李愛臣，房磊（.吉林化工學(xué)院，吉林吉林32022；2.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林320）

敗醬草多糖對運(yùn)動疲勞大鼠的肝組織保護(hù)作用

李愛臣1，房磊2，*
（1.吉林化工學(xué)院，吉林吉林132022；2.吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，吉林吉林132101）

研究敗醬草多糖（HPP）對肝臟保護(hù)、增強(qiáng)運(yùn)動力、抗疲勞以及提高疲勞恢復(fù)能力。大鼠力竭后，一氧化氮合酶（NOS）活性和NO含量明顯下降，線粒體活性下降，休息后，各生化指標(biāo)恢復(fù)效果差。食用敗醬草多糖大鼠力竭后，同力竭組比較，肝臟抗氧化力、NOS活性以及NO含量、線粒體指標(biāo)都顯著增大；經(jīng)過休息，各指標(biāo)和運(yùn)動前幾乎相同。食用敗醬草多糖能夠有效地提高一氧化氮合酶活性，可提高NO含量，增強(qiáng)運(yùn)動能力，延緩疲勞并增強(qiáng)疲勞恢復(fù)能力，促進(jìn)運(yùn)動后機(jī)體功能恢復(fù)。

敗醬草多糖；保護(hù)肝臟；抗疲勞

敗醬草（Herba Patriniae），又稱澤敗、苦菜等，隸屬于敗醬科多年生草本植物，作為我國重要的中藥材，被廣泛應(yīng)用，具有解毒的功能[1-3]。有學(xué)者研究得出，敗醬草中具有大量的多糖、黃酮等具有生理活性的物質(zhì)，敗醬草提取物有抗疲勞、抑菌以及抗腫瘤的作用[4-6]。還有學(xué)者指出，敗醬草內(nèi)部含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)，如氨基酸、礦物質(zhì)等，由此可知，敗醬草不僅作為藥材應(yīng)用，還可食用。多糖是重要的高分子化合物，活性多糖為有特殊作用的化合物，具有降血糖、降血脂以及抗氧化等多重功能[7-8]。運(yùn)動醫(yī)學(xué)提出，進(jìn)行強(qiáng)度過大的運(yùn)動后會產(chǎn)生大量的自由基損壞機(jī)體，造成機(jī)體組織和細(xì)胞功能下降[9-10]，引起機(jī)體功能發(fā)生障礙，線粒體等強(qiáng)度下降，呼吸變慢，從而加速疲勞，使得機(jī)體過早地產(chǎn)生疲勞感，如果不清除這些自由基，會導(dǎo)致運(yùn)動能力降低，影響健康[11-12]。本文主要研究服用敗醬草多糖后對運(yùn)動機(jī)體的影響，測定其對大鼠肝臟組織抗氧化效果，線粒體活性以及一氧化氮酶活性等。進(jìn)一步分析敗醬草多糖對運(yùn)動機(jī)體的影響，對抗疲勞、抗氧化等效果，為經(jīng)常運(yùn)動的機(jī)體活動作參考。

1　材料與方法

1.1動物、材料與試劑

健康Wistar雄性大鼠50只，質(zhì)量為160 g～200 g，取自吉林大學(xué)動物中心。敗醬草：安國市健仁藥材有限公司；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒、巰基（mercapto group，-SH）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、一氧化氮合酶（nitricoxide synthase，NOS）試劑盒、一氧化氮（nitric oxide，NO）試劑盒、Na+/K+-ATPase試劑盒、Ca2+/Mg2+-ATPase試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.2儀器與設(shè)備

RE-2002旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海圣科儀器有限公司；722N型分光光度計：上海上天精密儀器有限公司；80-1型離心機(jī)：金壇市三和儀器有限公司；GM-33A型真空抽濾泵：廈門森態(tài)儀器儀表有限公司；TL96-2型超聲波粉碎機(jī)：江蘇天翎儀器有限公司；HH-4型恒溫水浴鍋：常州市鴻科儀器廠。

1.3方法

1.3.1HPP的制備

取一定量的洗凈烘干后的敗醬草皮，進(jìn)行粉碎，再加入95%的乙醇浸泡20 min，對濾渣進(jìn)行水提，2 h，提取溫度為80℃，過濾后，采用Sevag法除蛋白質(zhì)，進(jìn)行透析24 h，用丙酮進(jìn)行洗滌，冷凍干燥后得HPP。

1.3.2動物分組

Wistar雄性大鼠正常飼養(yǎng)。將大鼠隨機(jī)分成5組，每組10只：運(yùn)動模型組（A組）、力竭組（B組）、運(yùn)動后休息組（C組）、HPP力竭組（D組）、HPP運(yùn)動后休息組（E組）。HPP組每天灌胃多糖水溶液100 mg/（kg·d），采用高效液相色譜對HPP進(jìn)行組成分析，得出HPP是一種含蛋白質(zhì)的多糖，蛋白質(zhì)含量為13.26%，單糖主要由D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖組成，其物質(zhì)的量比0.53∶0.35∶3.18∶1∶2.72∶1.27；A、B、C組分別灌胃生理鹽水，持續(xù)30 d，末次灌胃30 min后進(jìn)行測定相應(yīng)指標(biāo)。

1.3.3運(yùn)動模型的建立

保持全部大鼠同時進(jìn)行30 d的跑臺運(yùn)動訓(xùn)練，運(yùn)動方案應(yīng)用Bedford等[15]的跑臺運(yùn)動訓(xùn)練模型，見表1。

表1　大鼠運(yùn)動方案Table 1　Exercise protocols of experimentalrats

持續(xù)運(yùn)動30 d，每天運(yùn)動時以15 m/min的速率做5 min左右的適應(yīng)性運(yùn)動后正式運(yùn)動。取規(guī)定量的HPP于生理鹽水中混勻，于每天運(yùn)動后進(jìn)行灌胃，劑量為2 mL。D、E組灌胃HPP，A、B、C 3組灌胃等量生理鹽水。在第30 d時，A組不運(yùn)動，安靜時處死，作為持續(xù)運(yùn)動的對照組；B、D組大鼠運(yùn)動至力竭，并立即處死；C、E組大鼠運(yùn)動至力竭后休息24 h后處死[13-15]。

1.3.4取材及樣品制備

大鼠在處理前需要禁食10 h，處理后應(yīng)及時地進(jìn)行指標(biāo)檢測，包括肝臟線粒體以及漿液的制取。大鼠斷頭處死后，及時取出肝臟，用冷卻的液體（含250 mmol/L蔗糖、1 mmol/L EDTA、10 mmol/L Tris-HCl （pH 7.5））洗凈血液，除去多余部分，用濾紙吸去表面水分，取肝組織于燒杯中，將其剪碎，制作成肝勻漿，4℃、2 000 r/min離心15 min，去除沉淀，繼續(xù)將上清液以10 000 r/min的速度繼續(xù)離心15 min，本次沉淀即是肝臟線粒體。利用超聲波將肝臟線粒體破碎，備用。1.3.5指標(biāo)測定方法

力竭時間測定：B、C、D、E組大鼠按照最后5 d強(qiáng)度運(yùn)動至力竭，記錄力竭需要時間。大鼠運(yùn)動力竭判斷標(biāo)準(zhǔn)：運(yùn)動時大鼠不能達(dá)到規(guī)定速度，臀部置于籠體后壁，后肢體隨皮帶自然轉(zhuǎn)到達(dá)到30 s，采用相應(yīng)刺激手段進(jìn)行驅(qū)趕沒有效果，即可判斷為力竭。具體表現(xiàn)為呼吸加速、精神困倦、低頭、刺激后不動。-SH、MDA、NO含量及SOD、GSH-Px、NOS、Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力等指標(biāo)測定均嚴(yán)格按照試劑盒說明書方法進(jìn)行。

1.4數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用t檢驗，試驗數(shù)據(jù)用x±s表示。

2　結(jié)果與分析

2.1敗醬草多糖對大鼠力竭和休息24 h后肝組織抗氧化能力的影響

敗醬草多糖對大鼠力竭和休息24 h后肝組織抗氧化能力的影響見表2。

SOD及GSH-Px作為非常重要的兩大抗氧化酶類，能夠去除自由基等。-SH能夠保證體內(nèi)基本功能，能夠防止自由基對機(jī)體的傷害。MDA量的大小能夠表示體內(nèi)氧化程度。根據(jù)表2能夠得出，運(yùn)動力竭后，B組動物肝臟中GSH-Px活力、SOD和-SH含量明顯比A組低（P＜0.05），MDA值要比A組高（P＜0.05）。C組動物肝臟中GSH-Px活力、SOD和-SH含量要比A組低（P＜0.05），MDA含量比A組高（P＜0.05）。通過D組動物實驗?zāi)軌蚩闯?，與B組相比，有明顯恢復(fù)，但相應(yīng)指標(biāo)要比對照組差，E組動物肝臟GSH-Px活力、SOD 和-SH含量要比B、C組高（P＜0.05），MDA含量比B、C、D組低（P＜0.05）。故根據(jù)實驗結(jié)果可知，敗醬草多糖能夠緩解運(yùn)動造成的過氧化，并能加快運(yùn)動傷害后的恢復(fù)。

表2　各組大鼠肝組織抗氧化能力的比較（x±s，n＝10）Table 2　Comparison ofantioxidant capacity of rats liver tissues in each group（x±s，n=10）

2.2敗醬草多糖對耐力訓(xùn)練大鼠肝組織NO-NOS體系和肝線粒體ATPase活性的影響

敗醬草多糖對耐力訓(xùn)練大鼠肝組織NO-NOS體系和肝線粒體ATPase活性的影響見表3。

表3　各組大鼠肝組織NO-NOS和肝線粒體ATPase活性的比較（x±s，n＝10）Table 3　Comparison of NO-NOS ofrats liver tissue and ATPase activity ofrats liver mitochondria in each group（x±s，n=10）

NO能夠增強(qiáng)血管的舒張力，改良體內(nèi)組織循環(huán)和代謝，能夠增強(qiáng)代謝物質(zhì)的運(yùn)輸能力。根據(jù)表3能夠得出，運(yùn)動大鼠力竭后，肝臟NOS活力及NO含量、肝線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；休息24 h，肝臟中NOS活力及NO含量、肝線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力加強(qiáng)，但沒有達(dá)到最佳狀態(tài)（P＜0.05）。食用敗醬草多糖大鼠運(yùn)動力竭后，肝臟中NOS活力及NO含量、線粒體Na+/K+-ATPase、Ca2+/Mg2+-ATPase活力要比A組低（P＜0.05），比B組高（P＜0.05）；休息24 h后，肝臟中NOS活力、NO含量和線粒體指標(biāo)幾乎與A組相當(dāng)，和B組相比要升高（P＜0.01），和C、D組相比顯著升高（P＜0.05）。根據(jù)結(jié)果可知，食用敗醬草多糖能夠促進(jìn)體內(nèi)代謝物質(zhì)的平衡，促進(jìn)生理性恢復(fù)。防止自由基對肝臟細(xì)胞的作用。

2.3敗醬草多糖對耐力訓(xùn)練大鼠跑臺運(yùn)動力竭時間的影響

敗醬草多糖對耐力訓(xùn)練大鼠跑臺運(yùn)動力竭時間的影響見表4。

根據(jù)表4能夠得出，多糖力竭組（D）食用敗醬草多糖大鼠力竭時間明顯比運(yùn)動力竭組（B）要長，而且時間上延長22.52%，具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。根據(jù)實驗可知，給大鼠服用多糖后起到了很大的作用，力竭時間顯著延長，故敗醬草多糖能夠延緩運(yùn)動疲勞，能夠延長運(yùn)動時間。

表4　大鼠運(yùn)動力竭時間比較（x±s，n＝10）Table 4　Comparison ofexhaustive exercise time（x±s，n=10）

3　結(jié)論

根據(jù)試驗結(jié)果，大鼠食用敗醬草多糖后，GSH-Px活力、SOD和-SH含量要比普通組高（P＜0.05），MDA含量比普通組低（P＜0.05）。故根據(jù)實驗結(jié)果可知，敗醬草多糖能夠緩解運(yùn)動造成的過氧化，并能加快運(yùn)動傷害后的恢復(fù)。肝臟中NOS活力及NO含量、線粒體活力要比A組低（P＜0.05），比B組高（P＜0.05）；休息24 h后，肝臟中NOS活力、NO含量和線粒體指標(biāo)幾乎與A組相當(dāng)，和B組相比要升高（P＜0.01），和C、D組相比顯著升高（P＜0.05），食用敗醬草多糖能夠促進(jìn)體內(nèi)代謝物質(zhì)的平衡，促進(jìn)生理性恢復(fù)。防止自由基對肝臟細(xì)胞的作用。多糖力竭組（D）食用敗醬草多糖大鼠運(yùn)動后力竭時間明顯比運(yùn)動力竭組（B）要長，而且時間上延長22.52%，根據(jù)實驗可知，給大鼠服用多糖后對肝組織起到了較顯著的保護(hù)作用，力竭時間顯著延長，同時敗醬草多糖能夠延緩運(yùn)動疲勞，能夠延長運(yùn)動時間。

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The Protective Effect of Herba Patriniae Polysaccharide on Fatigue Rats Liver Tissue

LIAi-chen1，F(xiàn)ANG Lei2，*
（1.Jilin Institute of Chemical Technology，Jilin 132022，Jilin，China；2.Jilin Agriculture Science and Technology College，Jilin 132101，Jilin，China）

Liver protection，enhancementofmoving force，anti-fatigue and improving the fatigue recovery capability of Herba patriniae polysaccharide（HPP）were researched.After exhaustion，the activity ofnitric oxide synthase（NOS）and the contentofNO decreased obviously，and the activity ofmitochondria decreased，and all the biochemical parameters were poor recovery after rest.Compared with the exhausted group，the antioxidant capacity of liver，the content of NO，and the mitochondria index increased significantly after eating HPP.And after a break，all the indicators were nearly the same as before exercise.Eating HPP could effectively increase the activity of NOS as well as the content of NO，enhance exercise ability，delay fatigue，improve fatigue resilience，and promote body's functionalrecovery after doing exercise.

Herba patriniae polysaccharide；liver protection；anti-fatigue

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.12.041

李愛臣（1983—），男（漢），講師，碩士，研究方向：運(yùn)動營養(yǎng)保健。

房磊（1983—）男，講師，碩士，研究方向：運(yùn)動產(chǎn)品開發(fā)。

2016-03-28