王晶,劉明,唐純志.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 50405 .廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 50405
電針治療對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子TNF-α、IL-1β的影響
王晶1,劉明2,唐純志2
1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 510405 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院,廣東 廣州 510405
目的:觀察電針治療對(duì)顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的影響。方法:通過(guò)拔除大鼠右上頜磨牙,人為造成大鼠偏側(cè)咀嚼,建立大鼠顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征(TMD)模型。實(shí)驗(yàn)分電針組、空白組、模型組3組,按組進(jìn)行相應(yīng)的干預(yù)然后收集血清和組織勻漿采用酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)法檢測(cè)TNF-α、IL-1β水平。結(jié)果:與空白組血清炎癥因子含量進(jìn)行比較,模型組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量大幅升高(P<0.05);與模型組比較,電針組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05)。與空白組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中炎癥因子的含量進(jìn)行比較,模型組中IL-1β、TNF-α的含量升高(P<0.05);與模型組比較,電針組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05)。結(jié)論:電針能夠有效降低大鼠血清中IL-1β、TNF-α等促炎因子的表達(dá)水平,抑制模型大鼠顳下頜關(guān)節(jié)炎的指數(shù),具有一定抗炎消腫鎮(zhèn)痛作用。
顳下頜關(guān)節(jié)綜合征;電針治療;炎癥因子;大鼠
顳下頜關(guān)節(jié)紊亂綜合征(temporomandibularjoint dysfunction syndrome,TMJDS),又稱(chēng)顳下頜功能紊亂病(temporomandibular disorders,TMD),該疾病包括了顳下頜關(guān)節(jié)和頜面肌肉的癥狀,主要有顳下頜關(guān)節(jié)彈響、頜面部疼痛與下頜運(yùn)動(dòng)障礙,同時(shí)可伴有耳部、肩頸部和頭部的疼痛。TMJDS目前已被世界衛(wèi)生組織(WHO)列為影響人類(lèi)健康的第四位口腔流行病,診斷的依據(jù)是患者的臨床癥狀或體征,發(fā)病較為隱匿,其癥狀可以輕到患者意識(shí)不到這是一種疾病,也可以重到疼痛難忍,張口受限,不能正常咀嚼。TMJDS的人群發(fā)病率約為25%~60%[1],對(duì)人類(lèi)正常生活的影響與日俱增。TMJDS可在其血清和關(guān)節(jié)液中發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子 -α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的存在,作為炎癥因子參與的關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)和髁上組織的分解破壞的過(guò)程已被多數(shù)學(xué)者認(rèn)可[2~4]。TMJDS多為各種原因引起顳下頜關(guān)節(jié)周?chē)∪函d攣而造成局部疼痛,張口運(yùn)動(dòng)障礙,通過(guò)電針的電流刺激可以明顯解除咀嚼肌痙攣,調(diào)節(jié)神經(jīng)興奮性,改善韌帶和關(guān)節(jié)的緊張度,使癥狀消除。為探討電針治療與血清及關(guān)節(jié)組織勻漿中TNF-α、IL-1β含量之間的關(guān)系,本研究提取實(shí)驗(yàn)大鼠血清和顳下頜關(guān)節(jié)及組織勻漿采用血清酶聯(lián)免疫吸附法(ELSA)進(jìn)行炎癥因子檢測(cè),現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1.1實(shí)驗(yàn)材料選用SPF級(jí)SD大鼠共30只,雌雄各半,體重180~220 g,大鼠身體狀況良好,牙列完整,無(wú)牙齒磨耗以及牙頜畸形。動(dòng)物合格證號(hào):44005800000881,許可證號(hào):SYXK(粵)2013-0001,購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。飼養(yǎng)期間給予嚙齒類(lèi)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料(由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)及自由飲水。
1.2藥物及試劑注射用頭孢拉定(由廣州中醫(yī)藥大學(xué)衛(wèi)生所提供,規(guī)格1.0 g,10瓶裝,批號(hào):31001202);IL-1β、TNF-α ELISA試劑盒,武漢新啟迪生物科技有限公司,批號(hào)分別為:EIA05874r、EIA06460r。
1.3主要儀器電針治療儀(青島鑫升實(shí)業(yè)有限公司);SPX型智能生化培養(yǎng)箱(寧波江南儀器有限公司);MultifugellR酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo公司);Wellwash 4MK2自動(dòng)洗板機(jī)(美國(guó)Thermo公司);Ascent高速離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司)、勻漿機(jī)IKA-WERKE(德國(guó)GMBH責(zé)任有限公司);超低溫冰箱702(美國(guó)Thermo公司)。
1.4實(shí)驗(yàn)分組與TMJDS模型制備30只大鼠隨機(jī)分為電針組、空白組、模型組各10只。模型組和電針組參照張娟等[5]拔牙造成咬合紊亂,從而改變關(guān)節(jié)負(fù)荷造成TMJ損傷,和付斌等[6]拔牙創(chuàng)愈合模型的實(shí)驗(yàn)方法,建立大鼠TMJDS模型。肌肉注射10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)麻醉后,仰臥固定四肢,另用固定繩勾住大鼠的上下切牙并往上下方向拉開(kāi)暴露大鼠口腔,進(jìn)行口腔消毒,用拔牙挺作為拔牙工具。拔牙方法為首先用探針?lè)蛛x大鼠牙齦然后用止血鉗和鑷子尋找并固定磨牙位置,確定位置后用微創(chuàng)拔牙挺挺松右上頜3顆磨牙,然后用鑷子和止血鉗將磨牙分別拔出。肌肉注射頭孢拉定防止感染。上述處置完成后大鼠全部蘇醒,從實(shí)驗(yàn)當(dāng)天起即喂食常規(guī)鼠料和水。
1.5電針治療造模2周后進(jìn)行電針治療,針刺取穴為“下關(guān)”、“太陽(yáng)”穴,穴位定位參照李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》,太陽(yáng)穴位于外眼角后方顳窩中,下關(guān)穴位于顳下頜關(guān)節(jié)下方,用30號(hào)0.5寸華佗牌毫針針尖向下斜刺0.5~1.0 cm。導(dǎo)線連接雙側(cè)“太陽(yáng)”和“下關(guān)”穴,治療強(qiáng)度1 mA,頻率10 Hz,脈寬1 ms,刺激15 min,每天1次,治療時(shí)間為2周,模型組和空白組大鼠每天抓握5min,抓握方式同電針組治療時(shí)的抓握方式,抓握方式為常規(guī)抓取方法,主要作用為排除治療組的抓握干擾。
1.6血清樣本制備末次治療后禁食不禁水24 h,用眼眶后靜脈叢真空采血管采血法進(jìn)行采血,每只大鼠采血1.5 mL。真空采血管配樣分離血清,離心速度3000 r/min。采集完血清后放入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
1.7組織勻漿樣本制備采血后斷頸處死大鼠,剪頭取出顳下頜關(guān)節(jié)及組織,按組織重量與生理鹽水1∶9的質(zhì)量分?jǐn)?shù)混合用勻漿機(jī)進(jìn)行研磨后制成勻漿液,3000 r/min離心15 min,溫度4℃,取上清液1mL凍存于-80℃冰箱內(nèi)備用。
1.8炎癥因子TNF-α、IL-1β的采集和檢測(cè)取出血清和組織勻漿待測(cè)樣本和ELISA試劑常溫解凍,嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0 for Windows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,根據(jù)對(duì)資料的分析,多組均數(shù)的比較采用單因素方差分析,計(jì)量資料以(±s)表示,組間比較方差齊時(shí)選擇LSD法,方差不齊時(shí)選擇Dunnetts T3法;檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
2.1各組大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)比較見(jiàn)表1。與空白組血清炎癥因子含量進(jìn)行比較,模型組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量大幅升高(P<0.05);與模型組比較,電針組血清內(nèi)IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05)。
2.2各組大鼠組織勻漿IL-1β、TNF-α表達(dá)比較見(jiàn)表2。與空白組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中炎癥因子的含量進(jìn)行比較,模型組中IL-1β、TNF-α的含量升高(P<0.05);與模型組比較,電針組顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05)。
表1 各組大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)比較(±s) mmol/L
表1 各組大鼠血清IL-1β、TNF-α表達(dá)比較(±s) mmol/L
與空白對(duì)照組比較,①P<0.05;與模型組比較,②P<0.05
組別空白組模型組電針組n 10 10 10 IL-1β 39.45±27.44 259.60±64.55①130.50±31.52①②TN F-α 113.50±24.07 390.75±7.79①238.62±13.84①②
表2 各組大鼠組織勻漿IL-1β、TNF-α表達(dá)比較(±s)mmol/L
表2 各組大鼠組織勻漿IL-1β、TNF-α表達(dá)比較(±s)mmol/L
與空白對(duì)照組比較,①P<0.05;與模型組比較,②P<0.05
近年來(lái),對(duì)TMJDS病因機(jī)制的研究已集中在神經(jīng)免疫學(xué)尤其是各種促炎細(xì)胞因子的解釋?zhuān)鳬L-1β、TNF-α是TMJDS病因和發(fā)展中最主要的致炎細(xì)胞因子[7]。電針治療對(duì)TMD模型大鼠血清和顳下頜關(guān)節(jié)組織勻漿中炎性因子的影響,通過(guò)檢測(cè)3組大鼠血清發(fā)現(xiàn),電針治療能有效降低TMD模型大鼠血清中炎性因子IL-1β和TNF-α的含量,抑制局部炎癥反應(yīng),進(jìn)而控制TMJDS的病變過(guò)程。
TMJDS患者可引起顳下頜關(guān)節(jié)非特異性炎癥反應(yīng),關(guān)節(jié)內(nèi)炎癥因子高表達(dá)是TMJDS的一個(gè)主要病理變化,抑制炎癥因子的表達(dá)在緩解和治療炎癥反應(yīng)的過(guò)程中起關(guān)鍵作用。各種傷害性刺激均可引發(fā)關(guān)節(jié)組織內(nèi)感覺(jué)神經(jīng)元合成和釋放多種炎性神經(jīng)肽,從而刺激周?chē)M織的多種細(xì)胞合成釋放IL-1β、TNF-α為主的多種致炎細(xì)胞因子加重局部炎癥反應(yīng)。中醫(yī)學(xué)理論認(rèn)為T(mén)MJDS屬于痹癥、頰痛、頷痛等范疇,臨床主要表現(xiàn)為疼痛,而治療痛癥乃中醫(yī)傳統(tǒng)針灸之強(qiáng)項(xiàng),臨床常用電針療法來(lái)針對(duì)性治療TMJDS,電針治療能夠發(fā)揮其通經(jīng)活絡(luò)、鎮(zhèn)靜止痛的優(yōu)勢(shì),電針對(duì)TMJDS的治療效果已得到臨床的廣泛認(rèn)可[8]。綜上所述,電針治療能夠有效降低TMJDS大鼠血清和顳下頜關(guān)節(jié)中IL-1β、TNF-α的含量,降低促炎因子的表達(dá)水平,從而提高大鼠抗炎因子的表達(dá)水平。本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明電針治療干預(yù)后電針組大鼠的炎癥因子IL-1β、TNF-α含量明顯降低(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。電針治療能夠降低TMJDS大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)的炎癥因子IL-1β、TNF-α的含量,從而有效降低IL-1β、TNF-α等促炎因子的表達(dá)水平,提高IL-1β、TNF-α等抗炎因子的表達(dá)水平。由炎癥因子的對(duì)比可見(jiàn),電針治療可明顯抑制大鼠顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)的炎癥指數(shù),具有一定的抗炎消腫、鎮(zhèn)靜止痛的作用。降低顳下頜關(guān)節(jié)內(nèi)血清中IL-1β、TNF-α的含量可能是電針治療TMJDS抗炎鎮(zhèn)痛的作用機(jī)理之一。
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(責(zé)任編輯:駱歡歡,李海霞)
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0256-7415(2016)07-0290-03
10.13457/j.cnki.jncm.2016.07.123
2016-02-11
王晶(1970-),女,副主任醫(yī)師,主要從事急危重癥工作。
唐純志,E-mail:jordan664@163.com。