毛豹皮樟葉水提物的活性成分及其清除亞硝酸鈉和阻斷亞硝胺合成的作用

芶　琳, 王春薇, 倪　蘇,①, 鐘宣伯

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué): a. 生命科學(xué)學(xué)院, b. 農(nóng)學(xué)院, 四川 成都 611130)

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毛豹皮樟葉水提物的活性成分及其清除亞硝酸鈉和阻斷亞硝胺合成的作用

芶琳a, 王春薇b, 倪蘇b,①, 鐘宣伯b

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué): a. 生命科學(xué)學(xué)院, b. 農(nóng)學(xué)院, 四川 成都 611130)

毛豹皮樟葉; 總多酚; 總黃酮； 清除亞硝酸鈉; 阻斷亞硝胺合成; 半效劑量(ED50)

亞硝酸鹽在食材、食品加工和食品儲(chǔ)存過程中普遍存在，它是亞硝基化合物合成的前體物質(zhì)，在一定條件下亞硝酸鹽極易轉(zhuǎn)化為亞硝胺，二者均可致癌[1-2]，因此，清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成對(duì)于預(yù)防和控制癌癥的發(fā)生具有重要意義。關(guān)于清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成的研究已有較多報(bào)道，一些植物含有的天然活性成分，如植物中所含的多酚和黃酮類物質(zhì)等，具有抗氧化、抗菌、清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成的作用。頂羽菊〔Acroptilonrepens(Linn.) DC.〕[3]、黃花菜(HemerocalliscitrinaBaroni)[4]和簕菜〔Acanthopanaxtrifoliatus(Linn.) Merr.〕[5]等提取物具有清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成的作用；黃俊生[6]從南姜〔Alpiniagalanga(Linn.) Willd.〕表皮中提取的色素也具有較強(qiáng)的清除亞硝酸鈉和阻斷亞硝胺合成活性。

毛豹皮樟〔Litseacoreanavar.lanuginosa(Migo) Yang et P. H. Huang〕為樟科(Lauraceae)木姜子屬(LitseaLam.)植物[7]，其嫩葉經(jīng)加工后為老鷹茶或白茶。毛豹皮樟葉中含有多酚、黃酮和多糖等生物活性成分[8-10]，具有抗氧化、抗病毒和降血糖等作用[11-13]，但關(guān)于毛豹皮樟葉水提物清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成的研究卻鮮見報(bào)道。為此，作者測(cè)定了毛豹皮樟葉水提物中總黃酮和總多酚的含量，并在體外模擬人體胃液(pH 3.0)條件下研究毛豹皮樟葉水提物清除亞硝酸鈉(NaNO2)及阻斷亞硝胺合成的作用，以期為毛豹皮樟資源的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料和方法

1.1材料

供試材料毛豹皮樟葉由四川雅安市名山區(qū)雙河鄉(xiāng)老鷹茶園提供，并經(jīng)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)楊瑞武教授鑒定。新鮮葉曬干后于60 ℃烘干6 h，粉碎并過60目篩，干燥保存、備用。

主要試劑：蘆丁(純度≥95%)購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司；二甲胺水溶液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)33%)為國(guó)產(chǎn)化學(xué)純；沒食子酸、NaNO2、對(duì)氨基苯磺酸、鹽酸萘乙二胺和α-萘胺等其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

主要儀器：FW80型高速萬能粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)；UV-1200型紫外/可見分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)儀器有限公司)；ESJ-B系列多功能電子分析天平(沈陽(yáng)龍騰電子有限公司)；DK-8D三孔電熱恒溫水槽(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；SC-04低速離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司)。

1.2方法

1.2.1葉水提物的制備稱取1.0 g葉粉末樣品，按固液比1∶30(m∶V)加蒸餾水浸潤(rùn)5 min后煮沸5 min，冷卻至室溫， 6 000 r·min-1離心5 min，取上清液；沉淀加30 mL蒸餾水后再煮沸2 min，冷卻至室溫，6 000 r·min-1離心5 min，取上清液，余下沉淀重復(fù)此操作1次。合并3次上清液并用蒸餾水定容至100 mL，配制成質(zhì)量濃度10 mg·mL-1葉水提物溶液。

1.2.2總多酚和總黃酮含量的測(cè)定采用Folin-Ciocalteu 法[14]測(cè)定毛豹皮樟葉水提物中的總多酚含量。以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，于波長(zhǎng)765 nm處測(cè)定吸光值；并以吸光值(Y)為縱坐標(biāo)、沒食子酸質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的線性回歸方程為Y=0.009 4X+0.007 3(R2=0.999 1)。按同法測(cè)定毛豹皮樟葉水提物溶液的吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算總多酚含量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

采用硝酸鋁-亞硝酸鈉法[15]測(cè)定毛豹皮樟葉水提物中的總黃酮含量。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光值；并以吸光值(Y)為縱坐標(biāo)、蘆丁質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的線性回歸方程為Y=11.68X+0.003 9(R2=0.999 5)。按同法測(cè)定毛豹皮樟葉水提物溶液的吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算總黃酮含量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并使用該軟件中的Curve Estimation模塊進(jìn)行曲線擬合，選擇最優(yōu)模型，確定NaNO2清除率和亞硝胺合成阻斷率分別為50%時(shí)毛豹皮樟葉提取物的質(zhì)量濃度(半效劑量ED50)。

2　結(jié)果和分析

2.1葉水提物中總多酚和總黃酮的含量

測(cè)定結(jié)果顯示：毛豹皮樟葉水提物中總多酚含量為4.64%，總黃酮含量為2.96%。

2.2葉水提物對(duì)NaNO2的清除作用

圖1不同質(zhì)量濃度毛豹皮樟葉水提物亞硝酸鈉清除率的變化

Fig. 1Change in sodium nitrite scavenging rate of water extracts with different mass concentrations from leaf ofLitseacoreanavar.lanuginosa(Migo) Yang et P. H. Huang

2.3葉水提物對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用

隨質(zhì)量濃度提高，毛豹皮樟葉水提物對(duì)亞硝胺合成阻斷率的變化趨勢(shì)見圖2。結(jié)果顯示：隨葉水提物質(zhì)量濃度的提高，亞硝胺合成阻斷率逐漸升高；當(dāng)提取物質(zhì)量濃度達(dá)到0.48 mg·mL-1時(shí)，亞硝胺合成阻斷率為63.3%。毛豹皮樟葉水提物的質(zhì)量濃度(X)與亞硝胺合成阻斷率(Y)的擬合方程為Y=-218.631X2+217.543X+9.259(R2=0.997)，據(jù)此方程計(jì)算出亞硝胺合成阻斷率達(dá)50%時(shí)毛豹皮樟葉水提物的質(zhì)量濃度(半效劑量ED50)為0.25 mg·mL-1。

圖2不同質(zhì)量濃度毛豹皮樟葉水提物亞硝胺合成阻斷率的變化

Fig. 2Change in blocking rate of nitrosamine synthesis of water extracts with different mass concentrations from leaf ofLitseacoreanavar.lanuginosa(Migo) Yang et P. H. Huang

3　討　　論

在生物的體內(nèi)和體外系統(tǒng)中多酚和黃酮類成分都具有較強(qiáng)的清除亞硝酸鹽和阻斷亞硝胺合成的作用[18-19]。本研究結(jié)果顯示：毛豹皮樟葉水提物中總多酚和總黃酮的含量分別為4.64%和2.96%，該水提物對(duì)NaNO2的清除作用和對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用均較為明顯；并隨水提物質(zhì)量濃度的提高，NaNO2清除率和亞硝胺合成阻斷率也逐漸升高，表明出一定的量效關(guān)系。據(jù)此推測(cè)毛豹皮樟葉水提物對(duì)亞硝酸鹽的清除作用和對(duì)亞硝胺合成的阻斷作用可能與葉片中所含的多酚和黃酮類成分有關(guān)，但其相關(guān)性有待進(jìn)一步研究。綜上所述，毛豹皮樟葉水提物能有效清除亞硝酸鹽并阻斷亞硝胺的合成，因此，可以將毛豹皮樟葉進(jìn)行深入研究并開發(fā)成相關(guān)保健產(chǎn)品。

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(責(zé)任編輯: 張明霞)

Active components in water extracts from leaf ofLitseacoreanavar.lanuginosaand its effects on scavenging sodium nitrite and blocking nitrosamine synthesis

GOU Lina, WANG Chunweib, NI Sub,①, ZHONG Xuanbob

(SichuanAgriculturalUniversity: a. CollegeofLifeScience, b. CollegeofAgronomy,Chengdu611130, China),J.PlantResour. &Environ., 2016, 25(1): 102-104

Contents of total polyphenols and total flavonoids in water extracts from leaf ofLitseacoreanavar.lanuginosa(Migo) Yang et P. H. Huang were determined, and effects of these water extracts on scavenging sodium nitrite (NaNO2) and blocking nitrosamine synthesis were studied. The results show that contents of total polyphenols and total flavonoids in water extracts from leaf ofL.coreanavar.lanuginosaare 4.64% and 2.96%, respectively. With enhancing of mass concentration of water extracts, both NaNO2scavenging rate and blocking rate of nitrosamine synthesis increase gradually, and there are obvious dose-effect relationships between mass concentration of water extracts with NaNO2scavenging rate and blocking rate of nitrosamine synthesis, their half-effect dose (ED50) are 0.06 and 0.25 mg·mL-1, respectively. It is suggested that the effects of water extracts from leaf ofL.coreanavar.lanuginoseon scavenging NaNO2and blocking nitrosamine synthesis are related to polyphenols and flavonoids in the water extracts.

leaf ofLitseacoreanavar.lanuginosa(Migo) Yang et P. H. Huang; total polyphenols; total flavonoids; scavenging sodium nitrite; blocking nitrosamine synthesis; half-effect dose (ED50)

10.3969/j.issn.1674-7895.2016.01.13

2015-04-02

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30971795)

芶琳(1963—)，女，四川成都人，碩士，副教授，主要從事生物化學(xué)及分子酶學(xué)方面的研究。

S571.9; R284.2

A

1674-7895(2016)01-0102-03