王小芳，曾 潔，田崇奇，王小龍，楊雨鑫，陳玉林,張恩平

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌 712100)

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日糧能量和蛋白水平對(duì)灘羊脂肪組織PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)的影響

王小芳，曾 潔，田崇奇，王小龍，楊雨鑫，陳玉林,張恩平*

(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，楊凌 712100)

旨在研究日糧能量和蛋白水平對(duì)灘羊脂肪組織中PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)的影響。選擇健康、體重相近的灘羊112只，公母各半，隨機(jī)分4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)7只羊。參考肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)NY/T(816-2004)，根據(jù)生長(zhǎng)階段(22～28、29～35、36～40 kg)以目標(biāo)增重設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)日糧，每階段設(shè)置0.84×標(biāo)準(zhǔn)(I組)、0.96×標(biāo)準(zhǔn)(II組)、1.08×標(biāo)準(zhǔn)(III組)和1.20×標(biāo)準(zhǔn)(IV組)4個(gè)營(yíng)養(yǎng)水平日糧，分別飼喂4組試驗(yàn)灘羊。于每階段末每個(gè)重復(fù)屠宰1只試驗(yàn)羊，取尾部脂肪、腎周脂肪和皮下脂肪組織，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)水平。結(jié)果表明，尾部脂肪組織，在22～28和36～40 kg階段末，II組PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)；在29～35 kg階段末，II組FABP4 mRNA表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)，且IV組mRNA表達(dá)量顯著低于其他組(P<0.05)。腎周脂肪組織，在3個(gè)不同階段末， II組PPARγmRNA表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)，且IV組mRNA表達(dá)量顯著低于III組(P<0.05)。在22～28 kg 階段末，II組和III組FABP4 mRNA表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)；在29～35 kg階段末，II組FABP4 mRNA表達(dá)量顯著高于IV組(P<0.05)；在36～40 kg階段，I組和II組FABP4 mRNA表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)。皮下脂肪組織，在3個(gè)階段末，各組PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。結(jié)果表明，日糧能量和蛋白水平對(duì)灘羊深層脂肪組織(腎周脂肪)中PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)的影響大于淺層脂肪組織(皮下脂肪)，對(duì)尾部脂肪組織中PPARγ和FABP4 mRNA的表達(dá)有影響。

灘羊；能量和蛋白水平；脂肪組織；PPARγ；FABP4

灘羊是寧夏的優(yōu)良綿羊品種，系蒙古羊的一個(gè)亞型，過去尤以生產(chǎn)二毛裘皮著稱，近年來，由于其肉質(zhì)細(xì)嫩可口、不膻不膩又極具地方特色而深受消費(fèi)者青睞。灘羊?qū)僦残途d羊，其尾部沉積脂肪的功能非常強(qiáng)大，這在一定程度上會(huì)減少其他部位的脂肪沉積(如肌內(nèi)脂肪)，而肌內(nèi)脂肪含量的多少會(huì)影響羊肉的品質(zhì)，且尾部脂肪的過多沉積會(huì)造成飼糧的浪費(fèi)，增加飼養(yǎng)成本，并且與生產(chǎn)瘦肉相比，脂肪在綿羊體內(nèi)的沉積需要更多的能量飼料。過氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome proliferator-activated receptor,PPARγ)和脂肪酸結(jié)合蛋白4(Fatty acid binding protein 4,FABP4)在脂肪沉積過程中發(fā)揮重要作用[1]。PPARγ屬于II型核激素受體超家族PPARs的一種亞型，是脂肪細(xì)胞分化的重要調(diào)節(jié)因子，參與脂質(zhì)代謝和糖代謝。FABP4，是脂肪酸結(jié)合蛋白家族成員，通過可逆性結(jié)合長(zhǎng)鏈脂肪酸促進(jìn)脂肪酸的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)，是PPARγ的一個(gè)重要靶基因。在畜禽中，脂肪沉積因動(dòng)物品種、年齡、營(yíng)養(yǎng)及環(huán)境條件不同而存在差異[2-3]。

本試驗(yàn)研究了營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)階段對(duì)灘羊PPARγ和FABP4基因mRNA表達(dá)的影響，旨在為探討其脂肪代謝與調(diào)控提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選取日齡、體重相近的4月齡左右健康灘羊112只，公母各半。

1.2 試驗(yàn)日糧

參考肉羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T816-2004)，根據(jù)灘羊增重目標(biāo)分為22～28，29～35，36～40 kg 3個(gè)生長(zhǎng)階段，按日增重200 g設(shè)計(jì)各生長(zhǎng)階段標(biāo)準(zhǔn)日糧，每階段設(shè)置4種日糧，能量和蛋白質(zhì)水平分別為0.84×標(biāo)準(zhǔn)、0.96×標(biāo)準(zhǔn)、1.08×標(biāo)準(zhǔn)和1.20×標(biāo)準(zhǔn)，其他營(yíng)養(yǎng)水平基本一致。日糧制成顆粒飼料飼喂。各階段日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

將112只試驗(yàn)灘羊隨機(jī)分為4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)7只羊。采用單因素隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，按生長(zhǎng)階段，I～I(xiàn)V組分別飼喂能量和蛋白質(zhì)水平為0.84×標(biāo)準(zhǔn)、0.96×標(biāo)準(zhǔn)、1.08×標(biāo)準(zhǔn)和1.20×標(biāo)準(zhǔn)4種日糧。自由采食、飲水，每天飼喂3次。在每階段末每個(gè)重復(fù)選取1只最接近平均體重的試驗(yàn)羊屠宰，采集尾部脂肪、腎周脂肪和皮下脂肪組織，用DEPC水沖洗干凈，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 總RNA的提取和cDNA的合成

采用康為世紀(jì)超純RNA提取試劑盒(Ultrapure RNA Kit)提取樣品的總RNA，核酸蛋白儀檢測(cè)RNA濃度及純度，OD260 nm/OD280 nm=1.8～2.0，1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA質(zhì)量。按照TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTMRT Master Mix)操作說明合成cDNA，于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 引物設(shè)計(jì)

參照GenBank公布的綿羊PPARγ和FABP4基因的mRNA序列，用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，交由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，以綿羊β-actin為內(nèi)參基因。引物序列見表2。

表1 不同生長(zhǎng)階段日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

Table 1 Composition and nutritional levels at different stages(DM basis) %

項(xiàng)目Item22～28kg29～35kg36～40kgIIIIIIIVIIIIIIIVIIIIIIIV原料Ingredient玉米Corngrain23.4126.2434.5334.9723.2124.8532.632.1818.4122.9727.2435.89豆油Soybeanoil0.000.000.503.000.000.000.003.000.000.000.000.50豆粕Soybeanmeal0.008.976.9013.860.002.897.406.450.000.0312.764.84葵花餅Sunflowercake21.599.793.080.0016.8612.260.000.0016.6217.000.000.00谷草Milletstraw17.5750.000.000.000.0055.0025.680.006.0043.7349.000.00稻草Ricestraw32.430.000.000.0054.930.000.000.0053.9711.276.000.00苜蓿Alfalfa0.000.0050.0043.170.000.0029.3253.360.000.000.0053.77預(yù)混料Premix5.005.005.005.005.005.005.005.005.005.005.005.00合計(jì)Total100100100100100100100100100100100100營(yíng)養(yǎng)水平NutrientlevelDM88.9689.4288.2888.5788.889.5288.8288.6289.0589.3889.4988.26DE/(MJ·kg-1)7.929.0510.1911.327.458.529.5810.657.088.099.1010.11CP9.9011.3212.7314.158.289.4610.6511.838.049.1910.3411.49EE2.232.002.554.982.261.971.974.862.132.041.912.52CF18.3219.1823.1919.9717.0520.9821.9723.9618.6520.8118.5224.11Ash6.775.474.854.637.875.615.244.918.176.095.924.89Ca0.930.911.511.440.930.891.241.540.930.900.901.54P0.420.360.510.500.390.340.400.490.370.370.310.49

預(yù)混料為每千克飼糧提供：VA 7 500 IU, VD 1 050 IU, VE 10 IU, Fe 5 500 mg, Cu 500 mg, Mn 5 000 mg, Zn 4 000 mg, Se 32.5 mg, I 100 mg, Co 32.5 mg。營(yíng)養(yǎng)水平中DM、DE和CP含量為分析值，EE、CF、Ash、Ca和P含量是根據(jù)原料組成計(jì)算所得(干物質(zhì)基礎(chǔ))

The premix provides the following per kg diet: VA 7 500 IU, VD 1 050 IU, VE 10 IU, Fe 5 500 mg, Cu 500 mg, Mn 5 000 mg, Zn 4 000 mg, Se 32.5 mg, I 100 mg, Co 32.5 mg. The nutrient levels in DM, DE and CP content are analyzed values, EE, CF, Ash, Ca and P content are calculated values based on the obtained raw material composition(dry matter basis)

表2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

Table 2 Primer sequences for Real-time quantitative PCR

基因基因登錄號(hào)引物序列(5'-3')產(chǎn)物長(zhǎng)度/bpGeneGenBankIDPrimersequenceProductlengthβ-actinNM_001009784S:TCTGGCACCACACCTTCTACA:TCTTCTCACGGTTGGCCTTG102PPARγNM_001100921S:CCGCTGACCAAAGCAAAGA:GGAGCGAAACTGACACCC189FABP4EU301804S:AAGAAGTGGGTGTGGGCTTTA:ATGTTGACCACATCCCCATT91

S. 上游引物；A. 下游引物

S. Sense primer；A. Antisense primer

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

采用熒光染料SYBR?Premix Ex TaqTMII進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。反應(yīng)體系為20 μL：2×SYBR?Premix Ex TaqII 10 μL，上下游引物各0.8 μL，RNase-Free ddH2O 6.4 μL，cDNA模板2 μL。采用三步法進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性1 min;95 ℃變性15 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s(45個(gè)循環(huán))。反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行熔解曲線分析：設(shè)置熔解曲線溫度為55～95 ℃。每個(gè)樣品3個(gè)平行，計(jì)算平均Ct值，以β-actin為參照基因，用2-△△Ct法計(jì)算各基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.7 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因子方差分析(one-way ANOVA)，并進(jìn)行多重比較(Duncan)，數(shù)據(jù)表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(Mean±SE)”，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊尾脂PPARγ mRNA表達(dá)的影響

由圖1可知，在22～28 kg階段末，II組的尾脂PPARγmRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組，且I組的表達(dá)量顯著高于IV組(P<0.05)。在36～40 kg階段末，II組的PPARγmRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組，且I組的表達(dá)量顯著高于III、IV組(P<0.05)。在29～35 kg階段末，PPARγmRNA在各組的表達(dá)量無顯著性差異(P>0.05)。

同一階段，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，下同The different small letter means significant difference at the same stage(P<0.05), the same as below圖1 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊尾脂PPARγ mRNA的影響Fig.1 The effect of different nutritional levels on PPARγ mRNA in tail fat of Tan sheep

2.2 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊腎周脂肪PPARγ mRNA表達(dá)的影響

由圖2可知，在22～28和36～40 kg階段末，II組的腎周脂肪PPARγmRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組，且III組的表達(dá)量顯著高于IV組(P<0.05)。在29～35 kg階段末，II組的腎周脂肪PPARγmRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組，且I、III組的表達(dá)量顯著高于IV組(P<0.05)。

2.3 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊皮下脂肪PPARγ mRNA表達(dá)的影響

由圖3可知，在3個(gè)不同的生長(zhǎng)階段，各組灘羊皮下脂肪中PPARγmRNA的相對(duì)表達(dá)量均無顯著性差異(P>0.05)。

2.4 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊尾脂F(xiàn)ABP4 mRNA表達(dá)的影響

由圖4可知，在22～28 kg階段末，II組的尾脂F(xiàn)ABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組(P<0.05)。在29～35 kg階段末，II組FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組，且I、III組的表達(dá)量顯著高于IV組(P<0.05)。在36～40 kg階段末，II組FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于其他組，且III組的表達(dá)量顯著高于I、IV組(P<0.05)。

2.5 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊腎周脂肪FABP4 mRNA表達(dá)的影響

由圖5可知，在22～28 kg階段末，II、III組的腎周脂肪FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于I、IV組(P<0.05)。在29～35 kg階段末，II組FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于IV組(P<0.05)。在36～40 kg階段末，I、II組FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著高于III、IV組(P<0.05)。

2.6 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊皮下脂肪FABP4 mRNA表達(dá)的影響

由圖6可知，在3個(gè)不同的生長(zhǎng)階段，灘羊皮下脂肪中FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量在各組間均無顯著性差異(P>0.05)。

圖2 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊腎周脂肪PPARγ mRNA的影響Fig.2 The effect of different nutritional levels on PPARγ mRNA in perirenal fat of Tan sheep

圖3 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊皮下脂肪PPARγ mRNA的影響Fig.3 The effect of different nutritional levels on PPARγ mRNA in subcutaneous fat of Tan sheep

圖4 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊尾脂F(xiàn)ABP4 mRNA的影響Fig.4 The effect of different nutritional levels on FABP4 mRNA in tail fat of Tan sheep

圖5 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊腎周脂肪FABP4 mRNA的影響Fig.5 The effect of different nutritional levels on FABP4 mRNA in perirenal fat of Tan sheep

圖6 不同營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊皮下脂肪FABP4 mRNA的影響Fig.6 The effect of different nutritional levels on FABP4 mRNA in subcutaneous fat of Tan sheep

3 討 論

脂肪沉積參與動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝過程的穩(wěn)態(tài)平衡調(diào)控，緩解營(yíng)養(yǎng)攝入過度造成身體器官的超負(fù)荷，必要時(shí)脂肪的分解可作為能量供應(yīng)的主要來源。脂肪組織的生長(zhǎng)分為脂肪細(xì)胞的增殖(體積的增大)和分化(數(shù)量的增加)兩方面，其形成是由多種基因參與調(diào)控的復(fù)雜過程，其中PPARγ和FABP4基因起著不可替代的作用[4-6]。脂尾型綿羊從出生開始就在尾部?jī)?chǔ)存大量脂肪，尾部脂肪占全身脂肪的很大部分。近年來，人們對(duì)羊肉的消費(fèi)觀念發(fā)生了改變，大脂尾羊的優(yōu)勢(shì)在減小，生產(chǎn)者越來越傾向于通過增加整體經(jīng)濟(jì)效益來降低成本，而體脂和尾脂的過度沉積會(huì)影響羊只出售，因此尾脂尺寸的減小對(duì)生產(chǎn)者和消費(fèi)者來說都是非?？扇〉腫7]。

許多研究表明，日糧能量和蛋白水平影響動(dòng)物的脂肪沉積。A.Y.Abdullah等[8]研究發(fā)現(xiàn)，隨著能量水平的增加，黑山羊公羔的機(jī)體總脂肪含量和肌內(nèi)脂肪含量均顯著增加。R.M.Lewis等[9]在180只150日齡的綿羊中選擇90只作為瘦肉系，未選擇的作為對(duì)照組，分別飼喂高、中、低 3種蛋白水平日糧，結(jié)果顯示，隨著日糧蛋白質(zhì)濃度的降低，胴體脂肪含量增加，瘦肉含量下降；且在高蛋白濃度水平，瘦肉系綿羊胴體脂肪含量增加了1.17倍，是對(duì)照組的1.10倍。M.Tahmoorespur等[10]研究表明，32日齡肉雞腹脂率隨蛋白水平降低而升高，42和56日齡肉雞在相同蛋白水平下，腹脂率隨能量水平升高而升高。Q.H.Peng等[11]對(duì)西門塔爾雜交牛(西門塔爾牛×本地黃牛)研究發(fā)現(xiàn)，隨著日糧能量濃度的增加，相比于低能組，中能組和高能組肌內(nèi)脂肪含量分別增加了47.5%(P<0.05)和100%(P<0.01)。H.B.Zhang等[12]對(duì)黃牛和西門塔爾牛的雜交品種研究發(fā)現(xiàn)，高能組和中能組的平均背膘厚和皮下脂肪百分比顯著高于低能組。綜上所述，動(dòng)物的脂肪沉積隨能量水平的升高而升高，隨蛋白水平的升高而降低。

研究表明，PPARγ參與多條信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，在脂肪細(xì)胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中居于重要位置[7]，PPARγ基因敲除小鼠較對(duì)照組的機(jī)體脂肪含量顯著降低[5]，且PPARγ基因在灘羊脂肪組織尤其是尾脂中高表達(dá)[3,13]。目前關(guān)于營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)畜禽PPARγmRNA的表達(dá)調(diào)控多集中在能量水平，H.B.Zhang等[12]認(rèn)為，高能量水平能促進(jìn)脂肪組織中PPARγmRNA的表達(dá)，關(guān)于蛋白質(zhì)的影響報(bào)道較少，但高蛋白會(huì)提高動(dòng)物機(jī)體的熱增耗，導(dǎo)致能量的利用率下降，因此蛋白水平可能通過能量途徑抑制PPARγmRNA的表達(dá)。Q.H.Peng等[11]研究發(fā)現(xiàn)，日糧能量濃度可顯著上調(diào)西門塔爾雜交牛(西門塔爾?！帘镜攸S牛)脂肪組織中PPARγmRNA表達(dá)。S.Zhao等[14]研究發(fā)現(xiàn)，高蛋白日糧可顯著降低100 kg烏金豬脂肪組織中PPARγmRNA表達(dá)水平，促進(jìn)60 kg烏金豬脂肪組織中PPARγmRNA表達(dá)，這可能與烏金豬生長(zhǎng)階段的不同有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，隨著能量和蛋白水平的升高，PPARγmRNA在灘羊尾脂和腎周脂肪中表達(dá)趨勢(shì)一致，均呈先升高后降低的趨勢(shì)，這是能量和蛋白共同作用的結(jié)果。當(dāng)?shù)鞍滋幱谳^低水平時(shí)，能量水平的升高可提高PPARγmRNA的相對(duì)表達(dá)量；但當(dāng)?shù)鞍滋幱谳^高水平時(shí)，會(huì)提高動(dòng)物機(jī)體的熱增耗，使得機(jī)體對(duì)能量的相對(duì)利用率降低，即使提高能量水平也不能提高PPARγmRNA的相對(duì)表達(dá)量，反而降低PPARγmRNA表達(dá)。FABP4基因敲除小鼠能有效降低血漿甘油三酯和膽固醇水平，從而改善脂質(zhì)代謝[5]。FABP4基因在阿勒泰羊尾脂中高豐度表達(dá)[15]。研究表明，F(xiàn)ABP4基因啟動(dòng)子上有PPARγ的反應(yīng)元件PPRE，PPARγ對(duì)于哺乳動(dòng)物FABP4在脂肪形成中的調(diào)節(jié)和脂肪組織特異性表達(dá)可能有很大作用。本研究中，F(xiàn)ABP4 mRNA的表達(dá)趨勢(shì)與PPARγmRNA相同，說明日糧能量和蛋白水平可能通過作用于PPARγ來調(diào)控FABP4 mRNA的表達(dá)。尾部脂肪和腎周脂肪的研究結(jié)果均顯示，PPARγ和FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量均呈先升高后降低的趨勢(shì)，在最接近標(biāo)準(zhǔn)日糧的II組達(dá)到最高值，說明能量蛋白的過高或過低都可能會(huì)造成機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝異常，從而降低脂肪沉積的速率。

P.A.Lopes等[16]在對(duì)日糧不同蛋白水平下瘦肉型和脂肪型豬的脂肪沉積研究中發(fā)現(xiàn)，豬的皮下脂肪沉積很大程度上取決于豬的基因型，而并非日糧蛋白水平，在日糧蛋白減小的情況下，皮下脂肪中PPARγ和FABP4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量差異不顯著。本研究結(jié)果表明，不同生長(zhǎng)階段，PPARγ和FABP4 mRNA在灘羊皮下脂肪中相對(duì)表達(dá)量差異不顯著，說明營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)灘羊皮下脂肪中PPARγ和FABP4 mRNA的表達(dá)影響較小。皮下脂肪屬于淺層脂肪組織，相較于腎周脂肪(深層脂肪)沉積較早。可以認(rèn)為動(dòng)物的體脂沉積先在皮下脂肪中沉積飽和，之后過多的能量蛋白轉(zhuǎn)換為脂肪沉積于動(dòng)物腹部、內(nèi)臟和肌間。張小麗[17]在對(duì)豬背部深層脂肪組織和淺層脂肪組織的研究中發(fā)現(xiàn)，與深層脂肪相比，淺層脂肪較致密，脂肪細(xì)胞直徑長(zhǎng)、體積大。呂剛[18]研究發(fā)現(xiàn)，營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)階段對(duì)肉鴨腹脂的影響高于皮下脂肪。這說明深層和淺層脂肪組織在代謝活動(dòng)中是存在明顯差異的，所以本試驗(yàn)PPARγ和FABP4 mRNA在皮下脂肪與腎周脂肪中表達(dá)規(guī)律不同。而尾脂PPARγ和FABP4 mRNA的表達(dá)在不同能量和蛋白水平間存在差異，且受生長(zhǎng)階段、能量和蛋白互作的影響，說明尾脂具有可調(diào)控性，因此通過營(yíng)養(yǎng)調(diào)控灘羊尾脂沉積是個(gè)潛在措施，具體機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

日糧能量和蛋白水平對(duì)灘羊尾部脂肪和腎周脂肪中PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)有顯著影響，對(duì)皮下脂肪中PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)無顯著影響。日糧能量和蛋白水平對(duì)灘羊深層脂肪組織(腎周脂肪)中PPARγ和FABP4 mRNA表達(dá)的影響大于淺層脂肪組織(皮下脂肪)，對(duì)尾部脂肪組織中PPARγ和FABP4 mRNA的表達(dá)有影響。

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(編輯 郭云雁)

Effects of Diet Energy and Protein Levels on the mRNA Expression ofPPARγandFABP4 in Adipose Tissues of Tan Sheep

WANG Xiao-fang, ZENG Jie, TIAN Chong-qi, WANG Xiao-long,YANG Yu-xin, CHEN Yu-lin，ZHANG En-ping*

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,NorthwestA&FUniversity,Yangling712100,China)

The objective of this study was to research the effects of diet energy and protein levels on the mRNA expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ(PPARγ) and fatty acid binding protein 4(FABP4) in the adipose tissues of Tan sheep. A total of 112(56♂,56♀) healthy Tan sheep with similar body weight were selected and allocated randomly to 4 groups(4 replicates in each group, and 7 sheep in each replicate). 3 stages(22-28, 29-35, 36-40 kg) was classified, and standard diets for each stage were designed according to body weight and expected daily gain in sheep feeding standard of NY/T(816-2004), 4 diets with energy and protein levels of 0.84×Standard(group I), 0.96×Standard(group II), 1.08×Standard(group III), 1.20×Standard(group IV) were assigned to feed sheep in each group, respectively. At the end of each stage, one sheep from each replicate was slaughtered, and samples of tail fat, perirenal fat and subcutaneous fat were collected for analyzing the mRNA expression ofPPARγandFABP4 by Real-time quantitative PCR. The results showed as follows: In tail fat,PPARγandFABP4 mRNA expression levels was significantly higher in group II than other groups at the end of stage 22-28 and 36-40 kg(P<0.05);FABP4 mRNA expression levels was highest in group II, and lowest in group IV at the end of stage 29-35 kg(P<0.05). In perirenal fat,PPARγmRNA expression levels was significnatly higher in group II, and significantly lower in group IV compared with group III at the end of 3 stages(P<0.05).FABP4 mRNA expression levels was higher in group II and III at the end of stage 22-28 kg(P<0.05);FABP4 mRNA expression levels was higher in group II compared with group IV at the end of stage 29-35 kg(P<0.05);FABP4 mRNA expression levels was higher in group I and II at the end of stage 36-40 kg(P<0.05). In subcutaneous fat, there was no significant difference between different groups at the end of 3 stages(P>0.05). These results indicated that the effect of diet energy and protein levels onPPARγandFABP4 mRNA expression was greater in deep fat tissue(perirenal fat) than that in superficial fat tissue(subcutaneous fat) in Tan sheep. The diets with different energy and protein levels had an effect onPPARγandFABP4 mRNA expression of tail fat in Tan sheep.

Tan sheep; energy and protein levels; adipose tissues;PPARγ;FABP4

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.11.014

2016-01-27

國(guó)家自然科學(xué)基金(31072060)；國(guó)家絨毛用羊產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-40-13)

王小芳(1991-)，女，陜西渭南人，碩士生，主要從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)研究，E-mail:15291849429@163.com

*通信作者：張恩平，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)研究，E-mail:zep126@126.com

S826;S816.4

A

0366-6964(2016)11-2266-08