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IgG、IgM抗體在自身免疫性肝病的表達研究

方靜怡朱正鵬李凱羅錦馬建波張睿申麗娟

目的研究原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)及自身免疫性肝炎(AIH)的病理特點，尋找有效的病理診斷指標(biāo)。方法選擇2006年-2012年昆明醫(yī)科大學(xué)病理教研室肝穿刺活檢病例，從中篩選病理診斷為原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)血清檢測AMA-M2陽性病例30例、AMA-M2陰性病例17例和自身免疫性肝炎病例20例。采用免疫組化方法檢測肝組織內(nèi)IgG、IgM的表達情況。結(jié)果免疫組化檢測顯示IgM、IgG陽性顆粒主要分布于肝臟門管區(qū)漿細胞胞漿內(nèi)，PBC AMA-M2陽性組、PBC AMA-M2陰性組、AIH組3組內(nèi)IgM、IgG陽性細胞數(shù)相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。PBC患者肝臟門管區(qū)漿細胞內(nèi)主要表達IgM，AIH患者肝臟門管區(qū)漿細胞內(nèi)主要表達IgG；PBC AMA-M2陽性組與AMA-M2陰性組相比，AMA-M2陽性的PBC患者肝臟門管區(qū)IgM、IgG表達陽性細胞數(shù)比AMA-M2陰性的PBC患者高，IgM、IgG陽性細胞數(shù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論PBC患者肝臟門管區(qū)漿細胞內(nèi)主要表達IgM，AIH患者肝臟門管區(qū)漿細胞內(nèi)主要表達IgG，肝組織中IgM和IgG的檢測及分析有助于PBC和AIH的診斷，且AMA-M2陽性的PBC患者肝臟門管區(qū)IgM、IgG陽性表達比AMA-M2陰性的PBC患者高。

PBC；AIH；IgG；IgM；病理

自身免疫性肝病(AILD)是一類以肝功能異常和肝臟病理損害為主要表現(xiàn)的非傳染性肝病，包括AIH、PBC和原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)。隨著醫(yī)學(xué)科技的進步，診斷自身免疫性肝病的血清學(xué)、免疫學(xué)和影像學(xué)技術(shù)取得了顯著進展，但大量實踐證明，這些技術(shù)尚不能完全取代肝活體組織病理學(xué)技術(shù)，肝活體組織病理檢查仍是診斷各種慢性肝損傷的重要依據(jù)。

資料和方法

一、病例資料

篩選2006年-2012年云南省昆明醫(yī)科大學(xué)病理教研室肝穿刺活檢病例，經(jīng)昆明醫(yī)科大學(xué)病理教研室2位教授統(tǒng)一閱片，病理確診為PBC且血清檢測AMA-M2陽性病例30例、AMA-M2陰性病例17例及AIH病例20例。

二、方法

免疫組化染色采用福州邁新公司MaxVisionTM法。具體參照說明書，石蠟切片脫蠟和水化后，PBS沖洗，抗原修復(fù)，孵育，DAB顯色，中性樹膠封固。鼠抗人IgG單克隆抗體、羊抗人IgM單克隆抗體購自北京中杉金橋生物制劑公司，其他免疫組化試劑均購自福州邁新公司。

計數(shù)肝組織門管區(qū)IgG、IgM陽性細胞數(shù)。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié)　　果

一、IgG、IgM免疫組化表達結(jié)果

免疫組化檢測顯示IgG和IgM 陽性均表達于漿細胞胞漿內(nèi)，呈棕黃色。陽性表達細胞評估標(biāo)準：肝組織中IgM、IgG的免疫組化檢測結(jié)果按Daniels 等的計數(shù)法; 采用兩臺顯微鏡，分別對兩組免疫組化顯色的盲編切片同一區(qū)域選定的4 個完整門管區(qū)，高倍鏡 (×400 )下對所有門管區(qū)內(nèi)陽性表達漿細胞計數(shù)。PBC組門管區(qū)IgM陽性細胞數(shù)較多，AIH組門管區(qū)IgG陽性細胞數(shù)較多，3組內(nèi)IgM、IgG的陽性細胞數(shù)詳見表1。

圖2　PBC AMA- M2陽性組 門管區(qū)漿細胞胞漿內(nèi)IgM表達，呈棕褐色顆?！axVisionTM法×400

圖3　PBC AMA- M2陰性組 門管區(qū)漿細胞胞漿內(nèi)IgG表達，呈棕褐色顆?！axVisionTM法×400

圖4　PBC AMA- M2陰性組 門管區(qū)漿細胞胞漿內(nèi)IgM表達，呈棕褐色顆?！axVisionTM法×400

圖5　AIH組 門管區(qū)漿細胞胞漿內(nèi)IgG表達，呈棕褐色顆粒MaxVisionTM法×400

圖6　AIH組 門管區(qū)漿細胞胞漿內(nèi)IgM表達，呈棕褐色顆粒MaxVisionTM法×400

指標(biāo)PBC(AMA?M2+)組PBC(AMA?M2?)組AIH組IgM6．52±2．355．23±1．583．37±1．47IgG4．31±1．183．38±0．965．76±1．95

注：PBC AMA- M2陽性組、AMA- M2陰性組及AIH組肝臟門管區(qū)IgG、IgM陽性細胞數(shù)兩兩比較，檢驗水準α=0.05，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

討　　論

PBC與AIH同屬自身免疫性肝病(AILD)，AILD診斷通常需排除其他病毒感染，藥物、酒精性肝病，非酒精性脂肪性肝病，遺傳代謝障礙性疾病導(dǎo)致的肝臟損害，并結(jié)合臨床表現(xiàn)及實驗室檢查進行綜合判斷。PBC是一種免疫介導(dǎo)，進展緩慢的膽汁淤積性肝病，常起病隱匿，晚期出現(xiàn)肝硬化癥狀后才能被識別，從而錯過了最佳診斷及治療時機[1-2]。PBC患者的血清生化學(xué)指標(biāo)是以堿性磷酸酶(ALP)及谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)升高為主的肝功能異常。PBC患者的血清免疫球蛋白中IgG和IgM升高，尤其IgM顯著升高，提示有體液免疫參與。PBC病理改變主要以肝內(nèi)細小膽管的慢性非化膿性破壞、門管區(qū)炎癥、慢性膽汁淤積、肝纖維化為特征，最終發(fā)展為肝硬化和肝衰竭，甚至死亡[3]。臨床及病理工作中，上述PBC的臨床表現(xiàn)、實驗室指標(biāo)及病理特點并不總是顯而易見，常常需要與其他因素所引起的肝病相鑒別，其中最重要的就是AIH。AIH是遺傳易感性、機體自身免疫紊亂和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[4]，起病方式呈多樣性，多數(shù)隱匿起病，病程進展緩慢，若得不到及時有效的治療，多數(shù)發(fā)展為肝硬化[5]。免疫學(xué)指標(biāo)中以IgG及γ-球蛋白升高最常見，兩者可作為診斷AIH的重要參考依據(jù)。AIH特征性的組織學(xué)改變是肝臟小葉界面炎癥，匯管區(qū)有較明顯的淋巴細胞及漿細胞浸潤，損害一般不累及膽管系統(tǒng)[6]。PBC和AIH往往起病隱匿，臨床表現(xiàn)不明顯，病理特點不典型，比如PBC門管區(qū)的上皮性肉芽腫不是總能看到，而AIH的淋巴細胞性界面炎也是較晚期才能見到，因此容易延誤最佳治療時機，導(dǎo)致患者不可逆轉(zhuǎn)的肝臟組織學(xué)損害。面臨這兩種疾病診斷和鑒別診斷所遇到的困難，促使一些學(xué)者對其他新檢測技術(shù)進行了探討。Moreira等[7]采用免疫組化方法對20例AIH病例肝組織中漿細胞內(nèi)IgG及IgM的表達狀況進行了研究，并與13例PBC的檢測結(jié)果比較，通過對每例活檢標(biāo)本中IgG和IgM陽性漿細胞分別計數(shù)(個/mm2)，發(fā)現(xiàn)92.3%的PBC主要為IgM，而90%的AIH患者肝組織門管區(qū)內(nèi)漿細胞主要表達IgG。根據(jù)陽性表達細胞的計數(shù)比值(IgM/IgG<1或≥1)，可以準確鑒別PBC和AIH，敏感性達到92.3%，特異性為90%，認為肝組織中IgM和IgG的檢測及分析有助于PBC的診斷。本試驗結(jié)果與Moreira等的試驗結(jié)果較一致。無論是AMA-M2陽性的PBC患者還是AMA-M2陰性的PBC患者，肝臟門管區(qū)表達IgM的陽性細胞數(shù)較多，而AIH患者肝臟門管區(qū)表達IgG的陽性細胞數(shù)較多。因此可應(yīng)用免疫組化法檢測肝組織中IgM和IgG的陽性細胞數(shù)，對病理特點不典型或早期PBC和AIH加以鑒別，從而更早的選擇正確的治療方法，防止延誤最佳治療時機。

[1]Medina J，Jones EA, Garcia Monzon C, et al. Immunopathogenesis of cholestatic autoimmune liver diseases. Eur J Clin Invest, 2001, 31: 64-71.

[2]Heathcote EJ. Evidence-based therapy of primary biliary cirrhosis. Eur J Gastroenterol Hepatol, 1999, 11: 607-615.

[3]Kim KA， Jeong SH． The diagnosis and treatment of primary biliary cirrhosis. Korean J Hepatol，2011，17: 173-179.

[4]Muratori P, Muratori L, Gershw in ME, et al.True antimitochondrial antibody- negative primary biliary cirrhosis, low sensitivity of the routine assays, or both. Clin Exp Immunol, 2004, 135: 154-158.

[5]Nishio A, Van de Water J, Leung PS, et al. Comparative studies of antimitochondrial autoantibodies in sera and bile in primary biliary cirrhosis. Hepatology, 1997, 25: 1085 - 1089.

[6]潘敏鴻, 周曉軍. 自身免疫性肝病的病理診斷.中華病理學(xué)雜志, 2007, 36: 772.

[7]Moreira RK，Revetta F，Koehler E，et al．Diagnostic utility of IgG and IgM immunohisto-chemistry in autoimmune liver disease ．World J Gastroenterol，2010，16:453-457.

(本文編輯：易玲)

云南省科技廳—昆明醫(yī)學(xué)院聯(lián)合專項(2011FB242)

442008十堰湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院病理科(方靜怡，朱正鵬，李凱，羅錦，馬建波，張睿)；昆明醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)與病理生理學(xué)教研室(申麗娟)

申麗娟，Email：shenljkm@163.com

2015-12-23)