陳澤欽　董　波　黃　麗　徐世芬

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院(上海 200071)

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電針對WKY抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響*

陳澤欽董波黃麗徐世芬△

上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院(上海 200071)

摘要目的：通過電針“百會(huì)”、“印堂”觀察對抑郁模型大鼠的行為學(xué)影響。方法：27只雄性WKY大鼠被隨機(jī)分至電針組、假針組和模型組；雄性Wistar大鼠9只分為正常組。電針組取穴為“百會(huì)”、“印堂”，假針組給予安慰治療，模型組和正常組常規(guī)飼養(yǎng)，21d后測定各組大鼠體重、糖水消耗量(SPT)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST)及曠場實(shí)驗(yàn)(OFT)的改變。結(jié)果：電針組體重明顯增加，高于假針組(P<0.05)，正常組體重明顯高于模型組(P<0.01)；電針組蔗糖水喜好率明顯高于假針組(P<0.05)，正常組蔗糖水喜好率高于模型組(P<0.05)；強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中電針組和正常組不動(dòng)時(shí)間少于假針組和模型組(P<0.05)；曠場實(shí)驗(yàn)中電針組和正常組水平運(yùn)動(dòng)和垂直攀爬得分高于假針組和模型組(P<0.05)。結(jié)論：電針對WKY抑郁模型大鼠的行為學(xué)核心癥狀有明顯的改善作用。

主題詞抑郁癥/針灸療法 電針行為 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠

抑郁癥是一種伴有多種軀體心理癥狀的嚴(yán)重精神障礙性疾病，常常表現(xiàn)為悲傷、內(nèi)疚、興趣減弱、快感缺失，伴或不伴頭痛、厭食、便秘等軀體癥狀，嚴(yán)重者甚至可能自殺[1]。研究顯示，到2020年抑郁癥帶來的疾病負(fù)效應(yīng)有可能成為世界第二大重?fù)?dān)?？挂钟羲幍呐R床使用為患者減輕痛苦，然而其依賴性、副作用、療效不確定性等依舊困擾著人們，此時(shí)電針這種綠色有效而持久的抗抑郁療法受到越來越多地關(guān)注[2]。行為學(xué)評價(jià)作為神經(jīng)精神疾病機(jī)制研究的組成部分有著重要的意義，是療效評價(jià)的重要指標(biāo)[3]。因此，本實(shí)驗(yàn)選取普遍存在抑郁樣行為的WistarKyoto(WKY)基因大鼠模型為對象，以“百會(huì)”、“印堂”為治療穴位，觀察電針治療對WKY大鼠核心抑郁樣行為的改變。

1材料與方法1.1動(dòng)物雄性4周齡Wistar和WistarKyoto(WKY)大鼠，SPF級，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證編號：SCXK(京)2012-0001。動(dòng)物購進(jìn)后進(jìn)行適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由攝食飲水，12h晝夜循環(huán)，室溫(22±2)℃，相對濕度為(50～60)%。

1.2主要試劑與儀器蔗糖，購于Sigma公司。5%蔗糖水溶液:蔗糖100g，溶于蒸餾水中定容至2L。

G6805-1A電針治療儀，上海華誼醫(yī)用儀器廠；曠場實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，上海移數(shù)信息科技有限公司；ACS23型電子稱，東莞百利達(dá)健康器械有限公司。

1.3分組與操作27只WKY大鼠隨機(jī)分至電針組、假針組和模型組，每組9只；正常Wistar大鼠9只設(shè)為正常組。記錄初始體重。正常組、模型組常規(guī)飼養(yǎng)，不予治療。

電針組：根據(jù)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》定位大鼠“百會(huì)”、“印堂”穴，將電針治療儀導(dǎo)線的正負(fù)極兩端露出銅絲并纏繞于0.25×25mm—次性不銹鋼毫針上，用膠布固定。在透明儲(chǔ)物盒底部鉆3個(gè)直徑約為1cm的小孔，與導(dǎo)線相連的毫針通過其中的一個(gè)孔，另外兩個(gè)小孔為通氣孔。大鼠被置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)后，分別刺入百會(huì)，印堂穴約5mm,以手下沉緊感為度，膠布固定針灸針。將事先準(zhǔn)備好的透明儲(chǔ)物盒扣住大鼠后，采用電針儀，頻率設(shè)置為2Hz連續(xù)波電，電流強(qiáng)度根據(jù)大鼠的耐受情況，即頭部出現(xiàn)顫動(dòng)并且不嘶叫為度，從0.1mA開始逐漸加大強(qiáng)度，每次15min，治療3周。治療過程中，注意觀察大鼠是否要將針灸針剝掉，如有上述情況，可輕輕拍打儲(chǔ)物盒，轉(zhuǎn)移大鼠注意力。另外，保持整個(gè)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的安靜，避免聲音或動(dòng)作過大造成大鼠恐慌。

假針組:采用與電針組同樣的抓取方法，將同規(guī)格的針灸針剌入大鼠“百會(huì)”、“印堂”穴體表(不剌入穴位，以避免非特異性針刺效應(yīng))，針灸針與導(dǎo)線相連，但不通電。留針時(shí)間與治療時(shí)間均同電針組。

各組分別于治療21d后開始檢測大鼠體重、強(qiáng)迫游泳、曠場實(shí)驗(yàn)和24h蔗糖水實(shí)驗(yàn)中的變化。

1.4檢測指標(biāo)1.4.1體重：對比治療前后各組大鼠體重的相對變化。

1.4.2糖水偏好實(shí)驗(yàn)(Sucrosepreferencetest,SPT)：正式實(shí)驗(yàn)前48h，使大鼠適應(yīng)飲用蔗糖水。第1個(gè)24h，每籠均放置2個(gè)水瓶，其中1瓶為5%蔗糖水150ml，另一瓶為純水150ml。隨后24h，禁食禁水。正式實(shí)驗(yàn)時(shí)，給予大鼠5%蔗糖水和純水各150ml，12h后兩瓶水的位置進(jìn)行調(diào)換，24h后根據(jù)每只大鼠的糖水和純水的飲用量來分別得出糖水喜好比。計(jì)算公式為:[(糖水飲用量)/(糖水飲用量)+(純水飲用量)]×100%。

1.4.3強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(Forceswimmingtest,FST):強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)裝置為高40cm，直徑30cm的透明丙稀酰胺樹脂材料圓桶。將大鼠置于水溫為23～25°C，水位32cm的圓桶中，保證大鼠后肢不能觸及圓桶底部。實(shí)驗(yàn)第1天對全部大鼠進(jìn)行15min預(yù)游，結(jié)束后擦干繼續(xù)飼養(yǎng)。24h后進(jìn)行5min的強(qiáng)迫游泳測試，記錄并分析不動(dòng)時(shí)間(漂于水面，不動(dòng)或微小動(dòng)作時(shí)間)。前1只大鼠測試結(jié)束后需盡快更換干凈的水以減少糞便和氣味對后1只大鼠的干擾。

1.4.4曠場實(shí)驗(yàn)(Openfiledtest,OFT):曠場實(shí)驗(yàn)箱為規(guī)格80cm×80cm×40cm，四周及底面均為黑色的正方形敞箱。箱底用白線劃分成16cm×16cm等面積方格25個(gè)。將大鼠置于實(shí)驗(yàn)箱箱底的中央格，記錄大鼠水平運(yùn)動(dòng)時(shí)間和距離、中央運(yùn)動(dòng)時(shí)間和距離及垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)(兩前肢離地或攀附箱壁記為1)。敞箱頂部攝像頭記錄其5min內(nèi)的活動(dòng)并通過連接電腦儲(chǔ)存分析數(shù)據(jù)。每測試1只大鼠后，立即清理箱內(nèi)的糞便及尿液，同時(shí)使用75%酒精噴灑擦拭實(shí)驗(yàn)箱，避免前1只大鼠所遺留下的氣味對下1只大鼠行為檢測造成影響。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS21. 0 統(tǒng)計(jì)軟件分析處理。多組間比較采用單因素方差分析(One-WayANOVA)，多組間兩兩比較用LSD法，兩組間比較采用t檢驗(yàn)方法分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果2.1各組大鼠體重變化初始體重，WKY大鼠與Wistar大鼠比較，體重有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，WKY鼠三組內(nèi)體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);治療后，電針組體重大于假針組，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，模型組體重遠(yuǎn)小于正常組(P<0.01)。表示W(wǎng)KY抑郁模型大鼠體重小于正常大鼠，符合抑郁時(shí)體重減輕的癥狀，電針治療可增加抑郁模型大鼠體重。見表1。

表1　四組大鼠體重的對比結(jié)果 (g)

注：與電針組比較，△P<0.05，與正常組比較，◆P<0.01

2.2電針對各組大鼠蔗糖水喜好比的影響電針組與假針組比較，喜好率明顯升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但低于正常組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)；模型組、假針組與正常組比較喜好率明顯減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.01)。表示W(wǎng)KY大鼠蔗糖水喜好率低于正常大鼠，可代表為興趣缺失的表現(xiàn)，電針可改善抑郁模型大鼠興趣缺失的癥狀。見表2。

表2　24h四組大鼠蔗糖水喜好比的對比結(jié)果(%)

注：與電針組比較，△P<0.05，與正常組比較，◇P<0.05，與正常組比較，◆P<0.01

2.3電針對各組大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響電針組與假針組比較，強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間明顯減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組與正常組比較不動(dòng)時(shí)間顯著增大，差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。WKY大鼠在強(qiáng)迫游泳中的不動(dòng)時(shí)間越長，表明求生欲望越低，其抑郁癥狀越明顯。該數(shù)據(jù)表明與正常組比較，WKY大鼠抑郁癥狀明顯，經(jīng)電針治療后，可減少WKY大鼠強(qiáng)迫游泳中不動(dòng)時(shí)間，增加求生欲，改善抑郁癥狀。見表3。

2.4電針對各組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)行為的影響電針組與假針組比較，水平運(yùn)動(dòng)總時(shí)間和距離及中央運(yùn)動(dòng)時(shí)間和距離均增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組與正常組比較則均數(shù)較小，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);垂直次數(shù)中電針組高于假針組(P<0.05)，模型組則少于正常組，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。表示W(wǎng)KY大鼠水平運(yùn)動(dòng)距離和時(shí)間、垂直次數(shù)少于正常大鼠，是焦慮抑郁和探索好奇欲底下的表現(xiàn)，經(jīng)電針治療后，可增加大鼠活動(dòng)距離、時(shí)間和探索欲，改善抑郁心理狀態(tài)。見表4。

表3　四組強(qiáng)迫游泳中不動(dòng)時(shí)間的對比結(jié)果

注：△與電針組比較，P<0.05，◆與正常組比較，P<0.01值

表4　四組曠場實(shí)驗(yàn)中的測試對比結(jié)果

注：△與電針組比較，P<0.05，▲與電針組比較，P<0.01；◇與正常組比較，P<0.05，◆與正常組比較，P<0.01

3討論中醫(yī)認(rèn)為，抑郁癥由情志郁結(jié)、思慮過度而發(fā)病，其病位在腦，與心、肝、腎等多個(gè)臟腑有關(guān)。“病變在腦，首取督脈”，治療應(yīng)以督脈的穴位為主來醒腦開竅、化郁開結(jié)、暢達(dá)情志。督脈與腦的關(guān)系密不可分，在治療抑郁癥中起著重要的作用。百會(huì)為督脈與手足三陽經(jīng)及足厥陰肝經(jīng)之會(huì)，位于頭頂之顛，有醒腦開竅，升提陽氣之功，《針灸大成》云：“主心煩悶，驚悸健忘，忘前失后，心神恍惚?！笔菍幮陌采?、定驚益智的要穴。印堂為經(jīng)外奇穴，督脈行前額而系，為調(diào)神清腦、疏通腦絡(luò)的要穴，兩穴相配伍可增強(qiáng)治療情志疾患的療效，而且可以減少多個(gè)穴位在治療中產(chǎn)生的不確定性。本課題組長期應(yīng)用此二穴于抑郁癥的治療，不僅起效快、無副作用，還可以有效改善飲食、消化、運(yùn)動(dòng)等多系統(tǒng)伴發(fā)紊亂的癥狀[3]。

關(guān)于抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，傳統(tǒng)經(jīng)典的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說認(rèn)為是由于腦內(nèi)去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5 -HT)和多巴胺(DA)等功能不足而造成的[4]，然而此學(xué)說并不能完全解釋抑郁癥的機(jī)制，例如患者在服用選擇性5-HT再攝取抑制劑等抗抑郁藥物能在給藥后數(shù)分鐘之內(nèi)即增加了患者腦內(nèi)突觸間隙的5-HT的遞質(zhì)濃度，卻往往需數(shù)周后才能改善患者臨床癥狀，且治療的完全緩解率也有限。隨著更深入的研究，神經(jīng)可塑性假說受到了普遍認(rèn)可，該假說認(rèn)為，抑郁癥是大腦內(nèi)與獎(jiǎng)賞及情緒相關(guān)的神經(jīng)環(huán)路在長期的負(fù)面情緒刺激下發(fā)生了可塑性變化，并最終導(dǎo)致了抑郁癥的發(fā)生[5]。近來，越來越多的學(xué)者認(rèn)為韁核在精神類疾病中包括抑郁癥扮演著重要的角色，比如興趣缺失、睡眠障礙、絕望行為等抑郁癥核心癥狀都與韁核的異常神經(jīng)活動(dòng)有關(guān)[6]。

WKY抑郁模型大鼠模擬了抑郁癥病人的核心臨床癥狀，被廣泛應(yīng)用于機(jī)制和療效研究[7]。本實(shí)驗(yàn)中WKY大鼠明顯處于抑郁狀態(tài)，與正常鼠體重、SPT、OFT和FST中活動(dòng)性的測試均可體現(xiàn)出興趣降低、快感缺失、求生欲望減弱等特點(diǎn)，證明該模型符合抑郁模型成功的評判標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，電針可明顯的改善抑郁大鼠行為學(xué)癥狀，可以增加大鼠體重和對蔗糖水的喜好率，減少大鼠在強(qiáng)迫游泳中的不動(dòng)時(shí)間，增加在曠場實(shí)驗(yàn)中的活動(dòng)距離和時(shí)間，多方面改變大鼠的抑郁行為學(xué)表現(xiàn)，提示電針的抗抑郁機(jī)制可能與韁核的神經(jīng)的突觸可塑性有關(guān)，通過影響韁核的突觸可塑性變化其大腦中的活性，繼而影響下游單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放而起到治療作用，研究韁核在電針治療抑郁癥中的作用具有進(jìn)一步的現(xiàn)實(shí)意義。

電針廣泛應(yīng)用于治療神經(jīng)精神系統(tǒng)疾患，其臨床療效確切，縱觀近年的針刺研究發(fā)現(xiàn)，電針具有多靶點(diǎn)多途徑的復(fù)合治療作用，其具體機(jī)制尚待研究。行為學(xué)評價(jià)可直觀反映電針治療抑郁癥的效果，且現(xiàn)代的視頻分析系統(tǒng)減少了人為操作的誤差，為實(shí)驗(yàn)提供了更加可靠的客觀數(shù)據(jù)。綜上所述可以得出電針可有效改善基因抑郁動(dòng)物模型WKY大鼠的核心抑郁癥狀，為日后的臨床治療和實(shí)驗(yàn)研究提供有效理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]崔一卉, 胡海嵐. 外側(cè)韁核:抑郁癥的異度空間[J]. 生命科學(xué), 2015,(3): 289-293.

[2]JianXu,YanlingShe,NingSu,etal.Effectsofelectroacupunctureonchronicunpredictablemildstressratsdepression-likebehaviorandexpressionofp-ERK/ERKandp-P38/P38[J].Evidence-BasedComplementaryandAlternativeMedicine, 2015, 1-8.

[3]MBoyko,RKutz,JGrinshpun,etal.Establishmentofananimalmodelofdepressioncontagion[J].BehaviouralBrainResearch, 2015, 2015,(281):358-363.

[4] 湯明明, 林文娟. 韁核在抑郁癥中的作用:研究和治療的新途徑[J]. 心理科學(xué)進(jìn)展, 2013,(7): 1213-1219.

[5]KunLi,TaoZhou,LujianLiao,etal.βCaMKIIinlateralhabenulamediatescoresymptomsofdepression[J].Science, 2013, 6149(341):1016-1020.

[6] 葉奎, 金孝岠, 朋立超. 韁核與抑郁癥的研究進(jìn)展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述, 2015,(11): 1961-1963.

[7]潔于, 徐世芬, 宋曉平. 電針與假針刺對抑郁癥大鼠模型行為學(xué)及學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J]. 新疆中醫(yī)藥, 2013,31(2): 1-4.

(收稿2016-03-04；修回2016-04-18)

通訊作者△

【中圖分類號】R749.99

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.08.070

TheeffectofelectroacupunctureonbehaviorsofWKYdepressionmodels

ShanghaiMunicipalHospitalofTCM,ShanghaiUniversityofTCM

(Shanghai200071)ChenZeqinDongBoHuangLietal

ABSTRACTObjective:To observe the behavior of depression model rats and antidepressant effects of“Baihui”(GV20) and “Yintang”(EA-HN3).Methods:27 male WKY rats were randomly divided into EA group,sham EA group and model group;9male Wistar rats were as normal group.EA group and sham EA group were in tervened daily,the model group and normal group were conventional breeding.Body weight,sucrose preference test(SPT), open field test(OFT)and forced swimming test(FST) were measured in rats after 21d to evaluate antidepressant-like effect of the electroacupuncture treatment.Results: After treatment, body weight of the EA group increased significantly than sham EA group (P<0.05). The weight of normal group was significantly greater than the model group(P<0.01); sucrose preference rate was significantly higher in EA group than sham EA group (P<0.05), sucrose preference rate was significantly higher in normal group than model group(P<0.05); in forced swimming test,the immobility time in the EA group and the normal group was less than sham EA group and model group (P<0.05); in open field test, horizontal movement and vertical climbing scoresare higher in the EA group and normal group than sham EA group and model group(P<0.05). Conclusion: The depression-like behaviors of WKY depression models were improved by electroacupuncture treatment.

KEY WORDSDepression /acupuncture-moxibustion ElectroacupunctureBehaviorAnimal experimentation Rats

*上海市教委科研創(chuàng)新重點(diǎn)項(xiàng)目(2014ZZ116)

上海市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)項(xiàng)目(ZY3-CCCX-3-3022)

·實(shí)驗(yàn)研究·