覃紅梅　甘　枚　劉　柯

(廣西醫(yī)科大學(xué)第六附屬醫(yī)院　玉林市第一人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，廣西　玉林　537000)

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血清白細(xì)胞介素-18、-10與腫瘤壞死因子-α在老年膿毒血癥患者預(yù)后中的預(yù)測(cè)價(jià)值

覃紅梅甘枚劉柯

(廣西醫(yī)科大學(xué)第六附屬醫(yī)院玉林市第一人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科，廣西玉林537000)

〔摘要〕目的探討血清白細(xì)胞介素(IL)-18、IL-10與腫瘤壞死因子(TNF)-α對(duì)老年膿毒血癥患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。方法選取該院2012年1月至2015年1月老年膿毒血癥患者89例，根據(jù)預(yù)后狀況將患者分為存活組(48例)與病死組(41例)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清IL-18、IL-10、TNF-α水平。采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析血清指標(biāo)與急性生理學(xué)與慢性健康狀況評(píng)估系統(tǒng)Ⅱ(APACHEⅡ)評(píng)分、序貫器官衰竭估計(jì)(SOFA)評(píng)分的關(guān)系，采用受試者工作特征曲線(ROC)及曲線下面積(AUC)分析血清指標(biāo)對(duì)老年膿毒血癥患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。結(jié)果存活組血清IL-18、IL-10與TNF-α水平明顯低于病死組，APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分明顯低于病死組(P<0.05)。經(jīng)Pearson相關(guān)系數(shù)分析顯示，IL-18、IL-10、TNF-α與APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分呈明顯正相關(guān)(P<0.05)。ROC分析顯示，IL-18、IL-10、TNF-α的AUC分別為0.723、0.916、0.851(P<0.05)。結(jié)論血清IL-18、IL-10與TNF-α對(duì)老年膿毒血癥患者預(yù)后具有重要的預(yù)測(cè)價(jià)值，其中血清IL-10預(yù)測(cè)價(jià)值最佳。

〔關(guān)鍵詞〕白細(xì)胞介素；腫瘤壞死因子-α；膿毒血癥

膿毒血癥是危重癥患者較為嚴(yán)重的全身炎癥反應(yīng)綜合征，在發(fā)生與發(fā)展期間患者分泌大量炎癥細(xì)胞因子〔1〕。白細(xì)胞介素(IL)-18作為機(jī)體中性粒細(xì)胞的活化因子與趨化因子，通過(guò)誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化與釋放超氧化物與溶酶體酶，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)展。IL-10具有促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，抑制免疫功能的作用。腫瘤壞死因子(TNF)-α是急性時(shí)相的促炎癥細(xì)胞因子，從而促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子的發(fā)展。本文旨在探討血清IL-18、IL-10與TNF-α對(duì)老年膿毒血癥患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。

1資料與方法

1.1臨床資料選取我院2012年1月至2015年1月老年膿毒血癥患者89例，均符合膿毒血癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔2〕，年齡≥60歲。排除合并嚴(yán)重先天性疾病、先天性畸形、惡性腫瘤與精神性疾病等患者。根據(jù)老年膿毒血癥患者的預(yù)后狀況分為存活組與病死組。存活組48例，其中男25例，女23例，年齡60～86歲，平均(70.63±5.11)歲，體溫(36.95±1.12)℃，心率(111.23±9.52)次/min，呼吸(25.71±6.11)次/min，收縮壓(133.02±25.13)mmHg，舒張壓(77.02±12.31)mmHg；病死組41例，男21例，女20例，年齡61～84歲，平均(70.59±5.08)歲，體溫(36.89±1.21)℃，心率(111.36±9.61)次/min，呼吸(25.62±6.08)次/min，收縮壓(132.95±25.08)mmHg，舒張壓(76.85±12.28)mmHg；兩組性別、年齡、體溫、心率、呼吸、收縮壓與舒張壓等指標(biāo)的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2檢測(cè)方法患者入院后均完善血常規(guī)、肝腎功能、凝血功能、電解質(zhì)、動(dòng)脈血?dú)夥治龅葘?shí)驗(yàn)室檢查，計(jì)算急性生理學(xué)與慢性健康狀況評(píng)估系統(tǒng)Ⅱ(APACHEⅡ)評(píng)分、序貫器官衰竭估計(jì)(SOFA)評(píng)分。全部患者入院時(shí)采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清IL-18、IL-10、TNF-α水平。①儀器與試劑：DG5031型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司)、UF5410-70℃低溫冰箱(Thermo)、XK96-3微量振蕩器(倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)、LDZ5-2低速離心機(jī)(北京離心機(jī)廠)、S648電熱水浴箱(上海醫(yī)用機(jī)械七廠)、Y28206加樣器(Thermo Labsystems)、人IL-18酶聯(lián)免疫分析試劑盒(美國(guó)RD公司)、人IL-10酶聯(lián)免疫分析試劑盒(美國(guó)RD公司)、人TNF-α酶聯(lián)免疫分析試劑盒(美國(guó)RD公司)。②操作步驟：全部患者采集靜脈血3 ml，滴加乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝試管，充分混勻后于30 min內(nèi)1 000 r/min離心10 min，采集血清置于-70℃低溫冰箱中保存。酶標(biāo)包被微孔板中的A1、B1、C1、D1、E1、F1為標(biāo)準(zhǔn)孔，分別稀釋為800、400、200、100、50 pg/ml、25 pg/ml，G1為空白孔(0 pg/ml)。標(biāo)本采用稀釋液1∶1稀釋后滴加50 μl于反應(yīng)孔內(nèi)，滴加待測(cè)血清50 μl生物素標(biāo)記抗體，蓋上模版，振蕩混勻后于37℃孵育1 h，采用蒸餾水將20 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋至600 ml作為洗滌液，甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，吸水紙拍干，重復(fù)操作4次，每孔加入60 μl和鏈霉素-HRP，振蕩混勻后于37℃孵育30 min，甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，吸水紙拍干，重復(fù)操作4次。每孔滴加顯色底物A、B各50 μl，輕蕩混勻，37℃孵育10 min，避光，取出酶標(biāo)板，滴加50 μl終止液，將酶標(biāo)板置于酶標(biāo)儀檢測(cè)板上，以空白孔調(diào)零，于450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光度(OD值)，以O(shè)D值作為縱坐標(biāo)，IL-18、IL-10、TNF-α標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算IL-18、IL-10、TNF-α水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、Pearson相關(guān)系數(shù)分析及受試者工作特征(ROC)曲線。

2結(jié)果

2.1兩組患者血清IL-18、IL-10與TNF-α水平比較存活組血清IL-18、IL-10與TNF-α水平明顯低于病死組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1　兩組血清IL-18、IL-10與TNF-α水平比較

2.2兩組APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分比較存活組APACHEⅡ評(píng)分〔(18.26±6.85)分〕、SOFA評(píng)分〔(5.48±1.72)分〕明顯低于病死組〔(26.01±8.06)分、(8.29±2.31)分〕(t=4.90,6.56,P<0.05)。

2.3血清指標(biāo)與APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分的關(guān)系經(jīng)Pearson相關(guān)系數(shù)分析顯示，IL-18與APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分呈明顯正相關(guān)(r=0.393，0.465，P<0.05)，IL-10與APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分呈明顯正相關(guān)(r=0.412，0.506，P<0.05)，TNF-α與APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分呈明顯正相關(guān)(r=0.369，0.481，P<0.05)。

2.4老年膿毒血癥患者各血清指標(biāo)預(yù)測(cè)患者預(yù)后的ROC曲線分析ROC曲線顯示，血清IL-18、IL-10、TNF-α的預(yù)測(cè)患者預(yù)后曲線下面積(AUC)分別為0.723、0.916、0.851,95%CI分別為0.526～0.869、0.831～1.056、0.623～0.981(P<0.05)。

3討論

干擾素(IFN)-γ誘發(fā)因子(IGIF)由絲裂原刺激感染痤瘡丙酸桿菌小鼠血清中產(chǎn)生，由于IGIF 與IL-1家族具有同源性，IGIF又稱為IL-18〔3〕。IL-18是致炎癥因子，其通過(guò)作用于自然殺傷細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、單核細(xì)胞，從而發(fā)揮免疫功能與促進(jìn)IFN-γ表達(dá)。同時(shí)，IL-18參與炎癥、創(chuàng)傷、感染與細(xì)胞調(diào)節(jié)時(shí)的起始免疫反應(yīng)。因此，IL-18在膿毒血癥的發(fā)生與發(fā)展中具有重要的作用。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，IL-18作為促炎癥因子參與膿毒血癥的發(fā)生與發(fā)展，可作為創(chuàng)傷后綜合征的早期預(yù)測(cè)因子，有助于區(qū)分全身炎癥反應(yīng)綜合征與膿毒血癥，并指導(dǎo)多發(fā)傷后的手術(shù)時(shí)機(jī)〔4〕。IL-10主要由單核細(xì)胞、上皮細(xì)胞與Th2細(xì)胞釋放，其具有抑制Th1細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，抑制致炎癥因子產(chǎn)生。IL-10在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、病毒性心肌炎與膿毒血癥患者的發(fā)生與發(fā)展中具有重要的作用，其通過(guò)抑制炎癥反應(yīng)，從而促進(jìn)疾病的發(fā)生與發(fā)展〔5〕。TNF-α是反映急性炎癥疾病的細(xì)胞因子，具有促進(jìn)炎癥發(fā)生的發(fā)生與發(fā)展。當(dāng)炎癥疾病發(fā)生時(shí)，TNF-α通過(guò)促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶與前列腺素增加，從而促進(jìn)器官纖維組織重塑，并導(dǎo)致纖維細(xì)胞增生，增加炎癥反應(yīng)的發(fā)生〔6〕。

大量文獻(xiàn)證實(shí)，APACHEⅡ評(píng)分、SOFA評(píng)分是評(píng)估危重癥患者預(yù)后狀況的重要指標(biāo)〔7，8〕。因此，IL-18、IL-10、TNF-α水平顯著增加預(yù)示老年膿毒血癥患者的預(yù)后狀況欠佳，反之，上述三者水平顯著降低則預(yù)示老年膿毒血癥患者的預(yù)后狀況較佳。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，隨著病情程度的逐漸加重，IL-18水平呈增高的傾向，揭示了IL-18在感染性疾病發(fā)展中具有重要的意義，且與病情程度具有明顯關(guān)系〔9〕，本研究結(jié)果可見(jiàn)，IL-18水平對(duì)疾病的預(yù)后具有重要的預(yù)測(cè)作用。膿毒血癥患者血清IL-10水平明顯高于正常人群，提示膿毒血癥患者表現(xiàn)持續(xù)激活的炎癥反應(yīng)，隨著病情的加重，抗炎癥因子水平明顯增高〔10〕，對(duì)疾病預(yù)后的預(yù)測(cè)具有重要的意義。TNF-α通過(guò)刺激機(jī)體成纖維細(xì)胞分泌IL，促進(jìn)蛋白多糖降解與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子，從而增加炎癥的反應(yīng)程度〔11〕。本研究結(jié)果提示，TNF-α對(duì)疾病的預(yù)后具有重要的預(yù)測(cè)價(jià)值。因此，膿毒血癥患者血清促炎癥與抗炎癥指標(biāo)均顯著增高，且增高程度與預(yù)后狀況具有明顯的正相關(guān)?？傊?，IL-10對(duì)老年膿毒血癥患者的預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值更佳，其次為T(mén)NF-α，而IL-18對(duì)疾病的預(yù)測(cè)價(jià)值最低，究其原因有待進(jìn)一步的研究探討。

4參考文獻(xiàn)

1龍濤，李智，白蓉蓉，等.外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)對(duì)膿毒血癥患者的預(yù)后分析〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2015；25(14)：3125-6.

2龍濤，白蓉蓉，李智，等.降鈣素原與 C-反應(yīng)蛋白對(duì)術(shù)后重度膿毒血癥患者預(yù)后的影響〔J〕.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2015；25(13)：2881-3.

3柳貴梅，周雪蓮，趙巧鳳.根除幽門(mén)螺桿菌治療對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IL-8、IL-18水平的影響〔J〕.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2015；31(8)：1098-100.

4嚴(yán)潔，許紅陽(yáng)，臧芝棟，等.尿中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白和IL-18對(duì)膿毒血癥患者伴急性腎損傷的早期診斷意義〔J〕.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2011；31(5)：785-8.

5張曉杰.兒童潰瘍性結(jié)腸炎血清IL-1、IL-6、IL-10及TNF-α水平變化〔J〕.中國(guó)婦幼保健，2015；30(20)：3413-5.

6周霞，張紹武，李治國(guó).潰瘍性結(jié)腸炎患者血清PCT、TNF-α水平及臨床意義〔J〕.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2015；24(6)：691-3.

7王靈.早期動(dòng)脈血乳酸值、6 h乳酸清除率及APACHEⅡ評(píng)分在急性左心衰竭患者預(yù)后判斷的應(yīng)用〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2015；31(20)：3382-4.

8de Azevedo JR，Torres OJ，Beraldi RA，etal.Prognostic evaluation of severe sepsis and septic shock：procalcitonin clearance vs Δ Sequential Organ Failure Assessment〔J〕.J Crit Care，2015；30(1)：219,e9-12.

9張雷，張樂(lè)，陳健.緊密連接蛋白-1咬合蛋白及白細(xì)胞介素-18在急性重癥胰腺炎腸黏膜中的表達(dá)〔J〕.中國(guó)急救醫(yī)學(xué)，2014；34(12)：1098-101.

10梁群，刁冰冰，王叢.益氣養(yǎng)陰活血法對(duì)膿毒血癥模型大鼠血清TNF-α、IL-6與IL-10的影響〔J〕.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2014；30(12)：1705-7.

11高友兵，田少林，劉偉，等.區(qū)域動(dòng)脈灌注治療對(duì)重癥急性胰腺炎患者炎性因子的影響〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代普通外科進(jìn)展，2015；18(4)：285-7.

〔2015-06-10修回〕

(編輯李相軍/滕欣航)

基金項(xiàng)目：院內(nèi)立項(xiàng)課題(201520)

〔中圖分類號(hào)〕R64

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)12-2993-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.12.080

第一作者：覃紅梅(1971-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事膿毒癥及多發(fā)傷危重癥研究。