甲狀腺乳頭狀癌與交界性病變的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究*

楊慧　徐敏潔　陳天星　王晚璞

甲狀腺乳頭狀癌與交界性病變的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究*

楊慧徐敏潔陳天星王晚璞

目的：分析和鑒定甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）與交界性病變的差異表達(dá)蛋白，篩選新的蛋白標(biāo)志物。方法：收集2013年4月至2015年2月云南省第一人民醫(yī)院手術(shù)切除的甲狀腺標(biāo)本118例。實驗組分別為PTC 43例（含經(jīng)典型40例、濾泡亞型3例）、交界性病變33例（具有PTC樣細(xì)胞核及乳頭狀結(jié)構(gòu)，而缺乏包膜、血管侵犯，未發(fā)生轉(zhuǎn)移的病例。其中8例合并非典型腺瘤），對照組為癌旁正常甲狀腺組織42例。每組用10例冰凍樣本提取總蛋白進(jìn)行雙向凝膠電泳（two-dimensional electrophoresis，2-DE），經(jīng)PDQUEST 7.3圖像分析軟件檢測3組的表達(dá)差異點，利用基質(zhì)輔助激光解吸電離串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF/TOFMS）和Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫對差異蛋白進(jìn)行鑒定，選擇其中6種差異表達(dá)蛋白用118例樣本通過免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）染色進(jìn)行驗證。結(jié)果：3組樣本兩兩比較共發(fā)現(xiàn)24個蛋白差異點，通過質(zhì)譜分析鑒定出18種差異表達(dá)蛋白。IHC染色顯示6種蛋白keratin，typeⅡcytoskeletal 8（CK8）、keratin，typeⅠcytoskeletal 18（CK18）、60 kDa heat shock protein（HSP60）、actin，cytoplasmic 2 （γ-Actin）、14-3-3 protein beta/alpha（14-3-3 β/α）和14-3-3 protein epsilon（14-3-3 ε）定位于細(xì)胞漿；在PTC中6種蛋白的表達(dá)均高于正常甲狀腺組織（P＜0.001），同時CK8、CK18、HSP60和γ-actin的表達(dá)高于交界性病變組（P＜0.01）；在交界性病變中，除CK8無明顯變化外，其它5種蛋白的表達(dá)均高于正常對照組（P＜0.001）。結(jié)論：蛋白質(zhì)組學(xué)分析有助于發(fā)現(xiàn)新的PTC和交界性病變的蛋白標(biāo)志物，IHC染色進(jìn)一步確認(rèn)這些蛋白在組織細(xì)胞中的表達(dá)模式，更有利于PTC的早期病理診斷。

甲狀腺乳頭狀癌交界性病變差異表達(dá)蛋白蛋白質(zhì)組學(xué)腫瘤標(biāo)志物

Correspondence to:Tianxing CHEN；E-mail:khyyblkchtx@163.com

Department of Pathology，The First People's Hospital of Yunnan Province，The Affiliated Hospital of Kunming University of Science and Technology，Kunming 650000，China

This work was supported by Yunnan Applied Basic Research Project（No.2013FZ181）

甲狀腺癌是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其中以甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）最為常見，約占甲狀腺上皮源性惡性腫瘤的80%［1］，女性多發(fā)［2］。典型的PTC通過常規(guī)病理組織學(xué)比較容易診斷，但是對于那些交界性病變，具有PTC樣細(xì)胞核及乳頭狀結(jié)構(gòu)，但無血管侵犯，包膜侵犯可疑或缺乏的病例，與PTC的組織形態(tài)學(xué)鑒別診斷十分困難。這類病例臨床上具有較好的生物學(xué)行為及預(yù)后［3-5］，將其與PTC準(zhǔn)確鑒別開來，可避免對此類病變進(jìn)行過度治療［4-5］。

為了更好的鑒別PTC及交界性病變，本研究以正常甲狀腺組織為對照，采用雙向凝膠電泳（two-dimensional electrophoresis，2-DE）和質(zhì)譜技術(shù)篩選出PTC及交界性病變的差異蛋白，選擇其中6種蛋白用免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry，IHC）染色加以驗證，以期獲得可用于輔助診斷PTC及交界性病變的特異性標(biāo)志物。

1　材料與方法

1.1病例資料

收集2013年4月至2015年2月云南省第一人民醫(yī)院手術(shù)切除的甲狀腺標(biāo)本118例，其中實驗組分別為PTC 43例（含經(jīng)典型40例、濾泡亞型3例）、交界性病變33例（具有PTC樣細(xì)胞核及乳頭狀結(jié)構(gòu)，而缺乏包膜、血管侵犯，未發(fā)生轉(zhuǎn)移的病例。其中8例合并非典型腺瘤），對照組為癌旁正常甲狀腺組織42例。所有標(biāo)本均收集石蠟組織用于IHC染色；其中30例同時留取新鮮組織-80℃凍存，用于2-DE檢測，包括PTC、交界性病變和癌旁正常甲狀腺各10例。

1.2方法

1.2.1蛋白提取及2-DE凍存組織同組樣本等量混合后每組取0.1g樣本，加液氮研磨成粉，加入1mL含蛋白酶抑制劑PMSF的裂解液（購自上海碧云天生物技術(shù)公司），冰上裂解30 min，12 000 r/min離心30 min，取上清。加入-20℃冷丙酮沉淀1 h，16 600 r/min離心，取沉淀。用水化液重溶沉淀，Bradford法測蛋白質(zhì)樣品濃度。將500 μg蛋白與水化液混合，加入1 μL IPG Buffer混勻，總體積500 μL，取24 cm IPG預(yù)制干膠條（pH=4～7，購自美國Bio-Rad公司）被動水化上樣12 h。在Ettan IPGphor 3等點聚焦儀（購自美國GE healthcare公司）進(jìn)行第1向等點聚焦電泳（程序：250 V 0.5 h，500 V 0.5 h，1 000 V 0.5 h，8 000 V 4 h，8 000 V聚焦65 000 Vh）。聚焦完畢，立即將膠條依次置于含DTT的平衡緩沖液Ⅰ、含IAA的平衡緩沖液Ⅱ中各平衡15 min，然后轉(zhuǎn)至垂直電泳系統(tǒng)Ettan DALTsix Electrophoresis Unit（購自美國GE healthcare公司）進(jìn)行第2向SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，考馬斯亮藍(lán)（G-250，購自美國MP Biomedicals公司）染色（簡稱考染，參照Candiano等［6］的方法染色）。用EPSON Expression 10 000 XL掃描凝膠圖像，采用PDQUEST 7.3圖像分析軟件對PTC組、交界性病變組和正常對照組的2-DE圖譜進(jìn)行差異蛋白分析，蛋白的相對表達(dá)量用積分光密度值表示，將升高或降低3倍及以上的定義為差異點。

1.2.2質(zhì)譜分析切割選定的蛋白點，膠內(nèi)蛋白酶解，用ABI 4700 MALDI TOF/TOF串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜儀（購自美國Applied Biosystems公司）進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸電離串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-fight/time-of-fight mass spectrometry，MALDI-TOF/TOF-MS）分析，經(jīng)GPS Explorer軟件（購自美國Applied Biosystems公司）得到MS和MS/MS數(shù)據(jù)，進(jìn)行Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫搜索，一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜綜合可信度達(dá)到95%為可信的鑒定結(jié)果。

1.2.3IHC染色118例組織樣本經(jīng)10%中性甲醛固定、脫水、石蠟包埋，切片厚3～4μm。用MaxVision法進(jìn)行IHC染色，操作按說明書進(jìn)行。一抗gamma（γ）-Actin、14-3-3 alpha+beta抗體購自英國Abcam公司，HSP60購自美國CST公司，14-3-3 epsilon購自美國Thermo Fisher Scientific公司，Cytokeratin 8（CK8）、Cytokeratin 18（CK18）及MaxVisionTM2二抗試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。結(jié)果判斷以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，綜合染色強度及陽性細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行半定量分析。染色強度評分：無著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；陽性細(xì)胞所占百分比評分：＜5%記0分，5%～25% 記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，＞75%記4分。兩項結(jié)果相加，總得分：0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），4～5分為中等陽性（++），6～7分為強陽性（+++）。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。等級資料采用秩和檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。多重比較采用Bonferroni檢驗［7］，本研究組間比較次數(shù)為3次，檢驗水準(zhǔn)α'=0.017。

2　結(jié)果

2.12-DE圖譜分析

通過2-DE技術(shù)得到3組樣本的2-DE電泳圖譜（圖1）。與正常甲狀腺圖譜比較，PTC組發(fā)現(xiàn)19個差異點，交界性病變組發(fā)現(xiàn)22個差異點；PTC組與交界性病變組圖譜比較發(fā)現(xiàn)6個差異點。部分蛋白點在各組間均有差異，切膠時僅在蛋白相對含量較高的膠中進(jìn)行切割，綜合共選擇24個蛋白點用于質(zhì)譜鑒定。

2.2質(zhì)譜結(jié)果

24個蛋白點通過MALDI-TOF/TOF-MS分析，均成功獲得MS和MS/MS數(shù)據(jù)，圖2顯示keratin，typeⅡcytoskeletal 8（即cytokeratin 8，CK8）的肽質(zhì)量指紋圖譜。經(jīng)Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫檢索，證實部分同一區(qū)域的不同差異點為同一蛋白質(zhì)，如actin，cytoplasmic 2（γactin），凝膠中同一區(qū)域有3個差異點經(jīng)質(zhì)譜鑒定均為該蛋白。最終24個差異點共鑒定出18種蛋白，見表1。與正常組比較，在PTC組中，cytosolic non-specific dipeptidase（CNDP2）、glutathione S-transferase P （GSTP1）、protein disulfide-isomerase（P4HB）、protein disulfide-isomerase A6（PDIA6）4種蛋白無明顯變化，其余14種蛋白均為上調(diào)；在交界性病變組中，annexin A1（ANXA1）、P4HB無明顯變化，其余16種蛋白均為上調(diào)。與交界性病變組比較，PTC組中ATP synthase subunit beta，mitochondrial（ATP5B）下調(diào)，γ-actin、ANXA1、keratin，type I cytoskeletal 18（即cytokeratin 18，CK18）、lamin-A/C（LMNA）、P4HB上調(diào)，其余蛋白無明顯變化。

2.3IHC染色結(jié)果

為進(jìn)一步證實2-DE及質(zhì)譜鑒定的蛋白在臨床樣本中的應(yīng)用價值，本研究選取6種蛋白做IHC染色，分別為CK8、CK18、60 kDa heat shock protein（HSP60）、γ-actin、14-3-3 protein beta/alpha（14-3-3 β/α）和14-3-3 protein epsilon（14-3-3 ε）。

6種蛋白抗體染色均定位于細(xì)胞漿，表達(dá)結(jié)果見表2。在正常甲狀腺組織，6種蛋白均以陰性或弱陽性表達(dá)為主。在交界性病變組，CK8以陰性、弱陽性或局灶陽性表達(dá)為主；HSP60表現(xiàn)為不同程度的著色，以弱陽性至中等陽性表達(dá)為主；其它4種蛋白以中等至強陽性表達(dá)為主。在PTC組，均以中等至強陽性表達(dá)為主。圖3顯示CK8、14-3-3 β/α和14-3-3 ε 的IHC染色。

圖1　三組樣本的2-DE圖譜Figure 1　2-DE gel images of PTC，thyroid borderline lesion，and normal tissue

圖2　CK8的肽質(zhì)量指紋圖譜Figure 2　Peptide mass fingerprinting of CK8

表1　18種差異表達(dá)蛋白的基本信息Table 1　Basic information of 18 differentially expressed proteins

表2　CK8、CK18、HSP60、γ-actin、14-3-3 β/α和14-3-3 ε的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果Table 2　Immunohistochemical staining of CK8，CK18，HSP60，γ-actin，14-3-3 β/α，and 14-3-3 ε

圖3　CK8、14-3-3 β/α和14-3-3 ε在三組樣本中的表達(dá) （IHC×400）Figure 3　Protein expression levels of CK8，14-3-3 β/α，and 14-3-3 ε in three groups（IHC×400）

分析表明，6種蛋白在3個組中的表達(dá)差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.001）。在PTC中，CK8、CK18、HSP60和γ-actin的表達(dá)高于交界性病變組及正常對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；14-3-3 β/α、14-3-3 ε的表達(dá)高于正常對照組（P＜0.001），而與交界性病變組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（前者P=0.829，后者P=0.038）。在交界性病變組中，CK8的表達(dá)與正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.036），其余5種蛋白在交界性病變中的表達(dá)高于正常對照組（P＜0.001）。

3　討論

用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選蛋白標(biāo)志物是一種高通量、高效率的方法，既往文獻(xiàn)多用于對甲狀腺癌的研究［8-12］，對交界性病變的研究極為匱缺。本研究采用2-DE、質(zhì)譜分析同時篩選PTC和甲狀腺乳頭狀交界性病變的差異表達(dá)蛋白，并用IHC染色檢測部分蛋白的組織原位表達(dá)情況，為將來的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

2-DE實驗中，許多研究者為追求高靈敏度而采用銀染的方法進(jìn)行凝膠染色，以獲得有較多蛋白點的圖譜。銀染靈敏度高，可達(dá)到考染的上千倍［6］，在上樣量較低的情況下可獲得較完整的蛋白質(zhì)分離圖譜，但是由于銀染易受影響（如溫度、溶液質(zhì)量、時間等），與后續(xù)質(zhì)譜鑒定兼容性較差［6，13］，鑒定成功率低。本研究使用改良的膠體考染法，雖然與銀染相比，顯示蛋白點數(shù)量較少，但是24個差異點進(jìn)行質(zhì)譜分析，均成功獲得相應(yīng)的MS/MS肽質(zhì)量指紋圖譜，并鑒定出相應(yīng)的蛋白。

質(zhì)譜鑒定出的18種蛋白，經(jīng)PANTHER分類分析及Gene Ontology數(shù)據(jù)庫功能注釋發(fā)現(xiàn)：CK8、CK18、VIM（vimentin）、γ-actin、LMNA屬于細(xì)胞骨架蛋白，參與細(xì)胞形態(tài)的維持；14-3-3 β/α、14-3-3 ε具有多種蛋白質(zhì)結(jié)合功能，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期及細(xì)胞通訊；HSP60屬于伴侶蛋白，與細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)；ANXA1、ANXA5（annexin A5）為鈣離子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，參與脂肪酸代謝，ANXA1還參與細(xì)胞通訊；P4HB、PDIA6屬于蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶，與蛋白質(zhì)的折疊相關(guān)，P4HB也影響細(xì)胞凋亡；CNDP2屬于金屬肽酶M20家族，具有水解酶、金屬肽酶、去乙酰化酶等酶活性，參與細(xì)胞氨基酸的合成、蛋白質(zhì)修飾與蛋白水解過程；CALR（calreticulin）屬于鈣結(jié)合蛋白，參與蛋白折疊；SERPINA1（alpha-1-antitrypsin）是一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，具有調(diào)節(jié)催化的活性；ATP5B 是ATP合酶β亞基，具有水解酶活性、受體活性，與離子的跨膜轉(zhuǎn)運相關(guān)，參與呼吸電子傳遞鏈以及嘌呤堿基代謝過程；CTSD（cathepsin D）組織蛋白酶D屬于天冬氨酰蛋白酶家族，是一種重要的蛋白水解酶，具有溶解細(xì)胞外基質(zhì)、蛋白水解等作用，參與膠原代謝過程；GSTP1是谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶，具有轉(zhuǎn)移酶活性以及激酶調(diào)節(jié)活性。

由于鑒定出的蛋白較多，本研究僅選取6種蛋白（CK8、CK18、HSP60、γ-Actin、14-3-3 β/α和14-3-3 ε）進(jìn)一步做IHC染色。IHC結(jié)果亦證實這6種蛋白在各組間均有差異，說明它們與甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展具有重要的關(guān)系。

CK8、CK18屬于Ⅱ型角蛋白，通常兩者在單層腺上皮和假復(fù)層上皮中成對表達(dá)［14］。有文獻(xiàn)報道CK8在多種甲狀腺腫瘤，如濾泡性腺瘤（follicular thyroid adenoma，F(xiàn)TA）、濾泡癌、乳頭狀癌等中均表達(dá)［15］。在本研究中，CK8在PTC中的表達(dá)多呈中等至強陽性表達(dá)；在交界性病變及正常甲狀腺中均以陰性、弱陽性或局灶陽性表達(dá)為主，2-DE及IHC結(jié)果均顯示兩者無明顯差異，因此本研究認(rèn)為CK8可用于輔助鑒別甲狀腺乳頭狀病變的良惡性，但對鑒別交界性病變與正常甲狀腺價值不大。CK18在3組中的陽性率均很高（＞85%），李蘭梅等［16］認(rèn)為CK18宜作為甲狀腺癌浸潤和轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物。本研究中，CK18在交界性病變和PTC中以中等至強陽性表達(dá)為主，與正常組比較呈顯著性差異（P＜0.001）。因此，CK18強陽性表達(dá)對鑒別正常甲狀腺和交界性病變/PTC有一定價值，可與CK8配對使用。

γ-actin是一種構(gòu)成細(xì)胞骨架微絲的蛋白，其在細(xì)胞運動、細(xì)胞黏著、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等過程中起作用［17］。Brown等［9］通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析顯示，相對于正常甲狀腺組織，在PTC中actin（Swiss-Prot收錄號P60709）低表達(dá)。本研究中，蛋白質(zhì)組學(xué)分析與IHC染色均顯示γ-actin（收錄號P63261）在PTC和交界性病變中的表達(dá)高于正常甲狀腺，并且在PTC組中的表達(dá)高于交界性病變組，該結(jié)果與Brown等［9］的研究結(jié)果不一致，可能與actin類型不一樣有關(guān)，本研究也經(jīng)過多次重復(fù)實驗驗證上述實驗結(jié)果。此外，有文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)γ-actin過表達(dá)將導(dǎo)致結(jié)腸癌細(xì)胞骨架重構(gòu)，細(xì)胞遷移速率上升，侵襲能力提高，進(jìn)而影響結(jié)腸癌細(xì)胞的運動，甚至可能影響結(jié)腸癌的侵襲行為［18］，說明γ-actin過表達(dá)在腫瘤的進(jìn)展中具有重要的作用。

目前，關(guān)于HSP60在甲狀腺癌中的蛋白表達(dá)研究較少，Park等［11］發(fā)現(xiàn)在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC中HSP60陽性表達(dá)率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的PTC，說明HSP60與PTC的發(fā)生和轉(zhuǎn)移均有關(guān)系。本研究IHC染色顯示HSP60在正常甲狀腺多為陰性表達(dá)，在交界性病變中以弱陽性至中等陽性表達(dá)為主，在PTC中以中等至強陽性表達(dá)為主，與杜慧貞等［19］在血漿中的檢測結(jié)果基本一致。

本研究中，與正常甲狀腺比較，PTC及交界性病變中均發(fā)現(xiàn)14-3-3 β/α、14-3-3 ε過表達(dá)，Sofiadis等［10］曾報道在FTC與FTA的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中識別出差異蛋白14-3-3 β/α、14-3-3 ε及14-3-3 ζ/δ，在FTC與PTC的比較中識別出差異蛋白14-3-3 ε及14-3-3 ζ/δ，并通過IHC發(fā)現(xiàn)14-3-3 β/ε/ζ在FTA、FTC、PTC中的陽性表達(dá)率分別為33%、67%及80%。本課題組未研究FTA及FTC，但實驗發(fā)現(xiàn)不論是交界性病變還是PTC，只要甲狀腺濾泡細(xì)胞增多、核增大、呈現(xiàn)部分PTC樣核特征，14-3-3 β/α、14-3-3 ε均呈高表達(dá)，兩種病變無明顯差異，而在正常甲狀腺中低表達(dá)。

綜合6種蛋白標(biāo)志物的IHC結(jié)果可以看出，CK8在甲狀腺乳頭狀病變的良惡性鑒別中具有輔助作用，而14-3-3 β/α、14-3-3 ε可輔助鑒別正常甲狀腺與增生的PTC樣病變/PTC，其它3種蛋白CK18、HSP60和γ-actin在PTC中的表達(dá)最強，亦可用于PTC的輔助診斷。IHC染色結(jié)果除HSP60以外，其余蛋白染色結(jié)果均證實與2-DE結(jié)果一致。本研究中2-DE結(jié)果HSP60在PTC組與交界組中無明顯差異，而IHC結(jié)果HSP60在PTC中的表達(dá)高于交界性病變，可能與兩種實驗界定差異的標(biāo)準(zhǔn)不一樣有關(guān)，將來還需更多的樣本去驗證。

綜上所述，蛋白質(zhì)組學(xué)分析有助于發(fā)現(xiàn)新的PTC和交界性病變的蛋白標(biāo)志物，IHC染色進(jìn)一步確認(rèn)這些蛋白在組織細(xì)胞中的表達(dá)模式更有利于PTC的早期病理診斷，但是這些蛋白與PTC的臨床病理關(guān)系及在PTC癌變過程中的具體作用機制還需要進(jìn)一步的研究。

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（2016-02-01收稿）

（2016-07-11修回）

楊慧專業(yè)方向為腫瘤早期診斷的實驗研究。

E-mail：yanghui7604@126.com

Differential proteomic study of papillary thyroid carcinoma and thyroid borderline lesion

Hui YANG，Minjie XU，Tianxing CHEN，Wanpu WANG

Objective:To search for potential protein biomarkers of papillary thyroid carcinoma（PTC）and thyroid borderline lesion.Differentially expressed proteins between the two were analyzed and identified.Methods:A total of 118 cases of thyroid resection samples were obtained from patients who underwent surgery at the First People's Hospital of Yunnan Province from April 2013 to February 2015.Experimental groups included 43 PTCs（40 classic and 3 follicular variants）and 33 thyroid borderline lesions（with equivocal PTC type nuclear features and papillary structure，but without metastasis，and lacking capsular or vascular invasion；8 cases with atypical adenoma），respectively.The control group included 42 normal thyroid tissues adjacent to carcinoma.The total protein extracts from frozen thyroid samples of 10 cases in each group were profiled with 2D electrophoresis.The differential protein spots were then revealed by PDQUEST 7.3 software and identified by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-fight/time-of-fight mass spectrometry and Swiss-Prot database search.Six differentially expressed proteins of these spots were further validated using 118 samples through immunohistochemistry.Results:A set of 24 differentially expressed spots significant in discriminating between the sample groups were found，and 18 proteins were identified.Immunohistochemistry revealed the following six proteins located in the cytoplasm:keratin，type II cytoskeletal 8（CK8）；keratin，type I cytoskeletal 18（CK18）；60 kDa heat shock protein（HSP60）；actin，cytoplasmic 2（γ-actin）；14-3-3 protein beta/alpha（14-3-3 β/α）；and 14-3-3 protein epsilon（14-3-3 ε）.All six proteins were overexpressed in PTC compared with normal tissues（P＜0.001）.Meanwhile，CK8，CK18，HSP60，and γ-actin were overexpressed in PTC compared with borderline lesions（P＜0.01）.Except for CK8，the five other proteins were overexpressed in borderline lesions compared with normal tissues（P＜0.001）.Conclusion:Proteomic analysis is useful in searching for new biomarkers of PTC and thyroid borderline lesion.The expression patterns of these differentially expressed proteins can be further validated using immunohistochemistry.The newly identified protein biomarkers can positively contribute to early PTC diagnosis.

papillary thyroid carcinoma，borderline lesion，differentially expressed protein，proteomics，tumor biomarker

10.3969/j.issn.1000-8179.2016.16.131

云南省第一人民醫(yī)院病理科，昆明理工大學(xué)附屬醫(yī)院（昆明市650000）

*本文課題受云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃項目（編號：2013FZ181）資助

陳天星khyyblkchtx@163.com