肖邦明，祝興旺，董理鳴，劉屹立，王　平

（中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院泌尿外科，沈陽110032）

SRSF1和Survivin在前列腺癌組織中的表達及其與病理分級的相關性

肖邦明，祝興旺，董理鳴，劉屹立，王平

（中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院泌尿外科，沈陽110032）

目的檢測人絲氨酸/精氨酸富有剪接因子1（SRSF1）和凋亡抑制因子（Survivin）在前列腺癌組織中的表達，并探討兩者的相關性及其與前列腺癌病理分級的關系，從而初步提出前列腺癌治療中的新靶點。方法采用免疫組織化學SP法檢測SRSF1、Survivin蛋白在12例前列腺癌組織和8例良性前列腺增生組織中的表達，分析其與病理分級的關系，并探討兩者的相關性。結(jié)果SRSF1蛋白在前列腺癌組織中的細胞陽性表達率為（76.37±5.06）%，顯著高于良性前列腺增生［（11.30±1.09）%，P＜0.05］，Survivin蛋白在前列腺癌組織中的細胞陽性表達率為（86.93±3.21）%，顯著高于良性前列腺增生［（17.67±1.99）%，P＜0.05］。SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌組織中的表達與病理Gleason分級呈正相關，并且二者有明顯的相關性（P＜0.05）。結(jié)論SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌組織中均有高表達，比在良性前列腺增生組織中明顯增加；并且SRSF1和Survivin蛋白的陽性表達與前列腺癌Gleason評分呈正相關，同時前列腺癌組織中Survivin蛋白表達量的升高與SRSF1蛋白表達量的升高呈正相關，初步證明了SRSF1的作用可能是通過上調(diào)Survivin的表達，從而促進了前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展。

前列腺癌；良性前列腺增生；人絲氨酸/精氨酸富有剪接因子1；凋亡抑制因子；免疫組織化學

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前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，近年來發(fā)病率呈上升趨勢。目前，前列腺癌的治療仍然是亟待解決的重要問題，近年來分子生物學研究［1-2］發(fā)現(xiàn)去勢治療、放療及某些化療藥物都是通過誘導前列腺癌細胞凋亡發(fā)揮作用的。因此，從凋亡途徑來抑制前列腺癌治療抵抗具有一定研究價值。凋亡抑制因子（Survivin）是凋亡抑制蛋白家族的新成員，具有腫瘤特異性，只表達于腫瘤和胚胎組織。研究［3］發(fā)現(xiàn)它在前列腺癌細胞中上調(diào)表達，在正常分化組織中不表達，并與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預后均有密切關系。人絲氨酸/精氨酸富有剪接因子1（serine/arginine rich splicing factor 1，SRSF1）為SR蛋白家族的原型成員，研究［4］發(fā)現(xiàn)SRSF1為原癌蛋白，并在肺癌、乳腺癌及白血病等人類腫瘤細胞中存在過表達現(xiàn)象，它通過參與前體mRNA的選擇性剪接與加工、胞內(nèi)定位與運輸?shù)壬磉^程，控制下游相關蛋白的表達與功能，從而參與多種復雜的生物學通路，發(fā)揮致癌作用。研究［5］報道，在肺癌細胞中，SRSF1能增強Survivin的翻譯與活化，并且可以增加Survivin蛋白的穩(wěn)定性，從而參與肺癌的發(fā)生發(fā)展。目前關于SRSF1在前列腺癌中表達的相關研究很少，本研究旨在通過免疫組織化學的方法來探討SRSF1和Survivin在前列腺癌中的表達及與前列腺癌臨床病理特征的關系，并探討兩者的相關性。

1　材料與方法

1.1標本來源

收集中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院2012年5月至2014年9月經(jīng)直腸前列腺穿刺或者手術切除的12例前列腺癌標本，12例前列腺癌石蠟標本均調(diào)出對應存檔HE染色切片，經(jīng)有經(jīng)驗病理科醫(yī)師重新閱片后予確診，病理資料完整，取病理前均未進行放化療及內(nèi)分泌治療。患者年齡53～73歲，中位年齡62歲，根據(jù)Gleason評分系統(tǒng)進行病理分級，高分化組（1～4分）5例，低分化組（5～10分）7例。

同時收集8例2014年于我院行手術切除，經(jīng)病理證實為良性前列腺增生的石蠟標本作為對照，8例良性前列腺增生的石蠟標本均調(diào)出對應存檔HE染色切片，經(jīng)有經(jīng)驗病理科醫(yī)師重新閱片后予確診?；颊吣挲g52～86歲，中位年齡71歲。

1.2免疫組織化學檢測

SRSF1一抗SF2/ASF（C-19）購自Santa公司，工作濃度1∶100；Survivin一抗Anti-Survivin antibody ab24479購自Abcam公司，工作濃度1∶1 000；羊的免疫組化二抗試劑盒、兔的羊疫組化二抗試劑盒、DAB染色劑，購自福州邁新公司。按照免疫組化SP法說明書操作，采用10 mmL/L的檸檬酸抗原修復液（pH 6.0）高溫修復抗原3 min，以PBS替代一抗作為陰性對照。

1.3結(jié)果判定

SRSF1以細胞核有黃至棕黃色顆粒者為陽性細胞，Survivin以細胞核或細胞質(zhì)有黃至棕黃色顆粒為陽性細胞。使用Nikon eclipse 80i顯微鏡進行圖像采集和計數(shù)，在400倍鏡下計數(shù)至少5個視野，取其平均值作為該病例的細胞陽性率。

1.4統(tǒng)計學處理

采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，細胞陽性率的比較采用t檢驗進行分析，不同指標的相關性采用Spearman等級相關分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌組織和前列腺良性增生組織中的表達

2.1.1SRSF1蛋白在前列腺癌組織中的表達：前列腺癌組織中SRSF1蛋白在癌細胞核染色較多，呈棕黃色，周圍正常組織未見著色。SRSF1蛋白在前列腺癌組織中的細胞陽性表達率顯著高于良性前列腺增生［（76.37±5.06）%vs（11.30±1.09）%，P＜0.05］，見圖1。

2.1.2Survivin蛋白在前列腺癌組織中的表達：前列腺癌組織中Survivin蛋白在癌細胞核及胞質(zhì)中均有染色，但以胞質(zhì)彌漫性分布為主，呈棕黃色。Survivin蛋白在前列腺癌組織中的細胞陽性表達率顯著高于良性前列腺增生［（86.93±3.21）%vs（17.67±1.99）%，P＜0.05］，見圖2。

圖1　SRSF1在不同分化前列腺組織中的表達×400Fig.1 Expression of SRSF1 in different degree of prostate lesions×400

2.2SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌組織中的表達與病理Gleason分級的關系

圖2　Survivin在分化不同前列腺組織中的表達×400Fig.2 Expression of Survivin in different degree of prostate lesions×400

2.2.1SRSF1蛋白在前列腺癌組織中的表達與病理Gleason分級的關系：SRSF1蛋白在前列腺癌組織低分化組的陽性細胞表達率顯著高于高分化組［（81.81±6.78）%vs（68.75±2.09）%，P＜0.05］，見圖1B、1C。

2.2.2Survivin蛋白在前列腺癌組織中的表達與病理Gleason分級的關系：Survivin蛋白在前列腺癌組織低分化組的陽性細胞表達率顯著高于高分化組［（90.36±4.30）%vs（82.14±1.58）%，P＜0.05］，見圖2B、2C。

2.3SRSF1和Survivin蛋白在前列腺癌組織中表達的相關性

Spearman等級相關分析表明，SRSF1和Survivin蛋白的表達具有正相關性性（r=0.9779，r的t檢驗，t=14.81，P＜0.05）。

3　討論

SRSF1是SR蛋白家族的一員，作為Pre-mRNA的可變剪接因子，在維持細胞的基本生命活力方面發(fā)揮重要作用［4］。近來研究［6］表明，SRSF1為原癌蛋白，在肺癌、乳腺癌、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及白血病等人類腫瘤細胞中存在過表達現(xiàn)象。Li等［7］研究發(fā)現(xiàn)下調(diào)B淋巴細胞系的SRSF1表達，會使細胞分裂停止在G2期，同時誘導細胞凋亡的發(fā)生，而SRSF1的過表達對于維持腫瘤的早期穩(wěn)定性非常重要?？梢?，SRSF1能通過調(diào)節(jié)細胞的凋亡程序，參與到腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中。SRSF1在前列腺癌中的表達相關研究目前很少，僅Mavrou等［8］在研究中指出SRSF1在前列腺癌組織中高表達，但在正常前列腺組織及前列腺上皮內(nèi)瘤組織中未見明顯增高。本研究證實了SRSF1在前列腺癌中存在高表達，同時還發(fā)現(xiàn)SRSF1的陽性表達率在前列腺良性增生中表達極低（11.30%），在前列腺癌組織中高達76.37%，并與前列腺癌病理Gleason評分呈正相關（P＜0.05），即癌細胞分化越差，SRSF1蛋白的表達就越高，這提示SRSF1的異常表達能影響前列腺癌的發(fā)展，與參考文獻的報道是一致的。

Survivin蛋白是凋亡抑制蛋白家族中的成員之一［9］，在肺癌、前列腺癌、胃腸道腫瘤、淋巴細胞瘤等多種腫瘤中研究顯示Survivin是迄今為止發(fā)現(xiàn)的作用最強，同時也是該家族成員中最小的1個凋亡因子。Survivin可以使細胞不受凋亡誘導因子的刺激而保持有絲分裂，甚至可以使細胞不受放療及化療的影響［10］。Survivin在正常成人組織中幾乎不能發(fā)現(xiàn)，但在人類腫瘤組織中卻存在高表達，包括前列腺癌［11］。國內(nèi)高吳陽等［12］報道，Survivin蛋白在前列腺癌組織中的表達率為80.59%，且與病理分級、臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移相關（P＜0.05），而在正常前列腺組織中未見明顯表達。本研究證實了Survivin在前列腺癌中的高表達，同時還發(fā)現(xiàn)Survivin的陽性表達率在前列腺良性增生中表達極低（17.67%），在前列腺癌組織中高達86.93%，并與前列腺癌病理Gleason評分呈正相關（P＜0.05），這表明在前列腺癌組織中Survivin表達越強，癌細胞的分化就越差，提示Survivin的異常表達程度與前列腺癌的惡性程度呈正相關。這與目前的文獻報道是相符合的。

目前的研究僅報道了SRSF1或者Survivin在前列腺癌中的表達，二者的相關性研究鮮有報道，本研究對SRSF1和Survivin的表達進行了相關性分析，結(jié)果呈正相關，即隨著SRSF1蛋白的表達強度增加，Survivin蛋白的表達強度也增加，二者可能在前列腺癌細胞抗凋亡過程中發(fā)揮著協(xié)同作用，但二者如何協(xié)同作用機制尚不清楚，這也是日后的研究重點。目前在腫瘤細胞中，有研究［13］顯示Survivin蛋白的高表達與mTOR通路有關。Jin等［14］報道在肺癌中，mTOR通路可以通過煙草等致癌物質(zhì)來調(diào)節(jié)Survivin的蛋白合成。在前列腺癌中，被胰島素生長因子Ⅰ激活的mTOR通路，已經(jīng)被證實能夠維持Survivin的穩(wěn)定性與增強其轉(zhuǎn)錄［15］。又有研究［5］指出，mTOR通路的激活發(fā)生在mRNA水平，同時這些mRNA的剪接加工有SRSF1剪接因子的參與［16］，Ezponda等［5］研究報道在非小細胞肺癌中，Survivin為SRSF1參與抑制細胞凋亡過程中的一個中介物質(zhì)，SRSF1的過表達可以增強Survivin的mRNA轉(zhuǎn)錄表達，同時可以維持在激活mTOR通路時Survivin的穩(wěn)定性。這與本文SRSF1和Survivin在前列腺癌中的表達相關性研究一致，基于以上文獻報道和本研究結(jié)果大膽猜測：在前列腺癌中，SRSF1扮演著Survivin蛋白轉(zhuǎn)錄表達的上游調(diào)節(jié)角色，SRSF1蛋白的表達能夠調(diào)控Survivin蛋白的表達，從而在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。同時SRSF1也有希望成為前列腺癌治療中的新靶點。

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（編輯于溪）

Correlations between the Expressions of SRSF1 and Survivn and the pathological Features of prostate Cancer

XIAO Bangming，ZHU Xingwang，DONG Liming，LIU Yili，WANG Ping
（Department of Urinary Surgery，The fourth Affiliated Hospital of China Medical University，Shenyang 110032，China）

Objective To test the expression of serine/arginine rich splicing factor 1（SRSF1）and apoptosis inhibiting factor（Survivin）in prostate cancer，and study their correlation with the pathological features of prostate cancer，so as to put forward the new targets in the treatment of prostate cancer.Methods SRSF1 and Survivin protein was determined in 20 prostate tissue samples including prostate cancer（n=12）and benign prostatic hyperplasia（n=8）by immunohistochemical SP method.SRSF1 and Survivin was correlated to pathological features，and both the relevance was analyzed（no related reports at home and abroad）.Results The positive expression rate of SRSF1 protein in prostate cancer tissue cells was 76.37± 5.06%，which was significantly higher than that of benign prostatic hyperplasia（11.30%±1.09%，P＜0.05）；the positive expression rate of Survivin protein in prostate cancer tissue cells was 86.93%±3.21%，which was significantly higher than that of benign prostatic hyperplasia（17.67%±1.99%，P＜0.05）；SRSF1 and Survivin protein expressed in prostate cancer organizations and were positively correlated to pathological Gleason grading，and there was significant correlation（P＜0.05）.Conclusion SRSF1 and Survivin protein were highly expressed in adenocarcinoma tissue，which were significantly increased than that of benign hyperplasia of prostate tissue.The positive expression SRSF1 and Survivin protein were positively correlated to pathological Gleason grading.The expression of Survivin protein was elevated with the expression of SRSF1 protein in prostate cancer. These preliminary evidence indicated that SRSF1 may up-regulate the expression of Survivin，and thus promote the occurrence and development of prostate cancer.

prostate cancer；benign prostatic hyperplasia；serine/arginine rich splicing factor 1；Survivin；immunohistochemical

R737.25

A

0258-4646（2016）05-0452-04

10.12007/j.issn.0258-4646.2016.05.018

肖邦明（1988-），男，碩士研究生.

王平，E-mail：cmu4h-wp@126.com

2015-05-28

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