張 暉，張 偉，郭慶明，蕭 偉#（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇連云港 222001）

光纖藥物溶出實(shí)時(shí)測(cè)定儀結(jié)合f2法評(píng)價(jià)阿折地平片自制制劑與原研制劑溶出曲線的相似性

張 暉1，2＊，張 偉1，2，郭慶明1，2，蕭 偉1，2#（1.江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇連云港 222001；2.中藥制藥過(guò)程新技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇連云港 222001）

目的：評(píng)價(jià)阿折地平片自制制劑與原研制劑溶出曲線的相似性，為其質(zhì)量控制和臨床使用提供參考。方法：采用槳法，轉(zhuǎn)速為50 r/min，分別以500 ml的pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液、pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水為溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，用光纖藥物溶出實(shí)時(shí)測(cè)定儀測(cè)定阿折地平片自制制劑與原研制劑中主成分在不同時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度，并與紫外-可見分光光度法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，進(jìn)而繪制溶出曲線，采用相似因子（f2）法評(píng)價(jià)二者溶出曲線的相似性。結(jié)果：光纖藥物溶出實(shí)時(shí)測(cè)定儀測(cè)定的累積溶出度結(jié)果與紫外-可見分光光度法測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異。阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質(zhì)中溶出曲線的f2均＞50，說(shuō)明二者溶出曲線具有相似性，但在后3種溶出介質(zhì)中自制制劑較原研制劑溶出度略低。結(jié)論：采用光纖藥物溶出實(shí)時(shí)測(cè)定儀能夠準(zhǔn)確、方便地提供藥物的實(shí)時(shí)溶出度數(shù)據(jù)，反映藥物的動(dòng)態(tài)溶出過(guò)程，為全面考察藥物的內(nèi)在質(zhì)量提供有力的檢測(cè)手段。而阿折地平片自制制劑的處方和工藝仍有待進(jìn)一步研究。

阿折地平片；光纖藥物溶出實(shí)時(shí)測(cè)定儀；溶出曲線；相似因子法；評(píng)價(jià)

阿折地平為新一代二氫吡啶類鈣離子阻滯藥，由日本Sankyo公司與Ube公司聯(lián)合開發(fā)成功并于2003年首次在日本上市，商品名為Calblock?。該藥可通過(guò)抑制鈣離子內(nèi)流使外周血管和冠脈血管擴(kuò)張，臨床用于輕度及中度高血壓的治療。其作為一種長(zhǎng)效抗高血壓藥物，克服了其他一些抗高血壓藥物如硝苯地平和尼卡地平等起效過(guò)快、效力不持久的缺點(diǎn)，能擴(kuò)張血管，降低外周血管和冠脈血管阻力，增加冠狀竇血流，改善心臟和肺的血流動(dòng)力學(xué)。該藥對(duì)輕度或中等癥狀的原發(fā)性高血壓以及重度高血壓的降壓作用均較好[1]。

對(duì)于口服固體制劑，其體外溶出度試驗(yàn)和溶出曲線考察不僅可預(yù)測(cè)藥物體內(nèi)生物利用度，還可用于：（1）指導(dǎo)新制劑開發(fā)；（2）評(píng)價(jià)制劑批間質(zhì)量的一致性；（3）當(dāng)制劑生產(chǎn)過(guò)程中某些因素發(fā)生變化，如處方、生產(chǎn)工藝、生產(chǎn)場(chǎng)所變更或生產(chǎn)工藝放大后，確保其質(zhì)量和療效的一致性[2]。溶出曲線相似性的評(píng)價(jià)方法有多種，自1999年美國(guó)食品與藥品管理局（FDA）推薦采用相似因子（f2）法[3]以來(lái)，該法己被普遍采用。本研究參照《日本藥品品質(zhì)再評(píng)價(jià)工程》[4]，并參考國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）發(fā)布的《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[5]，選用模擬人體消化道內(nèi)體液的4種溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，并采用光纖藥物溶出實(shí)時(shí)測(cè)定儀（Fiber-optic dissolution test，F(xiàn)ODT）測(cè)定阿折地平片自制制劑與原研制劑中主成分在不同時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度，同時(shí)與阿折地平片自擬標(biāo)準(zhǔn)中溶出度測(cè)定方法紫外-可見分光光度法（UV）測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，進(jìn)而繪制溶出曲線，采用f2法評(píng)價(jià)二者溶出曲線的相似性，旨在為自制制劑質(zhì)量控制和臨床使用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

FODT-601型FODT、FAVD-25型智能真空脫氣儀（上海富科思分析儀器有限公司）；UV-2401PC型UV計(jì)（日本島津公司）；XP6型電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；PB-10型pH計(jì)（德國(guó)賽多利斯公司）；KQ5200V型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司，功率：200 W，頻率：40 kHz）。

1.2 藥品與試劑

阿折地平片（自制制劑，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：131001、131002、131003，規(guī)格：8 mg；原研制劑，日本第一三共株式會(huì)社，批號(hào)：GHA2014，規(guī)格：8 mg）；阿折地平對(duì)照品（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：130701，純度：99.7%）；所用試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取阿折地平對(duì)照品20 mg，置于50 ml量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，量取2 ml，置于50 ml量瓶中，用pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液稀釋至刻度，制成每1 ml約含16μg阿折地平的對(duì)照品溶液（以pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水制備的對(duì)照品溶液均有沉淀析出，故不予采用）。

2.1.2 空白溶液 按自制制劑處方稱取輔料適量（約22.4 mg），置于100 ml量瓶中，加pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液超聲處理5 min，溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為空白溶液。

2.1.3 溶出介質(zhì) pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液（a）——取氯化鈉2.0 g，加水適量使溶解，加鹽酸7 ml，用水稀釋至1 000 ml，搖勻，即得；pH4.0乙酸鹽緩沖液（b）——取乙酸鈉1.22 g，加2 mol/L乙酸溶液（取120 g冰乙酸加水稀釋至1 000 ml，搖勻，即得）20.5 ml，用水溶解并稀釋至1 000 ml，搖勻，即得；pH6.8磷酸鹽緩沖液（c）——取磷酸二氫鉀1.7 g和無(wú)水磷酸氫二鈉1.775 g，加水溶解并稀釋至1 000 ml，搖勻，即得；水（d）——純化水。

2.2 FODT測(cè)定條件的確定

取“2.1”項(xiàng)下阿折地平對(duì)照品溶液（16μg/ml）適量，在FODT上掃描吸收光譜。結(jié)果顯示，在269 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選用269 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，并選擇550 nm為參比波長(zhǎng)，進(jìn)行雙波長(zhǎng)空白校正。根據(jù)Lamber-Beer定律，當(dāng)光程為1.0 cm（探頭規(guī)格為5 mm）時(shí)，阿折地平在雙波長(zhǎng)下吸光度的差值與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系。故確定FODT的測(cè)定條件為：測(cè)定波長(zhǎng)269 nm，參比波長(zhǎng)550 nm，探頭規(guī)格5.0 mm，測(cè)定光程1.0 cm，取樣時(shí)間間隔30 s。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密稱取阿折地平對(duì)照品20.08 mg，置于50 ml量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1、2、3、4、8 ml，置于100 ml量瓶中，加pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，制得質(zhì)量濃度分別為4.016、8.032、12.048、16.064、32.128μg/ml的系列對(duì)照品溶液。使用FODT按“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定吸光度（6個(gè)通道），以質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、雙波長(zhǎng)吸光度的差值ΔA（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程見表1。

由表1可以看出，6個(gè)通道測(cè)定結(jié)果均一性良好，阿折地平檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為4.016～32.128μg/ml。

表1 6個(gè)通道的回歸方程Tab 1 Regression equations of 6 pathways

2.3.2 精密度試驗(yàn) 將FODT的6個(gè)探頭分別浸入“2.3.1”項(xiàng)下的低、中、高3種質(zhì)量濃度（8.032、12.048、16.064μg/ml）的對(duì)照品溶液中，按“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算RSD。結(jié)果，阿折地平6個(gè)通道ΔA的RSD＝0.86%～1.63%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.3 回收率試驗(yàn) 根據(jù)處方比例，分別按標(biāo)示量的50%、80%、100%精密稱取對(duì)照品（4、6.4、8 mg），輔料按處方量的100%稱取，每個(gè)水平各3份，按照2015年版《中國(guó)藥典》（四部）0931“溶出度與釋放度測(cè)定法”項(xiàng)下的第二法（槳法）[6]，以pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液為溶出介質(zhì)，介質(zhì)體積500 ml，轉(zhuǎn)速50 r/min，溫度（37.0±0.5）℃，依法操作，經(jīng)60 min，在FODT中按“2.2”項(xiàng)下條件測(cè)定吸光度并計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

2.4 溶出度測(cè)定及溶出曲線繪制

采用2015年版《中國(guó)藥典》（四部）0931“溶出度與釋放度測(cè)定法”項(xiàng)下的第二法（槳法）[6]，轉(zhuǎn)速為50 r/min，分別將500 ml脫氣后的4種溶出介質(zhì)（pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液、pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水）加入各溶出杯內(nèi)，待溶出介質(zhì)溫度恒定在（37.0±0.5）℃時(shí)，開始溶出度試驗(yàn)。將FODT光纖探頭定位于杯中標(biāo)準(zhǔn)的取樣位置，打開FODT實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，首先掃描空白溶出介質(zhì)檢測(cè)探頭有無(wú)異常情況，若無(wú)異常情況，分別將3批自制制劑和1批原研制劑樣品（每批測(cè)12片）投入溶出杯中，按“2.2”項(xiàng)下測(cè)定條件，監(jiān)測(cè)時(shí)間為60 min，由計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)樣品的溶出過(guò)程獲得溶出曲線。與此同時(shí)，選擇1批自制制劑（批號(hào)：131001）和原研制劑（批號(hào)：GHA2014），于10、20、30、45、60 min時(shí)分別取樣5 ml（及時(shí)補(bǔ)充相同體積的空白溶出介質(zhì)），濾過(guò)，棄去初濾液，以UV計(jì)在269 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度。阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質(zhì)中的平均累積溶出度測(cè)定結(jié)果見表3，溶出曲線見圖1。

由圖1可知，在pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液中，在10 min時(shí)自制制劑藥物累積溶出度較原研制劑稍高；到20 min時(shí)兩種制劑藥物累積溶出度均＞75%，到60 min時(shí)兩種制劑藥物累積溶出度均＞90%。而在pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水介質(zhì)中，10～20 min時(shí)兩種制劑藥物溶出接近飽和，60 min時(shí)兩種制劑藥物累積溶出度均＜50%，原研制劑略高于自制制劑。

表3 阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質(zhì)中的平均累積溶出度（n＝12）Tab 3 Cumulative dissolution of the self-prepared and original preparations in the different dissolution media（n＝12）

圖1 阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質(zhì)中的溶出曲線（n＝12）A.以pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液為介質(zhì)；B.以pH4.0乙酸鹽緩沖液為介質(zhì)；C.以pH6.8磷酸鹽緩沖液為介質(zhì)；D.以水為介質(zhì)Fig 1 Dissolution curves of the self-prepared and original preparations in the different dissolution media（n＝12）A.pH1.2 HCL-NaCL as medium；B.pH4.0 acetate buffer as medium；C. pH6.8 phosphate buffer as medium；D.water as medium

2.5 溶出曲線的相似性評(píng)價(jià)

采用美國(guó)FDA推薦的f2法評(píng)價(jià)口服固體制劑體外溶出曲線是否具有相似性。f2計(jì)算公式如下：

式中，n為取樣時(shí)間點(diǎn)數(shù)；Rt和Tt分別為參比制劑（原研制劑）和受試制劑（自制制劑）第t時(shí)間點(diǎn)的平均累積溶出度。若f2≥50，則認(rèn)為兩種制劑的溶出曲線相似；若f2＜50，則認(rèn)為兩種制劑的溶出曲線不相似。經(jīng)計(jì)算，阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質(zhì)中溶出曲線的f2見表4。

由表4可知，3批自制制劑與原研制劑樣品在4種溶出介質(zhì)中溶出曲線的f2均＞50，說(shuō)明二者溶出曲線具有相似性。

3 討論

3.1 FODT法與UV法的比較

表4 阿折地平片自制制劑與原研制劑在各溶出介質(zhì)中溶出曲線的f2Tab 4 f2similar factor of the self-prepared and original preparations in the different dissolution media

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)ODT法與UV法溶出度測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異，而與傳統(tǒng)UV法相比，F(xiàn)ODT法優(yōu)勢(shì)明顯：UV法需在規(guī)定的時(shí)間點(diǎn)抽取一定體積的樣品溶液，必須經(jīng)濾過(guò)、稀釋后測(cè)定吸光度，經(jīng)計(jì)算得到結(jié)果，過(guò)程繁雜，容易引入人為操作誤差；FODT法則通過(guò)選擇不同規(guī)格的光纖探頭和參比波長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)藥物的連續(xù)、原位、在線、實(shí)時(shí)測(cè)定，避免了稀釋、濾過(guò)等操作對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。儀器操作通過(guò)相關(guān)控制軟件的圖形用戶界面進(jìn)行，測(cè)定的時(shí)間間隔以秒計(jì)算，取樣時(shí)間非常精確，同時(shí)其可以很方便地計(jì)算出評(píng)價(jià)溶出曲線相似性的f2，極大地提高了工作效率。近年的研究和大量的應(yīng)用實(shí)踐證明[7-9]，F(xiàn)ODT性能穩(wěn)定、可靠，能實(shí)時(shí)、準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)口服固體制劑的動(dòng)態(tài)溶出過(guò)程，是評(píng)價(jià)藥物體外溶出行為的有力手段。

3.2 溶出介質(zhì)的影響

由不同溶出介質(zhì)中溶出曲線可知，隨著介質(zhì)pH值增大制劑中藥物累積溶出度減少，說(shuō)明阿折地平的溶解度呈pH值依賴性，易溶于酸性介質(zhì)。以pH1.2鹽酸-氯化鈉緩沖液為溶出介質(zhì)時(shí)，自制制劑和原研制劑在60 min內(nèi)均全部溶出；而以pH4.0乙酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水為溶出介質(zhì)時(shí)，自制制劑較原研制劑溶出度略低，可能與原料的粒度、輔料類型、制劑工藝、檢測(cè)方法等因素有很大關(guān)系。通過(guò)上述試驗(yàn)表明自制制劑的處方、工藝及檢測(cè)方法等仍有待進(jìn)一步研究。

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（編輯：周 箐）

Evaluation of the Similarity of Dissolution Curves in vitro of Azelnidipine Tablet between the Self-prepared and Original Preparations by Fiber-optic Dissolution Tester and f2

ZHANG Hui1，2，ZHANG Wei1，2，GUO Qingming1，2，XIAO Wei1，2（1.Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.，Ltd.，Jiangsu Lianyungang 222001，China；2.State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process，Jiangsu Lianyungang 222001，China）

OBJECTIVE：To evaluate the similarity of dissolution curves in vitro of Azelnidipine tablet between the self-prepared and original preparations，and provide reference for its quality control and clinical application.METHODS：Paddle method was used at rate of 50 r/min，and dissolution test was conducted with media of 500 ml pH1.2 Hydrochloric acid sodium chloride solution，pH4.0 Acetate buffer solution，pH6.8 Phosphate buffer solution，fiber-optic dissolution tester was used to detect the cumulative dissolution the main ingredients in Azelnidipine tablet between the self-prepared and original preparations at different time points，and compared with the results of UV-visible spectrophotometry，then dissolution curve was plotted，f2was used to evaluate the similarity of their similarity.RESULTS：There was no obvious difference in the results between fiber optic drug dissolution real-time detector and UV-visible spectrophotometry.f2Similarity factors were more than 50 and the dissolution curves of the self-prepared and original preparations were similar in the different dissolution media，while the dissolution was relatively low in the last 3 media.CONCLUSIONS：Fiber-optic dissolution tester can accurately and conveniently provide the real-time dissolution and reflect its dynamic dissolution process，which provides an effective way to investigate the inner quality of drug completely.However，the formulation and technology of the self-prepared preparation of Azelnidipine tablet need to be further studied.

Azelnidipine tablet；Fiber-optic dissolution tester；Dissolution curve；f2；Evaluation

R927

A

1001-0408（2016）33-4739-04

2015-12-03

2016-10-08）

＊工程師。研究方向：新藥研發(fā)。電話：0518-81152332。E-mail：huizhang_96@163.com

#通信作者：研究員級(jí)高級(jí)工程師，博士。研究方向：中藥新藥研發(fā)。電話：0518-81152367。E-mail：kanionlunwen@163.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.44