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(1．西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安　710061；2．陜西東科制藥有限責(zé)任公司，西安　710043)

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HPLC法測(cè)定黃龍咳喘膠囊中淫羊藿苷的含量

常潤1，2，夏傳濤2，方宇1*

(1．西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安710061；2．陜西東科制藥有限責(zé)任公司，西安710043)

目的建立黃龍咳喘膠囊中淫羊藿苷的HPLC含量測(cè)定方法。方法采用HPLC法。色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(TIANHEKromasilC18，150mm×4.6mm，5μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺調(diào)pH值約為4.5)(25∶75)；流速：1mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm。結(jié)果淫羊藿苷在0.008 1～0.081 0mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.7%，RSD值為1.62%(n=6)。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為該膠囊的質(zhì)量控制方法。

黃龍咳喘膠囊；淫羊藿苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

黃龍咳喘膠囊是由黃芪、地龍、淫羊藿、山楂、桔梗、魚腥草、射干、麻黃和葶藶子9味中藥材制成的膠囊，主要功能為益氣補(bǔ)腎、清肺化痰、止咳平喘，用于肺腎氣虛、痰熱郁肺之咳喘以及急慢性支氣管炎、支氣管哮喘等。淫羊藿為此方中君藥之一，有補(bǔ)腎助陽之效，主要成分為淫羊藿苷。為控制該產(chǎn)品質(zhì)量，需對(duì)其君藥藥材質(zhì)量有效控制，故采用HPLC法測(cè)定黃龍咳喘膠囊中的淫羊藿苷。

1　儀器與試藥

1.1儀器SHIMADZU10A型高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器。

1.2試藥淫羊藿苷對(duì)照品，來源于中國藥品生物制品檢定研究院(供含量測(cè)定用)，批號(hào)110737-200415；黃龍咳喘膠囊(批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z20025060)，楊凌東科麥迪森制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：140701，140702，140703；水：純化水；色譜純：乙腈，其余試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(TIANHEKromasilC18，150mm×4.6mm，5μm)色譜柱[1]，流動(dòng)相：乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺調(diào)pH值約為4.5)(25∶75)；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；流速：1mL·min-1；進(jìn)樣體積：10μL[2]。理論板數(shù)按照淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2供試品溶液的制備精密稱取供試品約0.5g，置于50mL具塞錐形瓶中，精密加入25mL體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇，稱定質(zhì)量后在功率250W、頻率40kHz條件下超聲處理30min，放冷后用體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇補(bǔ)足失質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液后制成。

2.3對(duì)照品溶液的制備精密稱定淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成0.03mg·mL-1的溶液。

2.4陰性空白對(duì)照品溶液的制備取除去淫羊藿的模擬處方，制成不含淫羊藿的空白樣品，按照供試品溶液制法制成陰性空白對(duì)照品溶液。

2.5空白干擾實(shí)驗(yàn)見圖1。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性空白對(duì)照溶液各10μL，按照上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，觀察比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在陰性空白對(duì)照溶液的HPLC色譜圖中，與對(duì)照品峰相應(yīng)的保留時(shí)間位置上無相應(yīng)的峰出現(xiàn)，表明陰性空白對(duì)照溶液無干擾。

2.6線性關(guān)系考察精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品4.0和8.1mg，分別置于100和50mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，作為對(duì)照品溶液，其質(zhì)量濃度分別為40.0和162.0μg·mL-1；再精密吸取質(zhì)量濃度為162.0μg·mL-1的對(duì)照品溶液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8和1.0mL，分別置于6個(gè)2mL的量瓶中，加甲醇定容至刻度，作為對(duì)照品溶液，質(zhì)量濃度分別為8.1，16.2，32.4，48.6，64.8和81.0μg·mL-1。精密吸取各溶液10μL，分別注入液相色譜儀，按照含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積積分均值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=16 643.96X-3 957.33，r=0.999 9，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿苷質(zhì)量濃度在8.1～81.0μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

圖1HPLC圖

A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照品；1.淫羊藿苷

Fig.1HPLCchromatograms

A.referencesubstance；B.sample；C.negativesamplewithouticariin；1.icariin

2.7精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取同一對(duì)照品溶液(40.0μg·mL-1)和供試品溶液(批號(hào)140701)，各進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算得對(duì)照品溶液的RSD值為0.83%，供試品溶液的RSD值為2.49%。

2.8穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為140701的供試品溶液，分別在0，2，4，6和8h測(cè)定，淫羊藿苷供試品溶液在8h內(nèi)峰面積積分值均變化不大，RSD值為1.48%，表明該方法制備供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.9重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取批號(hào)為140701的黃龍咳喘膠囊樣品6份，按照2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得淫羊藿苷的含量分別為1.979 4，1.943 5，1.943 6，2.004 7，1.932 2和1.962 0mg·g-1，平均含量為1.960 9mg·g-1，RSD值為1.39%(n=6)。

2.10加樣回收率實(shí)驗(yàn)見表1。精密稱取已知平均含量為1.960 9mg·g-1的樣品6份，每份約0.25g，分別精密加入162.0μg·mL-1的淫羊藿苷對(duì)照品溶液各3mL，按照2.2項(xiàng)下方法制備溶液，測(cè)定其峰面積，計(jì)算回收率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，淫羊藿苷加樣平均回收率為98.7%，回收率良好，測(cè)定相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值為1.62%(n=6)。

表1淫羊藿苷加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Tab.1Resultsofrecoverytestforicariin(n=6)

2.11樣品測(cè)定按照2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定3批樣品中淫羊藿苷的含量，結(jié)果供試品中淫羊藿苷的含量分別為1.668 0，1.908 4和2.520 1mg·g-1。

2.12限度的確定根據(jù)以上3批樣品的測(cè)定結(jié)果，淫羊藿苷的含量在1.66～2.52mg·g-1之間，平均值為2.00mg·g-1，根據(jù)《中國藥典》2010年版一部淫羊藿中淫羊藿苷的含量[3]，考慮到藥材的品質(zhì)差異性和提取率，故初步確定本品1g含淫羊藿以淫羊藿苷計(jì)，不得少于1.40mg·g-1。

3　討論

在供試品溶液的制備方法中，首先對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行選擇，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，最大吸收波長(zhǎng)出現(xiàn)在 270nm處，故將270nm確定為檢測(cè)波長(zhǎng)。其次，分別以甲醇、乙醇、體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇和體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇為提取溶劑，超聲40min，對(duì)提取溶劑進(jìn)行考察。結(jié)果表明，以體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇為提取溶劑，制劑中淫羊藿苷的含量最高，初步擬定供試品采用體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇提取。再次，以體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇為提取溶劑，考察超聲提取時(shí)間。結(jié)果顯示，在30min后完成超聲提取，制劑中淫羊藿苷的含量不再增加。文獻(xiàn)[4-6]中多采用乙腈-水作為流動(dòng)相，本實(shí)驗(yàn)在對(duì)流動(dòng)相考察中分別用甲醇-水體系和乙腈-水體系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，流動(dòng)相為乙腈-0.075mol·L-1磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值約為4.5)(25∶75)時(shí)即可達(dá)到較好基線分離，且陰性樣品無干擾。結(jié)果表明，本方法穩(wěn)定準(zhǔn)確，可作為黃龍咳喘膠囊的質(zhì)量控制方法。參考文獻(xiàn)：

[1]李維鳳，牛曉峰，李延.HPLC法測(cè)定健寶膠囊中淫羊藿苷含量[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2002，23(5)：504-505.

[2]張林松.HPLC法測(cè)定復(fù)方益腎顆粒中淫羊藿苷的含量[J].中草藥，2005，36(2)：221-222.

[3]國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：306.

[4]溫幼敏，潘維民，譚小敏.HPLC法測(cè)定溫補(bǔ)氣血口服液中淫羊藿苷的含量[J].廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，13(1)：58-59.

[5]黎旸，李瑾翡，彭學(xué)東.HPLC法測(cè)定補(bǔ)腎強(qiáng)身膠囊中淫羊藿苷的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2009，24(4)：266-267.

[6]岐琳，牛曉峰.RP-HPLC法測(cè)定前列舒樂片中淫羊藿苷的含量[J].西北藥學(xué)雜志，2012，27(5)：413-415.

Determination of icariin in Huanglongkechuan Capsules by HPLC

CHANG Run1，2，XIA Chuantao2，F(xiàn)ANG Yu1*

(1.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Shaanxi Dongke Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710043，China)

ObjectiveTodetermineicariininHuanglongkechuanCapsulesbyHPLC.MethodsHPLCcolumn:TIANHEKromasilC18(150mm×4.6mm，5μm)；mobilephase：acetonitrile-0.075mol·L-1phosphoricacidsolution(adjustedpHofabout4.5withtriethylamine)(25∶75)；flowrate：1mL·min-1；columntemperature：30 ℃；detectionwavelength：270nm.ResultsIcariinwithin0.008 1-0.081 0mg·mL-1showedagoodlinearrelationship.Theaveragerecoverywas98.7%，withRSD1.62%(n=6).ConclusionThismethodissimple，accurateandreliable，andcanbeusedforthequalitycontrolofHuanglongkechuanCapsules.

HuanglongkechuanCapsules；icariin；HPLC；determination

常潤，女，碩士研究生，主管藥師

方宇，男，教授，博士生導(dǎo)師

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.05.009

R927.2

A

1004-2407(2016)05-0469-03

2015-10-14)