黃　菁，鄭美玲，王玉玨，于　庭

（吉林大學第二醫(yī)院檢驗科，長春130041）

尿腎損傷分子1、血清胱抑素C和尿中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白預(yù)測子癇前期發(fā)病和早期腎損傷的價值

黃菁，鄭美玲，王玉玨，于庭

（吉林大學第二醫(yī)院檢驗科，長春130041）

目的探討新型生物學標志物尿腎損傷分子1（KIM-1）、血清胱抑素C和尿中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白（NGAL）與子癇前期的關(guān)系及預(yù)測子癇前期發(fā)病和早期腎損傷的價值。方法選擇2014年10月至2015年7月在吉林大學第二醫(yī)院住院的30例重度子癇前期孕婦、30例輕度子癇前期孕婦作為子癇前期組，并選取同期住院足月分娩的60例健康孕婦作為對照組。采用ELISA法測定尿KIM-1和尿NGAL，采用免疫濁度法測定血清胱抑素C。結(jié)果子癇前期組孕婦的尿KIM-1、尿NGAL、血清胱抑素C水平明顯高于對照組（均P＜0.05），隨著病情進展各指標均逐漸升高。體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、腎小球濾過率（eGFR）、尿蛋白/肌酐比值、尿KIM-1、血清胱抑素C和尿NGAL是子癇前期發(fā)生的危險因素；尿KIM-1、血清胱抑素C、尿NGAL及聯(lián)合預(yù)測因子作為子癇前期早期腎損傷篩查指標的靈敏度分別為83.3%、75.0%、88.9%、96.8%；特異度分別為72.7%、70.0%、75.6%、86.4%。結(jié)論尿KIM-1、血清胱抑素C和尿NGAL的水平可反映子癇前期的病情進展和子癇前期腎損傷的程度。尿KIM-1、血清胱抑素C、尿NGAL聯(lián)合檢測對子癇前期早期腎損傷有更高的預(yù)測價值。

子癇前期；腎損傷分子1；血清胱抑素C；脂質(zhì)運載蛋白，中性粒細胞明膠酶相關(guān)性

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子癇前期（preecalampsia，PE）是妊娠期特有的高血壓疾病，常發(fā)生于妊娠20周以后，該病以高血壓，蛋白尿和腎、肝、腦、心等多器官系統(tǒng)損害為主要表現(xiàn)，常導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩或胎兒死亡。PE最常累及腎臟，引起腎小球毛細血管通透性增高，尿蛋白增加等腎功能損害［1］。快速診斷和早期治療PE腎損傷對于保護腎功能和預(yù)防腎損傷十分必要。近年來，尿腎損傷分子1（kidney injury molecule-1，KIM-1）、尿中性粒細胞明膠酶相關(guān)性脂質(zhì)運載蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL）和血清胱抑素C等標志物對腎損傷的診斷價值越來越引起廣泛關(guān)注。本研究對PE尿KIM-1、尿NGAL及血清胱抑素C進行檢測，分析其與24 h尿蛋白、血尿酸、腎小球濾過率（estimated glomerular filtration rate，eGFR）和血肌酐、血尿素、尿蛋白/肌酐比值的相關(guān)性，分析評估其對PE早期腎損傷的診斷效能，探討尿KIM-1、尿NGAL、血清胱抑素C與PE發(fā)病的關(guān)系及對PE早期腎損傷診斷的預(yù)測價值。

1　材料與方法

1.1研究對象及分組

選擇2014年10月至2015年7月在吉林大學第二醫(yī)院住院的孕婦120例，均為單胎妊娠，年齡24～36歲，孕周24～39周。PE孕婦60例，其中重度PE（severe preecalampsia，SPE）30例（SPE組），入院時收縮壓為（165±16）mmHg，舒張壓為（104±11）mmHg；輕度PE（mild preecalampsia，MPE）30例（MPE組），入院時收縮壓為（138±13）mmHg，舒張壓為（95±10）mmHg。同期住院足月分娩的健康孕婦60例作為對照組，入院時收縮壓為（116±10）mmHg，舒張壓為（75±7）mmHg。PE的診斷標準參照文獻［2］。排除標準：孕前有高血壓，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕等風濕免疫性疾病，肝臟、腎臟等全身性疾病或慢性消耗性疾病，糖尿病、甲狀腺功能亢進、原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進等其他內(nèi)分泌疾??；腫瘤、結(jié)核等病史，長期吸煙飲酒，子癇前期確診前服用降血壓及改善心血管功能的藥物；妊娠合并腎臟疾病、妊娠期糖尿病、胎兒畸形。

1.2尿液和血清樣本收集與處理

收集中段尿樣本20.0 mL置于無菌容器，4℃ 3 000 g離心15 min分離去除沉渣。制備的上清液每1.5 mL分裝在無菌的離心管中，加入5 μL蛋白酶抑制劑存儲在-80℃冰箱中待測。收集5.0 mL空腹血清樣品，4℃1 500 g離心15 min。血清置于無菌的離心管中-80℃儲存待測。樣品均在使用任何藥物前采集，所有樣品只解凍1次。

1.3檢測方法

血清胱抑素C采用免疫濁度法，利用雅培C12000全自動生化分析儀及相關(guān)配套試劑進行測定。KIM-1和NGAL試劑購自R&D Systems公司，尿KIM-1和尿NGAL采用ELISA法測定，結(jié)果在450 nm處由Multiskan公司Mirco酶標儀測定并與標準曲線比較。各組均常規(guī)測量收縮壓、舒張壓、腎功能（血尿素、血尿酸、血肌酐、eGFR）、24 h尿蛋白總量和尿蛋白/肌酐比值。

1.4統(tǒng)計學方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件，計量資料以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析，并對單因素分析有統(tǒng)計意義的因素進行多因素的逐步logistic回歸分析；應(yīng)用Pearson相關(guān)分析尿KIM-1、血清胱抑素C和尿NGAL與其他指標的相關(guān)性，根據(jù)各單項血清指標的預(yù)測界值應(yīng)用logistic方程建立聯(lián)合預(yù)測因子并繪制ROC曲線。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.13組患者一般資料比較

結(jié)果如表1所示，MPE組、SPE組平均孕周低于對照組，而體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）明顯高于對照組，SPE患者更明顯，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）；與對照組比較，MPE組、SPE組24 h尿蛋白、eGFR、尿蛋白/肌酐比值、尿酸以及新生兒體質(zhì)量、身高的差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。

表1　3組患者一般資料比較Tab.1 Patients' characteristics and clinical outcomes

2.23組患者尿KIM-1、血清胱抑素C和尿NGAL水平比較

結(jié)果顯示，MPE組、SPE組尿KIM-1、血清胱抑素C以及尿NGAL水平與對照組比較均明顯增加（P分別為0.001、0.013、0.002）；MPE組與SPE組相比尿NGAL、尿KIM-1和血清胱抑素C水平均明顯增加（P分別為0.009、0.002、0.018），見表2。

表2　3組尿KIM-1、血清胱抑素C和尿NGAL比較（x±s）Tab.2 Comparison of urine KIM-1，serum cystyatin C and urine NGAL among 3 groups（x±s）

2.3PE危險因素的logistics分析

將單因素分析具有統(tǒng)計意義的因素進行多因素的逐步logistics回歸分析。結(jié)果顯示，BMI、 eGFR、尿蛋白/肌酐比值、尿KIM-1、血清胱抑素C、尿NGAL是PE發(fā)生的獨立危險因素。見表3。

2.4尿KIM-1、血清胱抑素C和尿NGAL和聯(lián)合檢測因子在PE早期腎損傷診斷中的特點和診斷效能分析

表3　子癇前期危險因素的logistic分析Tab.3 Multivariate logistic regression analysis for preecalampsia patients

以尿KIM-1、血清胱抑素C、尿NGAL和聯(lián)合檢測因子作為檢驗變量，以PE腎損傷［eGFR＜90 mL/（min·1.73m2）］作為狀態(tài)變量繪制ROC曲線，得出預(yù)測價值最高的總阻力分值作為PE診斷的臨界值。尿NGAL、血清胱抑素C、尿KIM-1、聯(lián)合檢測因子的ROC曲線下面積分別為0.831（95%CI 0.686～0.891，P＜0.01）、0.755（95%CI 0.652～0.864，P＜0.01）、0.872（95%CI 0.705～0.901，P＜0.01）、0.966（95%CI 0.882～0.978，P＜0.01）。尿KIM-1、血清胱抑素C、尿NGAL、聯(lián)合預(yù)測因子對PE早期腎損傷均有預(yù)測價值（P均＜0.05），聯(lián)合預(yù)測因子的敏感性和特異性明顯提高。見表4。

3　討論

PE是妊娠期特有的多器官系統(tǒng)損害的高危疾病，常最先累及腎臟，引起尿蛋白含量的升高，這可能是近端腎小管功能進一步損害的結(jié)果［1］。研究顯示KIM-1、血清胱抑素C、NGAL較血肌酐、eGFR、24 h尿蛋白等更能精確反映腎小管損傷［3］。大量臨床試驗［4］表明KIM-1作為腎小管上皮損傷的特異性標志物在急性腎損傷中增加。本研究發(fā)現(xiàn)尿KIM-1在PE組中均顯著高于對照組（P＜0.01），且隨著病情進展尿KIM-1的濃度也逐漸升高，以SPE時濃度最高。說明尿KIM-1可以提示PE腎損傷的早期病變。同時進一步證實KIM-1參與腎小管上皮細胞的早期損傷和修復(fù)，具有黏附、凋亡細胞清除和參與免疫反應(yīng)和維持腎小管正常結(jié)構(gòu)等功能［5］。

表4　在子癇前期早期腎損傷診斷中尿KIM-1、血清胱抑素C、尿NGAL和聯(lián)合檢測因子的診斷效能評價Tab.4 The best cut-off value，sensitivity and specificity of kidney injury markers

血清胱抑素C作為早期腎功能損傷的敏感指標能準確反映腎小球濾過率［6］。國內(nèi)外大量研究［7-8］顯示MPE的孕婦在孕早期血清胱抑素C明顯高于正常對照組，對PE的早期診斷及監(jiān)測發(fā)展趨勢具有一定價值。本實驗也證實PE組血清胱抑素C水平均顯著高于對照組（P＜0.05），隨著病情進展血清胱抑素C的濃度也逐漸升高，以SPE時濃度最高。

當發(fā)生腎缺血灌注損傷時，腎小管上皮細胞內(nèi)的NGAL會在短期內(nèi)應(yīng)激性的升高，通過降低腎小球的超濾液量而減少腎小球濾過率［8］。有研究［9-10］表明PE孕婦尿NGAL水平明顯高于同期正常妊娠婦女，與MPE和SPE比較差異仍有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。本實驗研究顯示SPE患者的尿NGAL、血肌酐、尿素水平均顯著高于對照組和MPE，但MPE僅NGAL明顯高于對照組，而肌酐和尿素比較無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），說明在腎小管發(fā)生輕度病變時NGAL預(yù)測腎損傷的敏感性高于肌酐和尿素。因此，尿NGAL不僅可作為預(yù)測PE發(fā)病的指標，更可反映PE疾病的嚴重程度。

綜上所述，尿KIM-1、血清胱抑素C和尿NGAL水平反映PE病情進展和PE腎損傷程度，對PE腎損傷具有一定的診斷價值。尿KIM-1和尿NGAL對PE早期腎損傷的診斷價值明顯優(yōu)于血清胱抑素C。但尿KIM-1、血清胱抑素C與尿NGAL聯(lián)合更能預(yù)測PE早期腎損傷，但由于本研究樣本例數(shù)較少，此結(jié)論還需要進一步的臨床研究及實踐來證實。

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（編輯武玉欣）

Clinical Significance of Urinary Kidney Injury Molecule-1，Serum Cystatin Cand Urinary Neutrophil Gelatinase-associated Lipocalin in the prediction of Early Kidney Damage in preeclampsia

HUANG Jing，ZHENG Meiling，WANG Yujue，YU Ting
（Department of Laboratory，The Second Hospital，Jilin University，Changchun 130041，China）

Objective To investigate the relationship between serum cystain C，urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin（NGAL），urinary kidney injury molecule-1（KIM-1）and preeclampsia，and explore the value in predicting preeclampsia and early kidney damage.Methods A total of 30 cases of pregnant women with severe preeclampsia，30 cases of mild preeclampsia and 60 cases of healthy pregnant women admitted in the Second Hospital of Jilin University from October 2014 to July 2015 were enrolled for the study.ELISA was performed to check urinary KIM-1 and urinary NGAL，and the serum cystatin C was detected by immune turbidity method.Results KIM-1，NGAL，serum cystatin C in the preeclampsia were significantly higher than the normal control group（P＜0.05）.In addition，with the development of their concentrations，the progression of preeclampsia gradually rise；BMI，e-GFR，urine protein/creatinine ratio，KIM-1，serum scystatin C and NGAL are the risk factors for preeclampsia；uKIM-1，serum scystatin C and NGAL and combined predictors of preeclampsia are taken as the early indicators of renalinjury，which sensitivity are separately 83.3%，75%，88.9%，96.8%；specificity are respectively 72.7%，70%，75.6%，86.4%.Conclusion KIM-1，serum scystatin C and NGAL may reflect the progression of renal injury in preeclampsia.Combined predictors have a higher predictive value in the early renal injury of the preeclampsia.

preeclampsia；kidney injury molecule-1；serum cystatin C；lipocalin，neutrophil gelatinase-associated

R714.259

A

0258-4646（2016）05-0460-04

10.12007/j.issn.0258-4646.2016.05.020

黃菁（1986-），女，碩士研究生.

于庭，E-mail：yuting485@163.com

2015-12-10

網(wǎng)絡(luò)出版時間：