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      瘦素及瘦素受體在妊娠期尖銳濕疣組織中的表達(dá)及意義

      2016-10-27 06:05:41賈月琴石長(zhǎng)珠朱應(yīng)玉謝貞蘭
      關(guān)鍵詞:棘層基底層弱陽(yáng)性

      賈月琴,姜 新,石長(zhǎng)珠,朱應(yīng)玉,謝貞蘭,劉 瑩

      (銅陵市人民醫(yī)院 1.皮膚性病科;2.病理科,安徽 銅陵 244000)

      ?

      ·臨床醫(yī)學(xué)·

      瘦素及瘦素受體在妊娠期尖銳濕疣組織中的表達(dá)及意義

      賈月琴1,姜新1,石長(zhǎng)珠1,朱應(yīng)玉1,謝貞蘭2,劉瑩2

      (銅陵市人民醫(yī)院1.皮膚性病科;2.病理科,安徽銅陵244000)

      目的:探討瘦素(Ob)及瘦素受體(Ob-R)在妊娠期尖銳濕疣(CA)組織中的表達(dá)及意義。方法:采用免疫組化法分別檢測(cè)24例非妊娠期CA、16例妊娠期CA組織中Ob 及Ob-R表達(dá)。結(jié)果:Ob及Ob-R表達(dá)于角質(zhì)形成細(xì)胞胞質(zhì)。Ob 及Ob-R在非妊娠期CA組患者組織中呈弱陽(yáng)性、陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層;Ob 及Ob-R在妊娠期CA患者皮損組織中呈陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),主要表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層;妊娠期CA組織中Ob及Ob-R表達(dá)量高于非妊娠期CA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);妊娠期CA組皮損中Ob和Ob-R的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.714,P<0.01 )。結(jié)論:①非妊娠期CA與妊娠期CA組織的基底層、棘層和顆粒層均有不同程度的Ob及Ob-R表達(dá),可能與CA組織表皮細(xì)胞異常增殖過程有關(guān);② Ob及Ob-R在妊娠期CA組織中過度表達(dá),可能促進(jìn)了妊娠期CA組織表皮細(xì)胞的過度增殖。

      瘦素;瘦素受體,尖銳濕疣;妊娠

      尖銳濕疣(condyloma acuminatum,CA)是由人類乳頭瘤病毒(HPV)感染引起的一種良性增生性疾病,主要發(fā)生在肛周及外生殖器等皮膚與黏膜處,其組織病理學(xué)的主要特征為表皮角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖。臨床上,妊娠期CA與非妊娠期CA相比,疣體生長(zhǎng)迅速,多點(diǎn)并發(fā)、治療后極易復(fù)發(fā)。其發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明。有研究表明,Ob與其受體特異性結(jié)合,可以作為促有絲分裂劑及非特異性促腫瘤生長(zhǎng)因子,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖[1-3]。妊娠期CA雖屬于良性增生,但其皮損處表皮細(xì)胞過度、過快地增殖,具有與實(shí)體惡性腫瘤極其相似的生物學(xué)特征。研究證實(shí),妊娠期體內(nèi)多種生理、病理過程與孕婦體內(nèi)Ob水平升高有關(guān)[4-5]。筆者通過檢測(cè)、分析Ob和Ob-R在非妊娠期CA及妊娠期CA組織中的表達(dá),探討其在妊娠期CA組織發(fā)展過程中的可能作用。

      1 資料與方法

      1.1組織標(biāo)本收集我院皮膚性病科2015年1月~2016年1月女性CA患者外陰及肛周皮損組織,均經(jīng)組織病理學(xué)確診。其中,非妊娠期CA組24例(年齡18~42歲;病程2周~3月);妊娠期CA組16例(年齡21~36歲,病程2周~2月,孕8~20周)。所有患者就診前4周內(nèi)未接受過任何治療,入選患者均無肥胖癥、高血壓、糖尿病、乳腺癌等系統(tǒng)性疾病和腫瘤性疾病。每個(gè)標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定液固定后常規(guī)制成蠟塊,制成5 μm厚度4張,其中1張進(jìn)行常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)染色,2張行免疫組化染色檢測(cè)Ob和Ob-R表達(dá),1張PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。

      1.2主要試劑鼠抗人Ob單克隆抗體(sc-28344)、鼠抗人Ob-R單克隆抗體(sc-8391)購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz Biotechnology公司,PV-6000免疫組化檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

      1.3免疫組化二步法檢測(cè)各組組織中Ob和Ob-R表達(dá)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水化,3%H2O2去離子水室溫孵育5 min,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,PBS沖洗;滴加一抗4℃過夜,PBS洗滌2 min×3次;滴加酶標(biāo)記的二抗37℃孵育20 min,PBS洗滌2 min×3次;DAB溶液顯色,蒸餾水沖洗、復(fù)染、脫水、透明封片。用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照,用已知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照。

      1.4結(jié)果判定參照文獻(xiàn)[6]的方法,免疫組化染色以包膜或胞質(zhì)棕黃色著色為陽(yáng)性細(xì)胞,根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度和百分比確定Ob、Ob-R在各組組織中的半定量分級(jí):① 按細(xì)胞著色強(qiáng)度,無染色為0分(陰性),淺黃色為1分(弱陽(yáng)性),黃色為2分(陽(yáng)性),棕黃色為3分(強(qiáng)陽(yáng)性);②按陽(yáng)性細(xì)胞百分比,0分為無陽(yáng)性細(xì)胞,1分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%,2分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%~50%,3分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%~75%,4分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>75%。根據(jù)上述兩項(xiàng)分值的乘積判定結(jié)果,0分為陰性,1~4分為弱陽(yáng)性(+),6~8分為陽(yáng)性(),9~12分為強(qiáng)陽(yáng)性()。采用Image J圖像分析軟件,對(duì)染色陽(yáng)性的切片進(jìn)行半定量分析。在相同條件下對(duì)同一批染色切片進(jìn)行圖像采集,每張切片隨機(jī)取5個(gè)高倍(×400)鏡視野,測(cè)定每張圖像的平均光密度值(average optical density,AOD),以每張切片5個(gè)視野平均光密度值的平均值作為該張切片測(cè)量值。

      2 結(jié)果

      2.1一般臨床資料的可比性分析非妊娠期CA組與妊娠期CA組患者年齡、病程差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性(表1)。

      表1兩組間年齡、病程的比較

      組別例數(shù)年齡/歲病程/周非妊娠期CA組2428.58±5.8528.67±17.08妊娠期CA組1626.88±3.8827.50±12.48t值1.0250.234P值>0.05>0.05

      2.2Ob的表達(dá)Ob表達(dá)于角質(zhì)形成細(xì)胞的胞質(zhì),呈棕黃色顆粒。Ob在非妊娠期CA組織中呈弱陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層(圖1a)。在妊娠期CA組織中呈陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),主要表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層(圖1b)。圖像分析顯示AOD值在非妊娠期CA組、妊娠期CA組分別為0.211±0.019和0.272±0.014。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:非妊娠期CA組與妊娠期CA組患者Ob表達(dá)量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=<10.795,P<0.01)。

      a:Ob在非妊娠期CA組織中的弱陽(yáng)性表達(dá);b:Ob在妊娠期CA組織中的陽(yáng)性表達(dá)。

      圖1不同時(shí)期CA組織中Ob的表達(dá)(PV-6000×400)

      2.3Ob-R的表達(dá)Ob-R表達(dá)于角質(zhì)形成細(xì)胞的胞漿,呈棕黃色顆粒。Ob-R在非妊娠期CA組織中呈弱陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層(圖2a)。在妊娠期CA組織中呈陽(yáng)性表達(dá),主要表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層(圖2b)。圖像分析顯示AOD值在非妊娠期CA組、妊娠期CA組分別為0.220±0.018和0.301±0.021。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:非妊娠期CA組與妊娠期CA組之間Ob-R表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=<13.086,P<0.01)。

      2.4妊娠期CA組患者皮損中Ob和Ob-R表達(dá)的相關(guān)性分析直線相關(guān)分析顯示妊娠期CA組患者皮損中Ob和Ob-R的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.714,P<0.01)。

      a:Ob-R在非妊娠期CA組織中的弱陽(yáng)性表達(dá);b:Ob-R在妊娠期CA組織中的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。

      圖2不同時(shí)期CA組織中Ob-R的表達(dá)(PV-6000×400)

      3 討論

      妊娠并發(fā)CA是皮膚科醫(yī)生面臨的較為棘手的問題,疣體生長(zhǎng)迅速,采用冷凍、微波或二氧化碳激光等物理治療后,疣體極易復(fù)發(fā)。研究認(rèn)為可能與以下因素有關(guān):①妊娠期機(jī)體細(xì)胞免疫功能下調(diào),削弱了機(jī)體的抗病毒能力,可能促進(jìn)了HPV病毒的復(fù)制;②妊娠期體內(nèi)內(nèi)分泌狀態(tài)及激素水平的變化,可能是妊娠期CA組織過快增殖的重要原因之一。但其確切的機(jī)制尚未完全闡明。

      Ob是一種由肥胖基因編碼、由脂肪細(xì)胞分泌的多肽類激素,含167個(gè)氨基酸,通過與Ob-R特異性結(jié)合發(fā)揮多種生物學(xué)功能,如調(diào)節(jié)攝食、能量代謝,生長(zhǎng),促進(jìn)細(xì)胞增殖、血管生成,參與腫瘤形成等[7]。研究證實(shí),Ob及Ob-R參與了口腔鱗狀細(xì)胞癌、乳腺癌、食管癌、子宮內(nèi)膜癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[8-11]。

      本研究結(jié)果顯示,①Ob及Ob-R在非妊娠期CA組患者皮損組織中呈弱陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層;②Ob及Ob-R在妊娠期CA患者皮損組織中呈陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)于基底層、棘層和顆粒層;③兩組Ob及Ob-R表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(妊娠期CA組Ob及Ob-R表達(dá)量高于非妊娠期CA組);④Ob與Ob-R在兩組組織中的表達(dá)位置、表達(dá)量及表達(dá)趨勢(shì)相一致。據(jù)此,筆者推測(cè),①非妊娠期CA與妊娠期CA組織基底層、棘層和顆粒層內(nèi)存在的Ob及Ob-R,可能與CA組織表皮細(xì)胞異常增殖有關(guān);②Ob及Ob-R在妊娠期CA組織表皮細(xì)胞中過度表達(dá),可能促進(jìn)了妊娠期CA疣體處表皮細(xì)胞過快、過度增殖。究其原因,應(yīng)與孕婦增加的脂肪組織及胎盤的旁分泌或內(nèi)分泌產(chǎn)生大量Ob有關(guān)[4]。

      目前研究認(rèn)為,Ob與Ob-R特異性結(jié)合后主要通過Janus激酶/信號(hào)傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄活化子(janus kinase/signal transducers and activators of transcription,JAK/STAT)途徑發(fā)揮促細(xì)胞增殖作用[12]。Ob-R本身無酪氨酸激酶活性,當(dāng)Ob與其結(jié)合后,可活化JAK激酶,使受體胞內(nèi)域的酪氨酸殘基磷酸化,Ob-R與蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用后,使STAT分子的酪氨酸被磷酸化,磷酸化的STAT分子可形成同源或者異源二聚體,后者被易位釋放到細(xì)胞后,與相應(yīng)靶基因啟動(dòng)子結(jié)合而激活相應(yīng)基因轉(zhuǎn)綠與表達(dá),并最終啟動(dòng)細(xì)胞增殖過程[12]。

      綜上所述,筆者認(rèn)為妊娠期CA疣體的過快、過度增殖可能與Ob及Ob-R在表皮細(xì)胞內(nèi)的過度表達(dá)有關(guān),但其具體作用機(jī)制尚有待于進(jìn)一步研究。

      [1]HUSSAIN SR,NAQVI H,GUPTA S,etal.A study on oncogenic role of leptin and leptin receptor in oral squamous cell [J].Tumour Biol,2015,36(8):6515-6523.

      [2]GIORDANO C,CHEMI F,PANZA S,etal.Leptin as a mediator of tumor-stromalinteractions promotes breast cancer stem cell activity [J].Oncotarget,2015,7(2):1262-1275.

      [3]HABIB CN,AL-ABD AM,TOLBA MF,etal.Leptin influences estrogen metabolism and accelerates prostate cell proliferation[J].Life Sci,2015,121(1):10-15.

      [4]蔣榮珍,陳漢平.瘦素與妊娠的研究進(jìn)展[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2003,11(1):5-7.

      [5]ICIEK R,WENDER-OZEGOWSKA E,ZAWIEJSKA A,etal.Placental leptin and its receptor genes expression in pregnancies complicated by type 1 diabetes[J].J Physiol Pharmacol,2013,64(5):579- 585.

      [6]王建琴,莫友,吳偉棋,等.尖銳濕疣患者皮損Tool樣受體4、9和C型凝集素受體的表達(dá)[J].中華皮膚科雜志,2011,44(5):318 -321.

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      [8]RODRIGUES PR,MAIA LL,SANTOS M,etal.Leptin receptor expression and Gln223Arg polymorphism as prognostic markers in oral and oropharyngealcancer [J].Genet Mol Res,2015,14 (4):14979-14988.

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      [10] HOWARD JM,CATHCART MC,HEALY L,etal.Leptin and adiponectin receptor expression in oesophageal cancer[J].Br J Surg,2014,101(6):643-652.

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      Expression and implications of leptin and leptin receptor in the epidermis of pregnant women with condyloma acuminatum

      JIA Yueqin,JIANG Xin,SHI Changzhu,ZHU Yingyu,XIE Zhenlan,LIU Ying

      Department of Dermatology & STD,Tongling People′s Hospital,Tongling 244000,China

      Objective: To investigate the expression and implications of leptin (Ob) and leptin receptor (Ob-R) in the epidermis of pregnant women with condyloma acuminatum(CA).Methods:Immunohistochemical technique was used to detect the Ob and Ob-R in the genital condylomata in 24 non-pregnant women and 16 pregnant women,respectively.Results:Ob and Ob-R were primarily expressed in the cytoplasm of keratinocytes,and present in positive expression or weak expression in the basal cell layer,prickle cell layer and stratum granulosum of warts in the non-pregnant women,whereas positive or strong expression in the epidermic warts in pregnant women.Pregnant women had higher expression of Ob and Ob-R than their counterparts(P<0.01),and Ob expression was positively correlated with that of Ob-R in CA tissues in pregnant women(r=0.714,P< 0.01).Conclusion:Ob and Ob-R expressed to a certain extent in basal cell layer,prickle cell layer and stratum granulosum of warts in both pregnant and non-pregnant women suggests that the two proteins are associated with the abnormal proliferation in the epidermic cells of CA,and over-expression of Ob and Ob-R in pregnant women may be attributable to the excessive proliferation of the epidermic cells in CA during pregnancy.

      leptin;leptin receptor;condyloma Acuminatum;pregnancy

      1002-0217(2016)05-0470-03

      銅陵市臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(銅科[2015]40號(hào));銅陵市衛(wèi)計(jì)委科研立項(xiàng)項(xiàng)目(銅衛(wèi)科[2015]2號(hào))

      2016-03-01

      賈月琴(1975-),女,副主任醫(yī)師,(電話)13655623108,(電子信箱)jyq1976@163.com.

      .25;R 752.53

      A

      10.3969/j.issn.1002-0217.2016.05.019

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