趙平森　賈潤清　林利芳　蘇魯賢　鐘志雄　曾毅

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廣東省梅州市24 450例女性HPV感染與基因分型

趙平森賈潤清林利芳蘇魯賢鐘志雄曾毅

514031 廣東,梅州市人民醫(yī)院 中山大學(xué)附屬梅州醫(yī)院(趙平森、林利芳、蘇魯賢、鐘志雄)；100124 北京工業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)與生物工程學(xué)院 (賈潤清、曾毅)

趙平森、賈潤清為共同第一作者

【摘要】目的探討梅州地區(qū)女性HPV感染情況與基因亞型分布，為該地區(qū)宮頸癌的預(yù)防和治療提供數(shù)據(jù)資料。方法運用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對24 450例就診女性的宮頸脫落細胞標本進行HPV基因分型檢測，并對HPV基因亞型感染情況進行對比分析。結(jié)果24 450例標本中檢測出HPV陽性者3 922例，感染率為16.04%。在陽性標本中，HPV高危型陽性率最高的前3位依次是HPV-16(30.37%)、HPV-52(17.77%)和HPV-58(15.53%)，低危型以HPV-CP8304為主(5.61%)。30～50歲是HPV感染的高峰年齡段，HPV陽性檢出率在各年齡組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。結(jié)論梅州地區(qū)就診女性最常見的HPV亞型是16型，30～50歲是HPV感染高發(fā)人群，HPV基因分型對宮頸癌的預(yù)防和治療具有積極的指導(dǎo)意義。

【主題詞】乳頭瘤狀病毒，人；導(dǎo)流雜交；基因分型

Fundprograms:NaturalScienceFoundationofGuangdongProvinceofChina(2014A030307042)；NationalScienceandTechnologyMajorProjectofChina“SignificantNewDrugsDevelopment”(2015ZX09102025)

人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是球形DNA病毒，具有高度組織嗜性，可引起人體皮膚和黏膜異常增生[1]。HPV自20世紀70年代被發(fā)現(xiàn)與宮頸癌相關(guān)以來，一直備受關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，HPV是宮頸鱗癌的主要致病因素[2]。至今已發(fā)現(xiàn)的HPV有100多個亞型，分為高危型(HR-HPV：如HPV-16和HPV-18)和低危型(LR-HPV：如HPV-6和HPV-11)，各亞型與體內(nèi)特定感染部位和病變有關(guān)，高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌及癌前病變發(fā)生的必要條件，約99.8%的宮頸癌患者為高危型HPV感染[3-5]。因此，在女性中檢測HPV對于宮頸癌的早期診療具有重要的意義，同時為該地區(qū)的HPV疫苗研發(fā)提供重要的參考資料。本研究對來我院婦科就診的24 450例患者HPV感染情況及基因亞型分布進行流行病學(xué)回顧性分析。

1資料與方法

1.1樣本采集與保存收集2008年2月至2013年12月在梅州市人民醫(yī)院婦科就診的24 450例HPV女性檢測者，年齡13～88歲，平均年齡(41.3±9.8)歲。由醫(yī)生采集宮頸脫落細胞，將其放入加有專用細胞保存液的取樣管中。樣本采集后放置于4 ℃保存，24h內(nèi)測定。

1.2試劑和儀器21種HPV分型檢測試劑盒(包含HPV-DNA抽提試劑、PCR擴增試劑和雜交試劑)購自凱普生物、PCR擴增儀為RocheLightCycler480、醫(yī)用核酸分子快速雜交儀購自凱普生物。

1.3檢測方法DNA提取所采集的樣本振蕩混勻，取500μl，14 000rpm離心1min，棄上清，按HPV-DNA抽提試劑說明書指導(dǎo)抽提DNA。PCR擴增將上述抽提的DNA作為模板進行擴增，每份PCR反應(yīng)體系為25μl，反應(yīng)程序參考試劑說明。PCR產(chǎn)物雜交和顯色按雜交試劑說明進行。結(jié)果判定：陽性為清晰可見的藍紫色圓點，根據(jù)膜條HPV分型分布圖，判斷陽性點的HPV亞型，多個圓點代表多重感染，每次雜交試驗均設(shè)置陰性與陽性對照。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用GrapgPadPrismv5.0進行，計數(shù)資料和計量資料分別用χ2檢驗(%)和t檢測，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HPV基因分型檢出情況24 450例標本中有3 922例感染HPV，感染率為16.04%。在3 922例陽性標本中，單一高危型感染有2 923例，占74.53%(2 923/3 922)；單一低危型感染有367例，占9.36%(367/3 922)；多重感染有632例，占16.11%(632/3 922)，主要以高危型多重感染為主，占11.45%(449/3 922)，如表1。

2.2陽性標本的HPV亞型分布在3 922例陽性標本中可檢測到21種亞型HPV的分布，其中高危型陽性率最高的3種亞型分別為HPV-16(30.37%)，HPV-52(17.77%)，HPV-58(15.53%)，低危型以HPV-CP8304為主(5.61%)，如表2。

2.3HPV感染者年齡分布本研究所收集的病例中，年齡最小的為13歲，年齡最大的為88歲。將24 450例標本按患者年齡進行分組，顯示不同年齡組HPV陽性檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義χ2=88.38，P<0.001(表3)。

表1　24 450份標本HPV基因型檢出情況

表2　3 922例陽性標本的HPV基因亞型分布

表3　24 450例標本的年齡分布和HPV陽性率

3討論

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率居全球婦科惡性腫瘤第二位，僅次于乳腺癌[6, 7]。相比于其他腫瘤，宮頸癌病因相對明確。近年來，宮頸癌及癌前病變發(fā)生率在全球范圍內(nèi)呈逐漸上升的趨勢。流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究已證實，宮頸持續(xù)的高危型HPV感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌的主要病因[8]。因此，對HPV基因的早期分型檢測，能夠及時發(fā)現(xiàn)宮頸病變并進行治療，以降低宮頸癌的發(fā)病率和病死率。目前，國際上許多國家已將HPV基因分型檢測納入到女性宮頸癌前篩查計劃中。

本研究對梅州市24 450例就診女性HPV感染情況及基因亞型分布進行流行病學(xué)回顧性分析，結(jié)果顯示感染率為16.04%。單一型感染(83.89%)遠高于多重感染，說明該地區(qū)HPV可能多為單一型感染；另外，單一高危型感染占74.53%，遠高于單一低危型感染(9.36%)、高危型合并感染(11.45%)、低危型合并感染(0.15%)和高低合并型感染(4.51%)，說明該地區(qū)HPV感染可能多為單一型感染且以單一高危型感染為主。持續(xù)的HPV高危型感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌發(fā)生的一個首要條件[8]，

在本研究中， 21種亞型的HPV均有分布，HPV高危型陽性率最高的前3個依次是HPV-16、HPV-52和HPV-58，CP8304在低危型HPV感染中陽性率最高，與Zou等[9]報道的結(jié)果相一致?，F(xiàn)已公認高危型HPV感染可引起宮頸癌前病變與宮頸癌，但在不同國家和地區(qū)，HPV分型的流行病學(xué)分布不同[10-13]。因此，基于HPV亞型的流行與分布數(shù)據(jù)可為高風(fēng)險人群制訂有針對性的疫苗接種方案，為防治宮頸癌提供有價值的資料。本研究發(fā)現(xiàn)不同年齡組的HPV陽性檢出率有顯著性差異。13～20歲組的HPV陽性檢出率高于其他年齡組，提示HPV感染有年輕化的趨勢。而且31～40歲組和41～50歲組HPV感染陽性構(gòu)成比高于其他年齡組，提示該地區(qū)HPV感染的高峰年齡段是30～50歲。因此，應(yīng)加強對此年齡段女性HPV基因分型檢測普查力度。

綜上所述，本研究可了解梅州地區(qū)就診女性HPV感染情況及基因亞型分布，為HPV疫苗的研制和應(yīng)用及宮頸癌預(yù)防提供重要的參考資料。

4參考文獻

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通信作者：趙平森，Email：zhaopingsen01@163.com，zhaopingsen@hotmail.com

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.03.014

基金項目：廣東省自然科學(xué)基金(2014A030307042)；國家科技重大專項“重大新藥創(chuàng)制”(2015ZX09102025)

(收稿日期：2016-01-20)

Infection status of human papillomavirus and its genotype distribution among 24 450 women in Meizhou, Guangdong province

ZhaoPingsen,JiaRunqing,LinLifang,SuLuxian,ZhongZhixiong,ZengYi

MeizhouPeople′sHospital,MeizhouHospitalAffiliatedtoSunYat-senUniversity,Meizhou514031,China(ZhaoPS,LinLF,SuLX,ZhongZX);CollegeofLifeScienceandBioengineering,BeijingUniversityofTechnology,Beijing100124,China(JiaRQ,ZengY)ZhaoPingsenandJiaRunqingarethefurstauthorswhocontributedequallytothearticleCorrespondingauthor:ZhaoPingsen,Email：zhaopingsen01@163.com，zhaopingsen@hotmail.com

【Abstract】ObjectiveTo investigate the situation of human papillomavirus (HPV) infection and the distribution of HPV genotypes among women attending hospital in Meizhou, Guangdong province.MethodsFlow-through hybridization and gene chip technique was used to detect HPV in cervical exfoliated cell specimens collected from 24 450 women for HPV screening in Department of Gynecology, Meizhou People′s Hospital, Meizhou Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University, and then the situation of HPV infection and distribution of HPV genotypes were analyzed. ResultsAmong 24 450 female exfoliated cell specimens, 3 922 were found to be positive for HPV infection, with the total infection rate of 16.04%. Among 3 922 samples, the top three high-risk subtypes of HPV were HPV-16 (30.37%), HPV-52 (17.77%) and HPV-58 (15.53%), the majority of low-risk HPV was HPV-CP8304 (5.61%). The positivity of various HPV types peaked among 30-50 years old. The differences of the HPV positive rates in different age groups was statistical significance (P<0.001). ConclusionsThe majority of women attending hospital detected with HPV-16 in Meizhou and the positivity of various HPV types peaked among women aged 30-50 years. Genotyping of HPV was meaningful for preventing and treating cervical cancer.

【Key words】Human papillomavirus; Flow-through hybridization; Genotyping

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