí)與腫瘤是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05或<0.01)，與年齡，性別，腫瘤是否侵犯包膜和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性(P>0.05)。

2.3 甲狀腺乳頭狀癌患者手術(shù)前后血清TFF-3和Galectin-3表達(dá)的變化

甲狀腺癌根治術(shù)后患者血清TFF-3和Galectin-3水平分別為(1.15±0.12)g/L和(0.97±0.23)μg/L，甲狀腺乳頭狀癌患者血清TFF-3(t=17.396，P<0.01)和Galectin-3(t=14.729，P<0.01)水平較治療前明顯降低。

2.4 甲狀腺乳頭狀癌患者血清TFF-3和Galectin-3表達(dá)的相關(guān)性

甲狀腺乳頭狀癌患者的血清TFF-3水平與Galectin-3水平呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.737，P<0.05)。

表1 血清TFF-3和Galectin-3與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理因素的關(guān)系

(續(xù)表1)

3 討 論

我國甲狀腺結(jié)節(jié)在人群中檢出率為20%～76%，在這些結(jié)節(jié)中有5%～15%為惡性，臨床上常常根據(jù)詢問病史，體檢，影像學(xué)檢查和細(xì)胞學(xué)檢查來評(píng)估良惡性[5]。盡管術(shù)前有病理學(xué)作為診斷的重要手段，但由于不同醫(yī)生之間的診斷符合率具有較大的差異，為尋找有效的腫瘤標(biāo)記物成為研究熱點(diǎn)。Galectin家族是一種內(nèi)源性凝集素，其與半乳糖具有較高的親和力，在細(xì)胞與細(xì)胞之間具有較強(qiáng)的粘附性。Galectin家族有十余種亞型，其中以Galectin-3最為常見。Galectin-3相對(duì)分子質(zhì)量為31000，由3個(gè)獨(dú)特的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成： 12個(gè)氨基酸的NH2末端，控制著靶細(xì)胞；COOH-末端區(qū)，為碳水化合物結(jié)合位點(diǎn)；甘氨酸、酪氨酸和脯氨酸連續(xù)重復(fù)的結(jié)構(gòu)，作為基質(zhì)金屬蛋白酶底物[6]。研究表明Galectin-3具有促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移的功能，主要表現(xiàn)促進(jìn)機(jī)體的血管生成，抑制細(xì)胞凋亡，并且發(fā)現(xiàn)在不同的腫瘤細(xì)胞其表達(dá)具有明顯的差異[7]。在肝癌，胃癌，前列腺癌和甲狀腺癌中呈過度表達(dá)，而在卵巢癌，子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌中呈低表達(dá)[8]。Galectin-3在甲狀腺腫瘤的研究一般局限于某一種組織類型，在甲狀腺濾泡癌研究較多，有研究顯示Galectin-3是術(shù)前診斷微小型甲狀腺濾泡癌的有效生物學(xué)標(biāo)記物。另一些研究發(fā)現(xiàn)Galectin-3在甲狀腺髓樣癌中具有重要的診斷價(jià)值，認(rèn)為Galectin-3高表達(dá)可能作為癌癥轉(zhuǎn)移的重要指征[9]。Galectin-3在鑒別濾泡性腺瘤和濾泡癌具有重要意義，作為濾泡性甲狀腺癌鑒別良性甲狀腺瘤的重要標(biāo)記物。Galectin-3表達(dá)在甲狀腺癌各組織類型表達(dá)無差異，故Galectin-3有可能是乳頭狀甲狀腺癌鑒別甲狀腺良性腫瘤的重要標(biāo)記物[10]。本組研究表明Galectin-3在乳頭狀甲狀腺癌患者水平明顯高于甲狀腺瘤和健康對(duì)照組，說明Galectin-3也可鑒別甲狀腺乳頭狀癌與良性甲狀腺腫瘤的具有重要參考價(jià)值。同時(shí)本組研究表明手術(shù)后甲狀腺乳頭狀癌患者的Galectin-3水平較手術(shù)前明顯降低，說明Galectin-3水平與甲狀腺乳頭狀癌的腫瘤負(fù)荷具有明顯的相關(guān)性，可能與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展具有重要作用。本組研究還發(fā)現(xiàn)Galectin-3水平與腫瘤直徑，分期，分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性，說明Galectin-3對(duì)甲狀腺乳頭狀癌惡性程度和預(yù)后的判定具有重要的臨床價(jià)值。

TFF-3又稱為腸三葉因子，早期發(fā)現(xiàn)在大鼠空腸中發(fā)現(xiàn)，常常以單聚體和二聚體的形式存在，其羧基端含有七個(gè)半胱氨酸殘基，有利于與其他蛋白分子相互作用。在生理狀態(tài)下TFF-3的表達(dá)受到發(fā)育的調(diào)控，在病理狀態(tài)下受到多種因素的調(diào)控。TFF-3在病理過程中的作用機(jī)制尚未闡明，多項(xiàng)研究結(jié)果出現(xiàn)不一致的情況，在肝癌，胃癌，肺癌和結(jié)腸癌中呈高表達(dá)，為癌癥的促進(jìn)因子，類似促癌基因，參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11-12]。有研究表明TFF-3在甲狀濾泡狀腺癌中的表達(dá)明顯低于良性甲狀腺腫瘤，可以作為甲狀腺良惡性腫瘤的重要參考作用，并發(fā)現(xiàn)TFF-3在甲狀腺濾泡狀癌的侵襲，轉(zhuǎn)移和浸潤具有密切關(guān)系[13]。本組研究表明甲狀腺乳頭狀癌的表達(dá)水平明顯低于甲狀腺腺瘤和健康對(duì)照組，說明機(jī)體TFF-3低表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切的聯(lián)系，與文獻(xiàn)報(bào)道TFF-3在甲狀腺癌表達(dá)降低一致[14]，說明TFF-3在甲狀腺癌中是機(jī)體的保護(hù)因子，相當(dāng)于抑癌基因的作用。目前TFF-3對(duì)腫瘤的抑制作用，主要通過以下途徑實(shí)現(xiàn)[15]： 降低有絲分裂原活化蛋白激酶途徑的磷酸化，減少細(xì)胞外信號(hào)向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而抑制細(xì)胞增殖，分化和凋亡等生物學(xué)反應(yīng)；增加細(xì)胞周期激酶抑制劑的水平，阻止細(xì)胞周期有G1期進(jìn)入S期，從而達(dá)到抑制細(xì)胞的增殖；阻止細(xì)胞周期中S期的啟動(dòng)，使細(xì)胞周期靜止在G1期，從而進(jìn)一步抑制細(xì)胞的增殖。本組研究還表明機(jī)體的TFF-3表達(dá)水平與腫瘤直徑，分級(jí)，分期和淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移具有明顯的相關(guān)性，說明TFF-3表達(dá)是甲狀腺乳頭狀瘤的重要惡性程度和預(yù)后因子，TFF-3表達(dá)越低，惡性程度越高，預(yù)后越差。本組研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌患者機(jī)體的TFF-3水平出現(xiàn)明顯升高，說明癌癥負(fù)荷減輕后，機(jī)體的TFF-3表達(dá)水平出現(xiàn)一定程度的恢復(fù)，故為治療甲狀腺乳頭狀癌靶向治療提供了新的靶點(diǎn)。

本組研究表明甲狀腺乳頭狀癌患者血清的Galectin-3表達(dá)水平與TFF-3呈負(fù)相關(guān)，在此研究中Galectin-3表現(xiàn)的為促癌基因的角色，而TFF-3抑癌基因的角色，對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用，兩者從本研究看呈負(fù)相關(guān)，是否兩者存在某種平衡，一旦這種平衡打破將成為乳頭狀甲狀腺癌的主要發(fā)展因素等問題，需要未來的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步去證實(shí)。

總之，TFF-3和Galectin-3參與了甲狀腺腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，其在甲狀腺良惡性腫瘤鑒別診斷上具有重要意義。

[1] 宋洪明，房林.前哨淋巴結(jié)活檢在甲狀腺癌中的應(yīng)用[J].同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)： 醫(yī)學(xué)版，2015，35(4)： 119-123.

[2] Lau WH， Pandey V， Kong X， et al. Trefoil factor-3(TFF3) stimulates de novo angiogenesis in mammary carcinoma both directly and indirectly via IL-8/CXCR2[J]. PLoS One， 2015，10(11)： e141947.

[3] Abols A， Ducena K， Andrejeva D， et al. Trefoil factor 3 is required for differentiation of thyroid follicular cells and acts as a context-dependent tumor suppressor[J]. Neoplasma， 2015，62(6)： 914-924.

[4] Subhash VV， Ho B. Galectin 3 acts as an enhancer of survival responses in H. pylori-infected gastric cancer cells[J]. Cell Biol Toxicol， 2016，32(1)： 23-35.

[5] 鐘李長，盧峰，郭樂杭，等.超聲造影在甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)： 醫(yī)學(xué)版，2015，35(2)： 109-111.

[6] Harazono Y， Kho DH， Balan V， et al. Galectin-3 leads to attenuation of apoptosis through Bax heterodimerization in human thyroid carcinoma cells[J]. Oncotarget， 2014，5(20)： 9992-10001.

[7] Yilmaz E， Karsidag T， Tatar C， et al. Serum galectin-3： diagnostic value for papillary thyroid carcinoma[J]. Ulus Cerrahi Derg， 2015，31(4)： 192-196.

[8] Thijssen VL， Heusschen R， Caers J， et al. Galectin expression in cancer diagnosis and prognosis： A systematic review[J]. Biochim Biophys Acta， 2015，1855(2)： 235-247.

[9] Salajegheh A， Dolan-Evans E， Sullivan E， et al. The expression profiles of the galectin gene family in primary and metastatic papillary thyroid carcinoma with particular emphasis on galectin-1 and galectin-3 expression[J]. Exp Mol Pathol， 2014，96(2)： 212-218.

[10] Tang W， Huang C， Tang C， et al. Galectin-3 may serve as a potential marker for diagnosis and prognosis in papillary thyroid carcinoma： a meta-analysis[J]. Onco Targets Ther， 2016，9： 455-460.

[11] Morito K， Nakamura J， Kitajima Y， et al. The value of trefoil factor 3 expression in predicting the longterm outcome and early recurrence of colorectal cancer[J]. Int J Oncol， 2015，46(2)： 563-568.

[12] Huang Z， Zhang X， Lu H， et al. Serum trefoil factor 3 is a promising non-invasive biomarker for gastric cancer screening： a monocentric cohort study in China[J]. BMC Gastroenterol， 2014，14： 74.

[13] 徐璇，于世鵬，劉杰.三葉因子-3與生長分化因子-15在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達(dá)及意義[J].中國老年學(xué)雜志，2016，36(5)： 1130-1132.

[14] 房濤，張靜，吳靖芳，等.金蓮花總黃酮對(duì)人甲狀腺乳頭癌K1細(xì)胞三葉因子-3表達(dá)變化的影響[J].河北醫(yī)藥，2015(16)： 2405-2407.

[15] 徐璇，于世鵬，劉杰.三葉因子-3與生長分化因子-15在甲狀腺濾泡性腫瘤中的表達(dá)及意義[J].中國老年學(xué)雜志，2016，36(5)： 1130-1132.

Trefoil factor-3 and galectin-3 in differential diagnosis of benign and malignant thyroid tumors

WANGWei-jian，ZHENGFeng

(Dept. of General Surgery， Shanghai Electric Power Hospital， Shanghai 200050， Chian)

Objective To investigate the serum levels of trefoil factor-3(TFF-3) and Galectin-3 in differential diagnosis of benign and malignant thyroid tumors. Methods One hundred and ten patients with papillary thyroid carcinoma， 40 patients with thyroid adenoma admitted from January 2014 to December 2015， and 30 healthy subjects(controls) were enrolled in the study. Serum TFF-3 and Galectin-3 levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The relationship of TFF-3 and Galectin-3 levels with clinicopathological features were analyzed in patients with papillary thyroid cancer， their post-operative levels of TFF-3 and Galectin-3 were also measured. Results The serum TFF-3 levels were significantly lower in papillary thyroid carcinoma patients than those in thyroid adenoma patients and healthy controls， while the Galectin-3 levels in papillary thyroid carcinoma group were significantly higher than those in thyroid adenoma group and healthy control group(P<0.01)， and those in thyroid adenoma group were significantly higher compared with the healthy control group(P<0.01). Serum TFF-3 and Galectin-3 levels were significantly correlated with tumor size， tumor stage， tumor grade and lymph node metastasis in patients with thyroid papillary carcinoma(P<0.05 or<0.01)， but not correlated with age， sex， membrane invasion and distant metastasis(P>0.05). After thyroid cancer radical surgery the serum TFF-3 levels increased and Galectin-3 levels significantly decreased than those before surgery(P<0.01). Serum TFF-3 level was negatively correlated with Galectin-3(r=-0.737，P<0.05) in patients with papillary thyroid carcinoma. Conclusion TFF-3 and Galectin-3 may be involved in the development of thyroid tumor， they are of value in the differential diagnosis of benign and malignant thyroid tumors.

trefoil factor-3； galectin-3； papillary thyroid carcinoma； differential diagnosis

10.16118/j.1008-0392.2016.06.023

2015-07-26

王維健(1972—)，女，副主任醫(yī)師，學(xué)士.E-mail： 1330270302@qq.com

R 581.9

A

1008-0392(2016)06-0115-05