趙忠海，李　輝，易恒潔，楊勝林，彭邦星，卜小雁

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院/高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng) 550025）

MyoG和MEF2a基因多態(tài)性聚合效應(yīng)對(duì)鴨屠宰性狀的影響

趙忠海，李輝，易恒潔，楊勝林，彭邦星，卜小雁

（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院/高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng) 550025）

【目的】探討MyoG和MEF2a基因聚合效應(yīng)對(duì)鴨屠宰性狀的影響，為進(jìn)一步確定與鴨屠宰性狀相關(guān)的分子遺傳標(biāo)記提供研究基礎(chǔ)，為鴨屠宰性狀的多基因聚合育種提供依據(jù)。【方法】試驗(yàn)以240只三穗鴨為研究素材，擴(kuò)增MyoG和MEF2a基因并進(jìn)行PCR產(chǎn)物直接測(cè)序以檢測(cè)兩基因所有外顯子的單核苷酸突變（SNPs）位點(diǎn)。運(yùn)用SPSS 18.0軟件中的GLM統(tǒng)計(jì)模型對(duì)MyoG和MEF2a基因的SNPs所對(duì)應(yīng)的不同基因型與三穗鴨屠宰性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，根據(jù)單基因關(guān)聯(lián)分析結(jié)果，將對(duì)屠宰性狀存在顯著影響的MyoG和MEF2a基因的多態(tài)位點(diǎn)利用軟件PHASE 2.0構(gòu)建聚合基因型，再進(jìn)行聚合基因型與屠宰性狀的關(guān)聯(lián)分析?！窘Y(jié)果】在試驗(yàn)群體中一共發(fā)現(xiàn)8個(gè)SNPs，其中在MyoG基因中有6個(gè)SNPs被找到，MEF2a基因中找到2個(gè)SNPs位點(diǎn)，在所有突變位點(diǎn)中，其中MyoG基因的g.2977G＞C位點(diǎn)發(fā)生的G/C突變使密碼子由GAG變?yōu)镚AC，所編碼的氨基酸由谷氨酸變成天冬氨酸；而MEF2a基因中的兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，g.47915G＞A位點(diǎn)發(fā)生的G/A突變使密碼子由GAA變?yōu)锳AA，編碼的氨基酸由谷氨酸變成賴(lài)氨酸，g.47918G＞A位點(diǎn)的G/A突變引起的密碼子由GAT變成AAT，所編碼的氨基酸由天冬氨酸變成天冬酰胺。剩下的5個(gè)突變位點(diǎn)均屬于同義突變，并未引起編碼氨基酸的改變。此外，進(jìn)行χ2適合性檢驗(yàn)，除了MyoG基因的g.1131C＞T位點(diǎn)和MEF2a基因的g.47915G＞A、g.47918G＞A位點(diǎn)未處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)（P＜0.05）外，其他的突變位點(diǎn)均處于平衡狀態(tài)。單基因關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明，MyoG基因g.1131C＞T和g.2204G＞A突變分別對(duì)胸肌率、體重和全凈膛重有著顯著影響，其所對(duì)應(yīng)的純合子基因型CC、GG型為優(yōu)勢(shì)基因型。MEF2a基因g.47915G＞A/g.47918G＞A位點(diǎn)影響全凈膛率，GA基因型個(gè)體屬于優(yōu)勢(shì)基因型個(gè)體。通過(guò)挑選出與屠宰性狀（胸肌率、體重、全凈膛重和全凈膛率）有關(guān)聯(lián)的MyoG基因g.1131C＞T/g.2204G＞A位點(diǎn)與MEF2a基因g.47915G＞A/g.47918G＞A進(jìn)行聚合效應(yīng)分析，結(jié)果顯示，聚合后的8種聚合基因型個(gè)體的全凈膛率，在各基因型間無(wú)顯著差異（P＞0.05），TTGAGA基因型的平均值最高，其次為CCGGGA基因型；其他3個(gè)指標(biāo)各基因型間差異達(dá)到了顯著，其中體重和全凈膛重存在正相關(guān)，都是CCGAGA基因型的平均值最高，CTGGGA基因型的平均值次之；CCGGGG基因型的胸肌率平均值最高，其次是CCGGGA基因型。結(jié)果顯示，單個(gè)基因的平均值最高的基因型分別為CC、GG和GA，在兩基因聚合后在4個(gè)指標(biāo)中CCGGGA基因型都不是最優(yōu)的組合，說(shuō)明兩個(gè)基因間存在互作效應(yīng)?！窘Y(jié)論】?jī)蓚€(gè)基因間存在互作效應(yīng)，所以用單個(gè)基因分子標(biāo)記進(jìn)行選育可能會(huì)顧此失彼，不能收到良好的效果，但是本研究的聚合優(yōu)勢(shì)基因型個(gè)體偏少，有待于進(jìn)一步擴(kuò)大樣本進(jìn)行驗(yàn)證分析，進(jìn)行更多基因的聚合效應(yīng)分析。

MyoG基因；MEF2a基因；屠宰性狀；聚合效應(yīng)

0　引言

【研究意義】畜禽屠宰性能由于與經(jīng)濟(jì)效益密切相關(guān)，在畜禽育種工作中一直備受重視，但屠宰性狀屬于數(shù)量性狀，受多基因控制，易受環(huán)境影響，因此采用傳統(tǒng)的選育方法進(jìn)行改良進(jìn)展緩慢。分子標(biāo)記由于其結(jié)果不受環(huán)境影響，不存在等位基因顯隱性表型關(guān)系，并且可進(jìn)行早期選擇，被認(rèn)為是縮短育種周期，加快遺傳進(jìn)展的有效手段。但是基因之間往往存在互作效應(yīng)，因此單基因分子標(biāo)記往往會(huì)出現(xiàn)顧此失彼的現(xiàn)象，而多基因聚合的分子育種技術(shù)將有望彌補(bǔ)這方面的缺陷。因此，本研究選擇在畜禽研究中被證明與畜禽屠宰性狀相關(guān)的兩個(gè)候選基因-肌細(xì)胞生成素（MyoG）基因和肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2a（MEF2a）基因，進(jìn)行兩基因聚合效應(yīng)對(duì)屠宰性狀的影響研究，為實(shí)現(xiàn)畜禽的多基因聚合育種提供依據(jù)。【前人研究進(jìn)展】由于MyoG基因和MEF2a基因在肌細(xì)胞分化和肌肉形成中發(fā)揮重要作用，而肌肉的發(fā)育與畜禽屠宰性狀息息相關(guān)，所以這兩個(gè)基因在畜禽研究中一直被作為屠宰性狀的候選基因。MyoG基因是生肌家族因子中最重要的一員，在肌細(xì)胞的分化過(guò)程中起著重要的作用，能促進(jìn)肌細(xì)胞的增殖和分化［1］。而MEF2基因家族（MEF2a、MEF2b、MEF2c和MEF2d）在骨骼發(fā)育、肌肉形成、肝臟纖維化和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等多種生理過(guò)程中發(fā)揮作用，同時(shí)它也參與一些疾病的發(fā)生，如阿爾茨海默氏癥和帕金森氏病等［2］。在骨骼肌發(fā)育的過(guò)程中，敲除microRNA可導(dǎo)致試驗(yàn)動(dòng)物在胚胎期致死或骨骼肌發(fā)育不全、肌纖維形態(tài)異常、肌原細(xì)胞凋亡和成肌細(xì)胞死亡增加［3-4］。LIU等［5］通過(guò)構(gòu)建小干擾RNA質(zhì)粒載體獲得敲除牛MyoG基因骨骼肌細(xì)胞的試驗(yàn)結(jié)果顯示該基因的表達(dá)顯著低于其他試驗(yàn)陽(yáng)性基因。NEVILLE等［6］研究表明，MyoG通過(guò)控制成肌細(xì)胞的融合和肌纖維的形成而對(duì)肌肉的分化起關(guān)鍵作用，是唯一能在所有骨骼肌細(xì)胞中表達(dá)的基因，是骨骼肌分化所必須的基因。許多骨骼肌和心肌基因的調(diào)控區(qū)都存在MEF2的結(jié)合位點(diǎn)，能夠與大多數(shù)肌肉特異基因的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子直接結(jié)合，在所有的肌肉細(xì)胞類(lèi)型中可作為肌源性基因表達(dá)的主要調(diào)節(jié)物［7-9］。LIU［10］等對(duì)鴨的MEF2a基因mRNA表達(dá)進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)在平滑肌中的表達(dá)量高于心肌和骨骼肌。JUSZCZUKKUBIAK等［11］對(duì)波蘭荷斯坦奶牛MEF2a基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性及該基因mRNA表達(dá)水平進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，啟動(dòng)子區(qū)域突變的不同基因型個(gè)體的背最長(zhǎng)肌MEF2a基因mRNA水平顯著高于其他基因型個(gè)體，因此認(rèn)為MEF2a的核苷酸序列突變可能作為牛的生長(zhǎng)性狀指標(biāo)分子標(biāo)記。【本研究切入點(diǎn)】MyoG和MEF2a基因在人、小鼠及其他家畜方面已有大量研究，家禽方面近幾年的研究也在逐步增多，但水禽方面的研究相對(duì)較少，迄今為止還未見(jiàn)到關(guān)于鴨的MyoG和MEF2a基因聚合效應(yīng)分析的報(bào)道。雖然植物的多基因聚合育種已取得了初步成功，但動(dòng)物的聚合育種還未見(jiàn)到成功的報(bào)道。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討MyoG和MEF2a基因之間的關(guān)系，探討聚合基因型與鴨屠宰性狀的關(guān)聯(lián)性，為畜禽多基因聚合育種的研究提供基礎(chǔ)?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】以貴州省優(yōu)良地方品種——三穗鴨為研究對(duì)象，首次將MyoG和MEF2a基因的聚合基因型與三穗鴨屠宰性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，進(jìn)行多基因聚合效應(yīng)的探討，為家禽屠宰性狀分子標(biāo)記選育提供依據(jù)。

1　材料與方法

試驗(yàn)于2014年7月采集樣品，2014年10月至2015年6月在貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)操作。

1.1試驗(yàn)材料

17周齡三穗鴨240只（公母各半），相同飼養(yǎng)管理水平，翅靜脈采血，肝素鈉抗凝，置-70℃冰箱保存。屠宰測(cè)定按照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部制訂的《家禽生產(chǎn)性能名詞術(shù)語(yǔ)和度量統(tǒng)計(jì)方法》（2004）進(jìn)行［12］。

1.2基因組DNA提取與引物設(shè)計(jì)

采用血液/細(xì)胞/組織基因組DNA提取試劑盒（北京天根）提取基因組DNA。根據(jù)NCBI上發(fā)布的家鴨MyoG基因編碼區(qū)全序列（GenBank: NW_004676592.1）、家鴨MEF2a基因編碼區(qū)全序列（GenBank: NW_004676438.1），應(yīng)用軟件Primer Premier 5.0及Oligo 6.0軟件設(shè)計(jì)引物。引物由上海英濰捷基生物技術(shù)有限公司合成，引物詳細(xì)信息見(jiàn)表1。

1.3PCR擴(kuò)增

PCR擴(kuò)增采用30 μL反應(yīng)體系，包括2×Taq PCR Master Mix（北京天根）12 μL，上、下游引物各3.0 μL（濃度均為10 μmol·L-1），模板DNA（50 ng·μL-1）4 μL，ddH2O 8 μL。反應(yīng)條件如下：94℃預(yù)變性4 min，94℃變性30—35 s，退火30—35 s（退火溫度如表1所示），72℃延伸30—40 s，35個(gè)循環(huán)。擴(kuò)增完成后，72℃再延伸10 min后，4℃保存。

1.4數(shù)據(jù)處理分析

采用DNAstar進(jìn)行序列對(duì)比拼接，PHASE 2.0軟件進(jìn)行兩基因聚合基因型的判定，Excel 2010進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，SPSS18.0軟件中一般線(xiàn)性模型（GLM）進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差體現(xiàn)。統(tǒng)計(jì)模型如下：

單基因效應(yīng)關(guān)聯(lián)分析數(shù)學(xué)模型：

Y=μ+Gi+S+Gi×S+e（i=1，2）

聚合基因型效應(yīng)關(guān)聯(lián)分析數(shù)學(xué)模型：Y=μ+G+e其中：Y為性狀測(cè)定值，μ代表群體均值，Gi為MyoG或MEF2a基因型效應(yīng)，S為樣品性別，Gi×S為基因型與性別互作效應(yīng)，G為MyoG和MEF2a基因的聚合基因型效應(yīng)，e為隨機(jī)殘差。

2　結(jié)果

2.1PCR 產(chǎn)物檢測(cè)

擴(kuò)增目的片段，1.2%瓊脂糖電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增目的產(chǎn)物片段，結(jié)果見(jiàn)圖1、2。擴(kuò)增產(chǎn)物大小與設(shè)計(jì)引物預(yù)期擴(kuò)增片段長(zhǎng)度一致。

2.2PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序及序列分析

根據(jù)目的片段擴(kuò)增結(jié)果，將所有PCR產(chǎn)物送往上海英濰捷基生物技術(shù)有限公司進(jìn)行直接測(cè)序。測(cè)序結(jié)果經(jīng)序列拼接、對(duì)比，并與GenBank上公布的基因參考序列矯正，發(fā)現(xiàn)MyoG基因共有6個(gè)SNPs（圖3、4），分別位于外顯子1的g.1131C＞T位點(diǎn)，外顯子2的g.2186G＞A位點(diǎn)和g.2204G＞A位點(diǎn)，外顯子3的g.2920G＞A位點(diǎn)、g.2962C＞T位點(diǎn)和g.2977G＞C位點(diǎn)，其中，g.2977G＞C位點(diǎn)發(fā)生的G/C突變使密碼子由GAG變?yōu)镚AC，所編碼的氨基酸由谷氨酸變成天冬氨酸。MEF2a基因共有2個(gè)SNPs（圖5），分別位于外顯子11的g.47915G＞A位點(diǎn)和g.47918G＞A位點(diǎn)，g.47915G＞A位點(diǎn)發(fā)生的G/A突變使密碼子由GAA變?yōu)锳AA，所編碼的氨基酸由谷氨酸變成賴(lài)氨酸，g.47918G＞A位點(diǎn)的G/A突變引起的密碼子由GAT變成AAT，編碼的氨基酸由天冬氨酸變成天冬酰胺。

表1　MyoG、MEF2a基因引物信息Table 1　The primer sequences and their information for PCR amplification of the MyoG and MEF2a genes in Sansui duck

圖1　MyoG基因PCR擴(kuò)增Fig. 1　The amplification result of MyoG from PCR

圖2　MEF2a基因PCR擴(kuò)增Fig. 2　The amplification result of MEF2a from PCR

圖3　MyoG基因1131、2920和2977 bp處的堿基變異Fig. 3　The sequencing map of the MyoG gene at positions 1131， 2920 and 2977

圖4　MyoG基因2186、2204 和2962 bp處的堿基變異Fig.4　The sequencing map of the MyoG gene at position 2186， 2204 and 2962

2.3MyoG基因和MEF2a基因遺傳學(xué)分析

測(cè)序結(jié)果經(jīng)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，在MyoG基因外顯子擴(kuò)增片段中存在6個(gè)SNPs位點(diǎn)，將6個(gè)SNPs位點(diǎn)所對(duì)應(yīng)純合子和雜合子的基因型分別定義為CC、CT、TT；GG、GA；GG、GA；GG、GA、AA；CC、 CT和GG、GC、CC型。對(duì)幾種基因型分析，可知相對(duì)應(yīng)的基因型中TT、GG、GG、GA、CC、GG為優(yōu)勢(shì)基因型，等位基因T、G、G、G、C、G則為優(yōu)勢(shì)等位基因。在MEF2a基因外顯子11中有2個(gè)SNPs位點(diǎn)，這兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)屬于完全連鎖平衡位點(diǎn)，將它們所對(duì)應(yīng)純合子和雜合子的基因型分別定義為GG、GA型。對(duì)基因型進(jìn)行分析，可知相對(duì)應(yīng)的基因型中GA為優(yōu)勢(shì)基因型，等位基因G則為優(yōu)勢(shì)等位基因。

圖5　MEF2a基因47915和47918 bp處的堿基變異Fig. 5　The sequencing map of MEF2a gene at position 47915 and 47918

統(tǒng)計(jì)各基因型的個(gè)體數(shù)，分別計(jì)算MyoG基因和MEF2a基因中的SNPs位點(diǎn)的基因型頻率和基因頻率，計(jì)算結(jié)果如表2所示。χ2適合性檢驗(yàn)結(jié)果表明，在MyoG基因中除g.1131C＞T外，該基因座其他多態(tài)位點(diǎn)均處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)（P＞0.05）。對(duì)MEF2a基因中的2個(gè)SNPs進(jìn)行χ2適合性檢驗(yàn)，結(jié)果表明，該基因這兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)均未處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)（P＜0.05），這可能是由于在育種過(guò)程中的人為選擇或遺傳漂變?cè)斐傻摹?/p>

2.4MyoG基因與MEF2a基因多態(tài)性與屠宰性狀的相關(guān)性分析

MyoG基因多態(tài)性與三穗鴨屠宰性狀的顯著性關(guān)系分析如表3所示?？梢钥闯?，公鴨的胸肌率在MyoG基因g.1131C＞T位點(diǎn)的不同基因型間差異顯著，CC型顯著高于CT和TT型，TT型顯著高于CT型。MyoG基因g.2204G＞A的不同基因型對(duì)體重和全凈膛重有顯著影響，GG型均顯著高于GA型。其余的性狀在各個(gè)SNPs的不同基因型間和性別間差異不顯著。MEF2a基因的2個(gè)突變位點(diǎn)g.47915G＞A/g.47918G＞A的不同基因型對(duì)全凈膛率有顯著影響（P＜0.05），且GA型顯著高于GG型，其余的性狀在兩個(gè)SNPs的不同基因型、性別間無(wú)差異顯著性，分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表4所示。

表2　MyoG、MEF2a基因多態(tài)位點(diǎn)基因頻率及基因型頻率Table 2　Gene frequency and genotype frequency of SNPs in MyoG and MEF2a gene

2.5聚合基因型與屠宰性狀間相關(guān)性分析

根據(jù)單個(gè)SNP位點(diǎn)分析結(jié)果，只選取與屠宰性狀有顯著影響的3個(gè)SNPs位點(diǎn)，采用PHASE 2.0軟件，進(jìn)行兩基因聚合基因型的判定，選取的性狀也是在單基因關(guān)聯(lián)分析時(shí)存在顯著差異的指標(biāo)。由于聚合后試驗(yàn)群體個(gè)體數(shù)較少緣故，故不考慮性別因素。聚合后共得到8種聚合基因型（表5）。從體重指標(biāo)看，試驗(yàn)群體中CTGGGG型體重除與TTGAGA型個(gè)體間差異不顯著，與其他基因型個(gè)體間均呈現(xiàn)顯著差異，且CTGGGA、TTGGGG與CTGGGG基因型間呈差異極顯著（P＜0.01），TTGAGA與TTGGGG、CTGGGA間存在差異顯著（P＜0.05）；從全凈膛重指標(biāo)看，幾種聚合基因型中，除了CTGGGG基因型和TTGAGA基因型間差異不顯著，與其他幾種基因型間均差異顯著；CCGAGA基因型的體重和全凈膛重平均值都最高，但個(gè)體數(shù)量少，有必要擴(kuò)大樣本做進(jìn)一步驗(yàn)證，其次為CTGGGA基因型，兩個(gè)指標(biāo)一致，這是由于兩個(gè)指標(biāo)呈正相關(guān)引起的。此外，基因型CCGGGA的胸肌率與TTGAGA基因型間表現(xiàn)出顯著差異（P＜0.05），與CTGGGG、CTGGGA、TTGGGG、TTGGGA間均呈差異極顯著關(guān)系（P＜0.01），CCGGGG聚合基因型的胸肌率平均值最高，其次是CCGGGA基因型；在全凈膛率這個(gè)指標(biāo)，TTGAGA基因型的平均值最高，其次為CCGGGA基因型，但各基因型間差異都沒(méi)達(dá)到顯著水平。

3　討論

3.1MyoG基因多態(tài)性對(duì)肌肉的影響

在不影響肉質(zhì)風(fēng)味的前提下，動(dòng)物能快速生長(zhǎng)、肌肉沉積率高一直以來(lái)是畜禽育種的目標(biāo)之一，研究證實(shí)，MyoG基因能在所有骨骼肌中表達(dá)，其表達(dá)程度直接影響畜禽的產(chǎn)肉性能［13］。WEINTRAUB等［14-15］研究表明，敲除MyoG基因的小鼠出生后會(huì)發(fā)生骨骼肌的發(fā)育嚴(yán)重缺陷。缺失MyoG基因的小鼠要比正常小鼠個(gè)體小。唐瑩等［16］利用PCR-SSCP技術(shù)檢測(cè)京海黃雞MyoG基因外顯子多態(tài)性，結(jié)果表明，MyoG基因多態(tài)與京海黃雞生長(zhǎng)性狀相關(guān)。ZHANG等［17］再一次證實(shí)了MyoG基因多態(tài)性對(duì)京海黃雞的生長(zhǎng)性狀有影響。XUE等［19］報(bào)道，肌細(xì)胞生成素基因單核苷酸多態(tài)性對(duì)豬的初生重和背標(biāo)厚度有顯著影響。王健等［20］對(duì)太湖鵝MyoG基因研究報(bào)道，在外顯子1中第108位點(diǎn)處發(fā)現(xiàn)堿基C/T突變，推斷該基因多態(tài)性對(duì)太湖鵝早期增重有顯著影響。本研究中，共發(fā)現(xiàn)三穗鴨MyoG基因6個(gè)SNPs，其中g(shù).2977G＞C位點(diǎn)發(fā)生的G/C突變使密碼子由GAG變?yōu)镚AC；所定義的幾種基因型中，MyoG基因g.1131C＞T的不同基因型胸肌率有顯著影響，CC型顯著高于CT和TT型，TT型顯著高于CT型，公鴨的胸肌率差異顯著。MyoG基因g.2204G＞A的不同基因型對(duì)體重和全凈膛重有顯著影響，GG型均顯著高于GA型。其余的性狀在各個(gè)SNPs的不同基因型間和性別間差異不顯著。

率eat 2.08肉）1±瘦Leanmpercentage（%24.4率uscle tage1.51肌）5±胸Breastmpercen（%12.3率tage1.35肌uscle）腿Legmpercen（%12.06±率膛）2.96凈（%全iscerated Evpercentage.41±75率膛2.56凈tage（%）半Semi-evisceratedpercen.76±84率tage）2.25Traits宰屠Dressingpercen（%2±93.1狀性重uscle肌14胸Breastmweight（g）122±htertraits 重ht肌uscle）9腿Legmweig（g8±11Ggeneandslaug重膛）64凈（g全iscerated Evweight986±重ht8 yo膛）凈（g08±6Semi-eviscerated半weig11析重）±85分體ghter（g聯(lián)屠Slauweight1218關(guān)的狀重）性體（g宰Weight1308±76屠與er點(diǎn)別）位性Gend態(tài)♀（24多型因因type8）（6基基G GenoCC3　MyoheassociationresultsbetweenthegenotypeofMT Table3　T點(diǎn)Ps表位SNg.1131C＞2.924±22.51.27b7±11.32.1211.16±5.20.14±735.944±81.92.880±94.220115±202±111911±1103733±111±12213021383±136）♂（442.750±23.21.40b2±11.71.8911.48±4.57.94±735.104±82.92.6693.82±187±1117114±02±110021624±111±11512721356±121T（68）2.230±22.60.897±10.91.4011.62±3.57.40±763.57.71±853.814±93.68113±109±11834±9101261±111±11812681357±154）♀（20（24）CT2.411±19.32a7.89±1.31.5911.42±4.03.32±781.433±88.42.659±96.2±2185193±12377±9101316±112±10413241375±113♂（4）2.41.05±22a1.49.46±101.258±11.53.28.72±763.38.16±863.578±94.013108±90±12941±8100270±111±10812771360±138T（24）3.072±22.61.853±11.31.8011.29±4.59.80±725.00.08±822.359±91.926114±233±1187999±326±911±8812631373±82）♀（56）（100TT2.247±22.51.15c4±10.61.7911.93±3.15.56±742.96.45±833.448±92.315109±223±12626±810749±911±11112721377±110）♂（442.68.59±22c1.59.02±111.787±11.54.04.58±734.20.68±822.826±92.122112±237±11611±810336±911±9712671374±93T（100）3.761±24.23.520±11.50.240±12.70.94.86±730.44.45±831.240±93.523109±92±1291957±83181±±11512121295±106♀（8）（12）GAAg.2186G＞1.992±23.31.038±12.31.9110.94±4.71.85±743.691±.8833.079±93.319146±179±122179±1114220±113±10814711575±192♂（4）2.71.91±232.54.79±111.031±12.10.87.19±740.37.57±830.806±93.427121±84±124331±1105060±111±17112981388±178T（12）2.788±22.61.675±11.21.5911.43±4.08.05±744.30.28±832.554±92.421114±185±11208±810134±911±8912591363±0972）♀（11）（228GG2.335±22.21.283±10.61.7511.61±4.15.25±744.578±83.13.407±93.718109±219±112724±1104447±111±14812931379±1486）♂（112.556±22.41.503±10.91.6611.52±4.08.15±744.403±83.23.0693.11±191±1119117±06±110162041±111±12312761371±124T（228）1.275±24.10.649±12.21.9111.86±3.35.00±763.81.95±842.856±93.624120±14±11514973±6187±110±19512001285±247♀（8）（16）GAAg.2204G＞0.874±22.50.882±10.50.0112.02±0.23.73±710.04.28±811.298±94.1±1791114±1089861±98976±±12911311200±120♂（8）1.285±23.31.190±11.41.1011.94±3.13.87±733.052±83.11.832±93.924106±99±107a11917±2731±110±14111661243±166AT（16）2.869±22.61.789±11.11.5811.49±4.00.89±734.21.17±832.503±92.421113±186±11907±710834±811±8312601364±862）♀（11）（224GG2.386±22.21.330±10.71.7811.56±4.16.45±744.634±83.33.452±93.718111±210±122241±1104066±111±14513111399±1442）♂（112.62.48±221.58.95±101.673±11.54.05.17±744.38.26±833.068±93.019112±198±1104b24±1101750±111±12012851381±119BT（224）

率eat 2.37肉）2±瘦Leanmpercentage（%24.2率uscle tage2.30?。?±胸Breastmpercen（%11.7率tage0.32肌uscle）腿Legmpercen（%12.46±率膛）1.81凈（%全iscerated Evpercentage.33±75率膛2.36凈tage（%）半Semi-evisceratedpercen.45±85率tage）1.80Traits宰屠Dressingpercen（%0±94.3狀性重uscle肌20胸Breastmweight（g）115±重ht肌uscle）5腿Legmweig（g2±12重膛）61凈（g全iscerated Evweight982±重膛ht）3凈（g半Semi-evisceratedweig13±611重體ghter）±81屠Slauweight（g1229重）體Weight（g1303±67別er性）edtable3Gend♀（16型因typetinu基Geno（56）onAA3　CA表Ps續(xù)點(diǎn)位SNg.2920G＞2.221±21.71.292±10.21.3411.49±3.05.94±743.121±84.44.307±93.319104±207±110514±1101542±111±12012611351±113）♂（402.46.43±221.70.65±101.217±11.72.69.05±752.87.71±843.713±93.619107±178±11404±9100133±111±10812521337±102T（56）2.865±22.51.786±10.81.5011.69±4.42.83±724.67.84±812.291±91.519108±166±1187993±0017±111±8612481365±105）♀（56）（100GA2.396±22.01.145±10.52.0711.50±5.41.95±735.995±82.62.549±94.517110±219±116445±1108868±111±18813361411±175）♂（442.624±22.31.512±10.71.7411.61±4.80.32±735.190±82.22.8292.86±189±1018117±27±110164439±111±14412871385±139T（100）2.928±22.51.568±11.51.7810.99±3.68.01±753.57.26±842.548±93.022120±223±11226±810853±811±9912741369±96）♀（48（84）GG2.279±23.11.338±11.31.8211.81±3.51.91±733.833±82.53.186±93.121117±221±121127±1102948±111±12812941392±161）♂（362.62.84±221.43.49±111.804±11.33.57.54±743.69.52±832.752±93.121119±227±11327±9100551±111±11012831379±125T（84）2.849±22.61.741±11.21.6211.47±3.88.81±734.16.13±832.552±92.520112±185±11302±810229±911±9012561358±962）♀（1132）（2CCTg.2962C＞2.308±22.21.309±10.61.7211.59±4.08.27±744.500±83.23.345±93.719110±209±112829±1104553±111±14912991385±1490）♂（122.568±22.41.544±10.91.6611.53±3.95.05±744.307±83.13.0393.16±191±1119117±09±110162241±111±12512781372±126T（232）0 0 0 0 0 0000000♀（0）（8）CT2.175±24.12.272±12.00.0912.13±4.95.13±774.59.55±851.863±92.430127±67±12547±510462±711±12212581363±159♂（8）2.17.15±242.27.02±120.093±12.14.95.13±774.53.55±851.863±92.430127±67±12547±510462±711±12212581363±159T（8）3.600±23.02.340±11.21.5211.79±4.07.57±752.78.76±841.681±91.431111±226±11177±809095±710±7511821293±81）♀（168）（2CCCg.2977G＞1.527±21.70.753±11.61.8710.14±4.34.62±733.975±82.10.961±92.217117±262±100904±1103021±111±18212621370±213）♂（122.777±22.41.728±11.31.7611.09±3.96.74±743.33.64±831.385±91.724113±230±1186988±106±911±12612161326±142T（28）2.582±22.01.263±11.31.6210.69±5.54.36±735.89.56±822.812±93.220117±220±11228±9100157±111±6813061401±67）♀（482）（7GC3.230±23.21.275±11.42.7611.75±3.71.35±744.166±83.23.184±94.319119±281±124242±1106568±111±14213191399±154）♂（242.782±22.41.237±11.32.0511.04±4.91.69±735.269±82.72.9093.59±198±1124114±0733±1102161±111±9513101400±99T（72）2.808±23.32.043±11.21.2912.14±1.94.17±742.46.50±832.352±92.219111±110±1273993±619±811±9012351341±111）♀（56）（140GG2.139±22.01.243±10.31.3111.75±4.33.34±744.824±83.33.621±93.819106±171±123229±1104754±111±15312981384±148）♂（842.461±22.6數(shù)1.64體otsignificant（P＞個(gè)9±本asn10.6樣為字1.29數(shù)中11.91±號(hào)括，值3.53均平.27±的總74母公體3.99群驗(yàn)0±試ithoutanyidentificationtablethedifferencew83.4示），w0.053.23?！癟”表ples93.17±.05）＞0（Pifference（P＜berofsam著19顯8±不10異差eanthenum示表15識(shí)120±標(biāo)何任parenthesesm無(wú)12±15），1015＜0.0bersbetween（Pum著26顯40±1平水nwithdifferentsuperscriptlettersindicatesignificantdeanthen110.05示ecolumracketsm±134表母1273字同mbersinb不nu有1366±134，esitesandtraits，thesam具列同比對(duì)T（140）同paredtothesam間型因alearetotalaverageand基不的狀aleandfem性一eansm同點(diǎn)同Differentgenotypescom位一）.“T”m0.05

率肉meat）3.46瘦Leanpercentage（%）1.8110uscle 6±胸肌率Breastmpercentage（%.54±tageuscle率）2.77Legm肌腿percen（%.12±11膛率Eviscerated）6.11percentage凈5±70.4（%全膛）6.22率凈（%Semi-eviscerate dpercentage 1±79.4）2.13半率屠宰TraitsDressingpercentage（%.67±91狀性重uscle 21.6ht20肌）胸weig（g102±ghtertraits Breastm重uscle ht）29slau肌腿Legmweig（g107±eand2agen重膛）87凈weight（g967±EF全Eviscerated heassociationresultsbetweenthegenotypeofM重膛ht7析凈weig（g）90±9分半10聯(lián)Semi-eviscerated關(guān)的重7狀體ghter（g）性屠Slauweight60±812宰屠與點(diǎn)重ht位（g）±80態(tài)Weig1374多因基別type體）2a性4　MEFGenoTable4　T♀（20型pe表因基GenotyGG1.793±21.31.28.21±100.98.12±111.9972.87±1.885±82.50.74.78±9223102±11110±155996±7128±1116966±112±1811364）♂（202.600±21.51.49.37±101.96.12±114.47b71.66±4.6480.98±1.61.22±9220102±20109±119982±3309±1112763±112±1321369T（40）2.67.01±231.73.41±111.2911.59±3.065±74.73.257±84.02.56.68±9220116±15117±±801013939±811255±912±10113550）♀（10GA2.387±22.41.30.78±101.84.69±114.3574.55±4.8783.33±3.635±93.9182±1122121±1036±1244358±1114705±113±14613900）♂（102.52.74±221.55.10±111.5711.64±3.72a5±74.64.120±83.73.17.31±9319114±18119±±10410241849±1112480±112±1261372T（200）nificant（P＞asnotsig數(shù)體個(gè)本樣為字?jǐn)?shù)中號(hào)括均iden值，tificationtablethedifferencew平的總母公驗(yàn)0.05），withoutany體群試示表T”?！?05）＞0（P著顯不異差ples表記fsam標(biāo)ercaselettersindicatesignificantdifference（P＜無(wú)bero，.05）um＜0（P異ithdifferentsuperscriptloweanthen著顯thesesm差示nwaren表母berinp不etraits，thesam字ecolumum寫(xiě)小文英同有具列同，alearetotalaverageandn狀性paredtothesam同相比escomaleandfem對(duì)間eansm型enotyp不Differen因tg基同）.“T”m0.05A7918G＞/g.4type＞AGeno5G型g.4791因A、Ps/基G＞SNg.2204T、31C＞g.11析分otypeandslaughtertraits聯(lián)關(guān)狀性宰regatedgen屠與型因基nalysisofagg合5　聚表Table5　A狀性TraitsGAGA2）cdTT（11225±67CGAGG）Bab TT（116±22A1369GGGG8）a TT（24A1439±4GAGG4）a CT（2±48A1442GGGG）d CT（82C±81168GAa GA1ACC（4）60±314GAGG4）Bab CC（41379±35AGGCbc GG）3BCC（4±21280ht（g）Weig重體cBC609±92a±19A1022Bab1033±39ABab±42A105473Cd831±a3A75±310Bab1034±31ABbc28A960±t（g）eighEvisceratedw重膛凈全Bb0.629±.411c0.20BC4±10.4bcBC0.41.59±10c0.44CD3±10.1d.76D±09.18Aa0.3612.74±0.32Aa5±13.0Aa0.48.65±13e（%）ercentagusclepBreastm率肌胸Aa2.3375.95±0.75Aab4±74.6Ab1.5271.78±1.65Aab7±72.9A2.85.15±710.89Aab73.63±1.22Aab3±75.0Aab1.02.00±75Evisceratedrate（%）率膛凈全osignificantdifference.eann樣0.01），and數(shù)samelettersm體個(gè)本為字?jǐn)?shù)中號(hào)1level（P＜括，著顯不異差示表母字nificantdifferenceat0.0同相有eansig具1），＜0.0（Pitallettersm著顯異差平水0.010.05），differentcap在示ers（P＜表母字.05lev寫(xiě)大同不5），＜0.0（P著nificantdifferenceat0ples異eansig顯差平berofsam水0.05母ifferentsmalllettersm在示eanthenum表字，dthesesm同erow寫(xiě)小同Inthesam不標(biāo)ersinparen行Numb

3.2MEF2a基因多態(tài)性

研究表明，多種生理過(guò)程與MEF2基因家族相關(guān)，如骨骼發(fā)育、肌肉形成、肝臟纖維化和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等［2］。MEF2a基因?qū)儆贛EF2基因家族一員，它在其中也扮演著至關(guān)重要的角色，NAYA等［21］報(bào)道，小鼠敲除MEF2a基因，大多數(shù)在第一周就會(huì)表現(xiàn)出明顯心室擴(kuò)張，肌纖維碎片等現(xiàn)象而死亡，能存活的個(gè)體到了成年因缺乏心臟線(xiàn)粒體也容易發(fā)生猝死。LIEB等［22］認(rèn)為，缺少M(fèi)EF2基因?qū)谛牟。–AD）不存在影響，然而在2012年，LIU等［23］對(duì)不同人群的冠心?。–AD）病例進(jìn)行分析，結(jié)果雖未能證實(shí)冠心病的產(chǎn)生與MEF2a基因的多態(tài)性有直接關(guān)系，但在1 008個(gè)研究病例中，有5個(gè)病例在MEF2a基因外顯子11區(qū)域出現(xiàn)了21個(gè)堿基缺失，因此推測(cè)MEF2a基因的變異可能是造成CAD原因之一。2009年，周艷等［24］報(bào)道，MEF2a基因的3個(gè)SNPs位點(diǎn)與雞的部分屠宰性狀有顯著相關(guān)，可推斷MEF2a基因可作為影響雞屠宰性狀的候選基因。本研究顯示，在三穗鴨MEF2a基因外顯子11中發(fā)現(xiàn)的2個(gè)SNPs位點(diǎn)，分別定義為GG、GA兩種基因型，分析表明，GA為優(yōu)勢(shì)基因型，等位基因G則為優(yōu)勢(shì)等位基因，與屠宰性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析表明，MEF2a基因g.47915G＞A/g.47918G＞A的不同基因型對(duì)全凈膛率有顯著影響，GA型顯著高于GG型，其余的性狀在兩個(gè)SNPs的不同基因型、性別間差異不顯著。

3.3MyoG、MEF2a基因與三穗鴨屠宰性狀的關(guān)聯(lián)

研究表明，MyoG與MEF2a基因具有協(xié)同作用。常國(guó)斌等［25］研究報(bào)道，對(duì)雞肌內(nèi)脂肪影響最明顯的優(yōu)勢(shì)單個(gè)基因，經(jīng)兩基因或三基因聚合后，并未表現(xiàn)出相應(yīng)的優(yōu)勢(shì)情況；而在擴(kuò)大樣本數(shù)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，最佳聚合基因型與相應(yīng)的單個(gè)基因的有利基因型結(jié)果一致，且整體效應(yīng)要高于單個(gè)基因型，表現(xiàn)出一定程度的累加效應(yīng)［26］。其他研究也表明，單個(gè)SNP所對(duì)應(yīng)基因型與性狀間關(guān)聯(lián)分析結(jié)果在不同的品種間通常是不同的，沒(méi)有多個(gè)位點(diǎn)聯(lián)合分析準(zhǔn)確［27-29］。本研究以三穗鴨為研究對(duì)象，在單基因關(guān)聯(lián)分析時(shí)，3個(gè)位點(diǎn)的平均值最高的基因型分別是CC、GG和GA型，但是在聚合效應(yīng)分析時(shí)，并不是CCGGGA基因型的平均值最高，這說(shuō)明兩個(gè)基因間存在互作效應(yīng)，并沒(méi)有表現(xiàn)出累加效應(yīng)，這與常國(guó)斌等［25-26］的研究結(jié)果不一致。在基因間存在交互作用時(shí)，如果利用單基因進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇往往會(huì)顧此失彼，不能收到良好的育種效果，因此本研究的結(jié)果表明對(duì)影響同一性狀的不同基因進(jìn)行聚合效應(yīng)分析是十分必要的。本研究結(jié)果所顯示的平均值最高的聚合基因型個(gè)體數(shù)量都偏少，只有4個(gè)，因此有必要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本進(jìn)行驗(yàn)證，其次本研究只進(jìn)行了兩個(gè)基因的聚合效應(yīng)分析，證明兩個(gè)基因間存在互作，然而影響屠宰性狀的基因較多，所以有必要進(jìn)行更多基因的聚合效應(yīng)分析，同時(shí)在其它鴨品種中是否存在與本研究一致的聚合效應(yīng)也需要做進(jìn)一步驗(yàn)證，以期得到更真實(shí)有效的分子標(biāo)記，從而為鴨屠宰性狀的多基因聚合育種提供依據(jù)。再者，通過(guò)對(duì)不同模式生物的深入研究，對(duì)于人類(lèi)醫(yī)學(xué)進(jìn)行肌肉相關(guān)疾病的研究、治療也能提供一定的幫助或具有參考意義，與此同時(shí)，在進(jìn)行人類(lèi)肌肉相關(guān)疾病的研究時(shí)，也應(yīng)該考慮從多基因聚合的角度去研究，也許能達(dá)到事半功倍的效果。

4　結(jié)論

本試驗(yàn)首次將鴨的MyoG基因和MEF2a基因進(jìn)行聚合效應(yīng)分析，結(jié)果單個(gè)基因的有利基因型聚合后并不是最佳基因型，說(shuō)明基因間存在互作效應(yīng)，但是最佳基因型在本群體中個(gè)體數(shù)偏少，有必要擴(kuò)大樣本做進(jìn)一步研究和進(jìn)行更多個(gè)基因聚合效應(yīng)分析，才能為家禽的多基因聚合育種提供有效的分子標(biāo)記。

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（責(zé)任編輯林鑒非）

The Effect of MyoG and MEF2a Gene Pyramiding on Slaughter Traits of Ducks

ZHAO Zhong-hai， LI Hui， YI Heng-jie， YANG Sheng-lin， PENG Bang-xing， BU Xiao-yan
（College of Animal Science， Guizhou University/Key Laboratory of Animal Genetics， Breeding and Reproduction in the Plateau Mountainous Region， Ministry of Education， Guizhou University， Guiyang 550025）

【Objective】 The aim of the present study was to explore the polymerization effects of MyoG and MEF2a genes on duck slaughter traits in order to provide a research foundation for further determining the molecular genetic markers related to duck growth traits， also provide a basis of polygene pyramiding breeding of slaughter traits of ducks.【Method】 A total of 240 individuals of Sansui ducks were selected as experimental material in the study， MyoG gene and MEF2a gene were amplificated and had PRC direct sequencing to detect the single nucleotide mutation （SNPs） of all exons of two genes. Base mutation （SNPs） was detected by direct sequencing of the PCR products. GLM statistical model of SPSS 18.0 software was used to analyze the association with different genotypes corresponding to the SNPs MyoG gene and MEF2a gene with Sansui duck slaughter traits. Based on the single gene association analysis results， the polymorphic sites of MyoG and MEF2a genes withsignificant influence on slaughter traits were employed to build polymerization genotype by using software PHASE 2.0. 【Result】The result showed that eight SNPs were found in MyoG gene and MEF2a gene， and six SNPs were found in MyoG gene and two SNPs were found in MEF2a gene. In all mutations， the G/C mutation in the g.2977G＞C SNP of MyoG gene resulted in the change of codon from GAG to GAC， and the coding amino acid changed from Glu to Asp； While 2 polymorphic site in the MEF2a gene， the G/A mutation at the g.47915G＞A SNP and the G/A mutation at the g.47918G＞A SNP led to codon change from GAA to AAA and GAT to AAT， and the coding amino acid from Glu/Lys and Asp/Asn. The other five SNPs belonged to synonymous mutations， which did not cause the variation of encoding amino acids. Besides， the SNPs fit with Hardy-Weinberg equilibrium except that g.1131C＞T of MyoG and g.47915G＞A，g.47918G＞A of MEF2a gene which were tested by χ2. The results of correlation analysis between polymorphism sites and slaughter traits showed that the SNP of g.1131C＞T and the SNP of g.2204G＞A in MyoG gene had significant influence over the breast muscle percentage， the body weight and eviscerated weight， and the correspondings to homezygote genotype CC and GG were dominant genotypes. The SNP of g.47915G＞A and g.47918G＞A in MEF2a gene affected the eviscerated weight， and the GA genotype individuals belong to dominant genotype individuals. The g.1131C＞T and g.2204G＞A in MyoG gene and g.47915G＞A and g.47918G＞A in MEF2a gene， which relating to slaughter traits （body weight， eviscerated weight， breast muscle rate and eviscerated rate） were selected and the multiple gene polymerizations （interaction） were analyzed， the results showed that after polymerization， the eviscerated rate of eight kinds of aggregated genotype individuals were not significantly different among different genotypes， the mean value of TTGAGA genotype was the highest， followed by CCGGGA genotype. The differences of other three indexes among different genotypes reached a significant level， and weight and eviscerated weight were positively correlated， and the CCGAGA genotype was the highest， followed by CTGGGA genotype； The average rate of chest muscle of CCGGGG genotype was the highest， followed by CCGGGA genotype. The result indicated that the highest main value of genotype of single gene was CC， GG and GA. After two genes combined， CCGGGA genotype in the four indicators was not the optional combination， which showed that there exist interactive effect between MyoG gene and MEF2a gene.【Conclusion】The results revealed that one single molecular marker breeding maybe not good and cannot obtain good result from the interaction of two genes. However， regnant aggregated genotype individuals was not more than enough， more samples should be selected to investigate the aggregated effect of more genes in further study， and to obtain effective molecular markers for poultry breeding.

MyoG gene； MEF2a gene； slaughter traits； polymerization effect

2015-08-27；接受日期：2016-07-12

教育部科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（211168）、貴州省科技廳農(nóng)業(yè)重大專(zhuān)項(xiàng)［黔科合重大專(zhuān)項(xiàng)字（2012）6004號(hào)］、《三穗鴨國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)》制定與養(yǎng)殖技術(shù)規(guī)程編制橫向（H120183）、貴州省科技合作計(jì)劃聯(lián)合基金項(xiàng)目［黔科合LH字（2015）7677號(hào)］

聯(lián)系方式：趙忠海，E-mail：andyzhzhao@163.com。通信作者李輝，F(xiàn)ax：0851-88298003；E-mail：ellenlihui@sina.cn