范建華 戴有理 俞燕等

摘要[目的]了解我國地方雞種禽白血病的自然感染狀態(tài)，為今后該病的凈化提供依據(jù)。[方法]采用ELISA法和病毒分離方法，對國內10個地方雞種開展了ALVAB和ALVJ主要外源性禽白血病流行病學調查，并進一步對其中4個品系的F2代雞群進行ALV跟蹤監(jiān)測，同時對飼養(yǎng)過程中使用的弱毒活疫苗也進行了ALV抽樣檢測。[結果]ALVP27抗原陽性率為0～62.1%，ALVAB抗體陽性率為0～25.0%，ALVJ抗體陽性率為0～59.0%，病毒分離陽性率為0～22.0%。4個品系的F2代雞群1日齡胎糞ALVP27抗原陽性率為6.0%～67.0%，6周齡病毒分離檢測陽性率為2.0%～34.3%；國內有1個廠家2個種類2個批次的疫苗分離有ALV。[結論]我國地方雞種普遍存在ALV感染，不同地方雞種間差異較大，可能與不同地方雞種對ALV的遺傳抗性有關；某些品系種群的F2代雛雞ALV陽性率甚至略有提高，可能與疫苗接種污染有關。

關鍵詞地方雞種；禽白血??；流行病學調查

中圖分類號S851.34+7.2文獻標識碼A文章編號0517-6611（2016）04-133-03

Epidemiological Investigation of Avian Leukemia in Some Indigenous Chicken

FAN Jianhua1，DAI Youli1*，YU Yan1， XU Bu1* et al（1. Jiangsu Institute of Poultry Science， Yangzhou， Jiangsu 225125）

Abstract[Objective] To find the nature infection status of avian leukemia in some indigenous chicken. [Method] By using the method of ELISA method and virus isolation method， we investigated the ALVAB and ALVJ avian leukemia of ten indigenous chicken. ALV monitoring was carried out by the second generation of chickens in four lines. ALV sampling inspection was adopted for the modifiedlive vaccine in raising process. [Result]The ALVP27 antigen positive rate was 0-62.1%； ALVAB antibody positive rate was 0-25.0%； ALVJ antibody positive rate was 0-59.0%； positive rate of virus separation was 0-22.0%. ALVP27 antigen positive rate from the offsprings of four lines was 6.0%-67.0%. Positive rate of virus isolation test was 2.0%-34.3% at the age of sixweek old. Two kinds of vaccines from two batches produced by a manufacturer were polluted by ALV. [Conclusion] Most indigenous chicken are infected by ALV. There are great differences among the different breeds of indigenous chicken， which might be related to the ALV genetic resistance of different indigenous chicken. ALV positive rate of F2 chicks have enhanced slightly in some populations， which might be related to the vaccination pollution.

Key wordsIndigenous chicken； Avian leucosis virus （ALV）； Epidemiological investigation

禽白血病是由禽白血病病毒（Avian leucosis virus，ALV）引起的一種垂直傳播性疾病[1-2]。ALV屬于單股RNA反轉錄病毒，目前已發(fā)現(xiàn)能自然感染雞群的ALV只有A～E、J 6個亞群，其中除E亞型為內源性病毒以外，其他均為外源性病毒。外源性ALV均具有較強的致病性，特別是AB和J亞型ALV流行最普遍，危害性也最大[2]。禽白血病的危害主要表現(xiàn)為感染雞群出現(xiàn)腫瘤疾病及其所導致的慢性消耗性死亡、生產性能下降和免疫抑制等，嚴重時還影響雞蛋（胚）源細胞的利用，威脅著民生和社會安定[3]。該病在我國養(yǎng)雞場的發(fā)生與發(fā)展，起初進口白羽肉雞被感染，后來又迅速傳播至黃羽肉雞和進口蛋雞，近期陸續(xù)有地方雞種患病的報道[4]。由于目前禽白血病尚無商品化疫苗和特效治療藥物，目前防制AB和J亞型ALV以及其他外源性禽白血病的最有效手段是檢測和淘汰陽性雞群[4]。

早期了解雞群ALV自然感染狀態(tài)，開展ALV流行病學調查與研究，是制定ALV檢測和凈化方案與實施種雞群禽白血病凈化的必要措施。筆者對國內10個不同地方雞種的蛋清、胎糞和血漿等樣品開展抗原、抗體和病毒分離等檢測，并進一步對F2代雛雞進行了ALV追蹤，同時還對飼養(yǎng)過程中使用的不同弱毒活疫苗也進行了ALV抽檢檢測，旨在為今后進一步開展ALV凈化及地方雞種抗病育種研究等提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑與耗材。ALVp27抗原、ALVAB及ALVJ抗體檢測試劑盒，均購自美國IDEXX公司；胎牛血清和DMEM均購自HyClone公司；其他試劑均為國產分析純，購自南京譽日生物科技有限公司。試驗用DF1細胞由山東農業(yè)大學動物科技學院家禽腫瘤病實驗室饋贈。

1.1.2試驗雞群及檢測樣本。

1.1.2.1ALV初次流調試驗雞選擇及樣本采集。隨機選取綠殼蛋雞、仙居雞、蘆花雞、瑯琊雞、崇仁麻雞等10個地方品系不同日齡段（71～435 d）雞各100只，翅靜脈采血，1 500 r/min離心3 min后，分離上清置于4 ℃冰箱中冷藏備檢；所有母雞取對應2枚新鮮雞蛋蛋清，-20 ℃下反復凍融3次后備檢。

1.1.2.2ALV追蹤監(jiān)測的F2代雛雞選擇及樣本采集。隨機選取綠殼蛋雞雞、白耳雞、瓢雞和蘆花雞等F2代雛雞各100只，1日齡取胎糞，液氮凍融1次后備檢；6周齡采翅靜脈血，1 500 r/min離心3 min后，分離上清置于4 ℃下冷藏備檢。

1.2檢測方法及陽性結果判定ALV-p27抗原、ALV-AB及ALV-J抗體檢測方法及結果判定均按照美國IDEXX公司生產的ELISA檢測試劑盒說明書進行；DF-1細胞病毒分離按照山東農業(yè)大學動物科技學院家禽腫瘤病實驗室提供的方法進行[5]。對于母雞對應2枚蛋蛋清的檢測，只要有1枚為陽性，就判定該雞雞蛋蛋清檢測結果為陽性。

2結果與分析

2.110個地方品系雞的ALV流行病調查結果由表1可知，蛋清ALV-p27抗原陽性檢出率為0～62.1%，陽性率最高的是綠殼蛋雞，陽性率最低的是文昌雞和蕭山雞；ALV-AB抗體陽性檢出率為0～25.0%，陽性率最高的是崇仁麻雞，陽性率最低的是瑯琊雞、瓢雞、文昌雞、蕭山雞和固始雞；ALV-J抗體陽性檢出率為0～59.0%，陽性率最高的是蘆花雞，陽性率最低的是白耳雞；病毒分離陽性檢出率為0～22.0%，陽性率最高的是綠殼蛋雞，陽性率最低的是白耳雞和蕭山雞；抗原、ALV-J抗體和病毒分離陽性率均超過20.0%的為綠殼蛋雞。ALV-J抗體陽性檢出率普遍高于ALV-AB抗體，說明ALV-J可能是該原種場禽白血病感染的主要病原。

2.24個地方品系雞F2代雛雞ALV跟蹤檢測結果為進一步驗證ALV對地方品系雞的感染狀態(tài)，同時也為初步了解ALV在地方雞種間可能造成傳播的主要途徑，在前期流行病學調查的基礎上，選取綠殼蛋雞、白耳雞、瓢雞和蘆花雞等4個ALV陽性檢出率具有代表性的雞種作為此次監(jiān)測研究對象，對4個雞種的F2代雛雞1日齡胎糞進行了ALV-p27抗原和6周齡血漿病毒分離檢測。由表2可知，胎糞ALV-p27抗原陽性率為6.0%～67.8%，陽性率最高的是綠殼蛋雞，陽性率最低的是瓢雞；6周齡病毒分離陽性率為2.0%～34.3%，陽性率最高的是綠殼蛋雞，陽性率最低的是白耳雞。

2.34個雞種2個世代病毒陽性檢出率的比較根據(jù)美國ALV檢測金標準經驗，病毒分離陽性率是最能代表雞群ALV的自然感染狀態(tài)[5]。因此，該試驗又對綠殼蛋雞、白耳雞、瓢雞和蘆花雞4個雞種2個世代病毒陽性檢出率進行了比較。從圖1可以看出，綠殼蛋雞、仙居雞和蘆花雞陽性率均較F1代略有增加，只有瓢雞還基本保持原有陽性率水平。這說明地方雞種本身遺傳特性決定著對ALV自然抗性差異，同時也說明種雞垂直傳播和橫向感染是育雛期ALV傳播的重要原因。

2.4日常飼養(yǎng)過程中ALV對疫苗污染情況抽檢結果對該原種雞場日常飼養(yǎng)過程中使用的4個廠家3個批次共計4個品種的弱毒活疫苗，進行了ALV病毒分離抽樣檢測。由表3可知，國內某廠家B生產的雞痘苗和新支二聯(lián)苗有ALV污染，而其他3個廠家未檢出。

3討論與結論

近年來，禽白血病的廣泛傳播與蔓延，給我國養(yǎng)雞業(yè)造成了極大的經濟損失，我國地方雞種也面臨著禽白血病的威脅。筆者對國內10個地方雞種開展了ALV流行病學調查，結果表明地方雞種較普遍存在或曾經感染過ALV，特別是J亞群ALV。張勝斌等[6]研究表明地方雞種禽白血病陽性率較高。筆者選取4個雞種對F2代雛雞進行了ALV跟蹤監(jiān)測，并對飼養(yǎng)過程中所使用的弱毒活疫苗也進行了抽檢。結果表明，有3個雞種在剔除F1代陽性雞的基礎上，F(xiàn)2代陽性率仍有小幅度提高，有1個廠家2個批次的2個疫苗品種有ALV污染。由此推斷，F(xiàn)1代可能有部分陽性雞在檢測期帶毒或排毒[7]處于封閉階段，因而造成漏檢，致使F2代雛雞因垂直傳播和水平傳播的放大效應，或者因疫苗污染造成的感染，陽性率略有增加。高玉龍等[8]和楊克禮等[9]也曾報道蛋媒傳播和雛雞階段的橫向傳播以及疫苗污染等均是造成ALV感染的主要途徑。胡艷等[10]和張嬌[11]研究表明地方雞種對雞腸炎沙門氏菌和雞馬立克氏病感染率有較大差異。此次ALV流行病調查發(fā)現(xiàn)綠殼蛋雞和仙居雞等ALV有較高的陽性檢出率，白耳雞、瓢雞和固始雞等ALV陽性率較低，而白耳雞和瓢雞等F2代ALV陽性率仍處于較低水平。綜上所述，我國地方雞種對ALV等垂直傳播性疾病的感染差異可能與我國地方雞種遺傳抗性相關，有待進一步研究。

參考文獻

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