杜海燕，陳光麗，荊汝頂，秦保亮，韓俊偉

（1.新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

一例豬圓環(huán)病毒病2型和大腸桿菌病混合感染的診斷

杜海燕1，陳光麗1，荊汝頂1，秦保亮1，韓俊偉2

（1.新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 新鄉(xiāng) 453000）

豬圓環(huán)病毒病是指以圓環(huán)病毒-2型（PCV2）為主要病原，單獨(dú)或混合感染。它是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征的主要病原，一般于斷奶后2-3天或1周發(fā)病，急性發(fā)病豬群中，病死率可達(dá)10%。大腸桿菌主要是一種條件性致病菌，其中以仔豬黃白痢最為常見(jiàn)。2016年3月份，某豬場(chǎng)1月齡仔豬突然發(fā)病，病死率較高，送檢病豬3頭進(jìn)行病因診斷。為了解該規(guī)?；i場(chǎng)疫病的感染狀況，通過(guò)該豬場(chǎng)豬群發(fā)病情況及剖檢病理觀察，初步判斷該豬場(chǎng)發(fā)病豬疑似為豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2型或細(xì)菌感染，通過(guò)進(jìn)一步分子生物學(xué)檢測(cè)及細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定，確診該豬場(chǎng)發(fā)病豬為豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌混合感染。

豬圓環(huán)病毒2型；大腸桿菌；診斷

1　發(fā)病情況

該豬場(chǎng)采取自繁自養(yǎng)方式，共存欄生豬230頭，其中保育豬65頭，病死率達(dá)20%左右。主要表現(xiàn)為精神沉郁，體溫升高，被毛蓬亂，呼吸急促，腹瀉，消瘦，體表淋巴結(jié)腫大，病死豬明顯消瘦，貧血、可視粘膜黃疸。

2　剖檢病理變化

對(duì)送檢3頭1月齡病死豬進(jìn)行剖檢，結(jié)果均可見(jiàn)胃腸脹氣，肝臟黃染，且肝臟有明顯壞死灶；脾臟腫大，邊緣有丘狀突起，并有黑色梗死；肺堅(jiān)硬出現(xiàn)實(shí)質(zhì)性病變；腎臟針尖狀出血點(diǎn)；心包心耳出血；腸及腸系膜出血，腸系膜淋巴結(jié)腫大。部分剖檢病理變化見(jiàn)下圖：

3　豬圓環(huán)病毒-2型病毒核酸檢測(cè)

3.1DNA提取

分別取病豬病理變化明顯的淋巴結(jié)、脾臟和肺臟組織研磨，反復(fù)凍融3次，8 000 rpm離心10 min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.2豬圓環(huán)病毒熒光PCR擴(kuò)增

利用豬圓環(huán)病毒-2型病原核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?duì)待檢病料進(jìn)行檢測(cè)。擴(kuò)增體系根據(jù)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。標(biāo)記熒光基團(tuán)種類報(bào)告基團(tuán)FAM，淬滅基團(tuán)TAMRA。擴(kuò)增反應(yīng)條件：94 ℃：2 min，后94 ℃30 s～55 ℃ 45 s（采集熒光），40個(gè)循環(huán)。

3.3結(jié)果分析判定

反應(yīng)結(jié)束后，Ct值在40以上的為陰性，Ct值小于35的為陽(yáng)性，Ct值在35～40之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。重復(fù)試驗(yàn)后，Ct值仍在35～40之間，判斷為陽(yáng)性，沒(méi)有熒光值增長(zhǎng)為陰性。結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1　圓環(huán)病毒-2型病原核酸檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)熒光PCR擴(kuò)增結(jié)果可知，陽(yáng)性對(duì)照Ct值18.22，待檢樣品Ct值是26.57，出現(xiàn)特異性熒光曲線，陰性對(duì)照未出現(xiàn)特異性熒光曲線。結(jié)果顯示送檢病料檢測(cè)到豬圓環(huán)病毒-2型病原核酸，表明病死豬感染豬圓環(huán)病毒-2型。

4　討論

豬圓環(huán)病毒-2型在我國(guó)健康豬群中已普遍發(fā)生，表現(xiàn)為流行范圍廣、混合感染嚴(yán)重、血清陽(yáng)性率高、尤其種豬抗體陽(yáng)性感染率最高，PCV-2的感染會(huì)造成動(dòng)物免疫抑制，再感染其他病原機(jī)會(huì)增大，豬群易受到豬瘟、偽狂犬病、大腸桿菌病等的侵襲。豬圓環(huán)病毒-2型導(dǎo)致的仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的源頭在種豬上，而發(fā)病的一般是仔豬，母豬通過(guò)多種途徑排毒傳染哺乳仔豬，造成仔豬的早期感染。由此表明該豬場(chǎng)可能存在豬圓環(huán)病毒的隱形感染，通過(guò)采取綜合性防治措施來(lái)預(yù)防本病。

目前疫苗免疫主要依靠進(jìn)口苗，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高。因此主要靠加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激，控制繼發(fā)感染以降低損失。嚴(yán)格采取“全進(jìn)全出”方式，清除帶毒種豬并凈化，加強(qiáng)引種檢疫，嚴(yán)防該病進(jìn)場(chǎng)，做好消毒措施，尤其保育豬圈清空后，消毒晾曬一周后再引入豬群。一旦發(fā)生豬圓環(huán)病毒感染，易并發(fā)細(xì)菌性感染，治療時(shí)可配合廣譜抗菌藥物或進(jìn)行藥敏試驗(yàn)選擇敏感性抗菌藥物，減少并發(fā)感染。

（編輯：晏兵兵）

S858.28

A

1006-799X（2016）16-0035-01

杜海燕（1983-），女，河南新鄉(xiāng)人，助理獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病診斷與防治工作。