不同炮制法對大紅袍橙皮苷含量的影響※

馬 琳 鐘凌云 任瑤瑤 祝 婧 于 歡 葉喜德*

（1 江西省撫州市婦幼保健院藥劑科，撫州 344000；2江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌 330006)

不同炮制法對大紅袍橙皮苷含量的影響※

馬 琳1鐘凌云2任瑤瑤2祝 婧2于 歡2葉喜德2*

（1 江西省撫州市婦幼保健院藥劑科，撫州 344000；2江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南昌 330006)

目的 探討不同炮制方法對大紅袍中橙皮苷含量變化的影響。方法 依法對大紅袍采用蒸制、灶心土炒、炒炭、蜜炙和麩炒等不同炮制方法，以制備不同炮制品，采用HPLC法，比較大紅袍不同炮制品中所含橙皮苷之間的變化差異。結(jié)果與生品相比，蒸制品中橙皮苷含量變化差別不大；與其他炮制品相比，蒸制品中橙皮苷含量相對較高。結(jié)論 蒸制法對大紅袍中橙皮苷含量影響較小。

大紅袍；炮制方法；橙皮苷

陳皮，原名橘皮，藥材分為“陳皮”（為福橘、大紅袍 (江西產(chǎn))和溫洲密柑等的干燥成熟果皮） 和“廣陳皮”（為茶枝柑和行柑的干燥成熟果皮）[1]。大紅袍為蕓香科植物橘 (Citrus reticulata Blanco)的栽培變種植物，又名“三湖紅桔”，分布于江西省新干縣三湖鎮(zhèn)，味苦、辛，性溫，歸肺、脾經(jīng)。具理氣健脾、燥濕化痰之功[1]?，F(xiàn)代研究證實，陳皮具有升壓[2]、抗血小板聚集[3]、抗氧化[4]、抗衰老[5]、強心[6]、抗休克[7]、抗過敏[8]、抗菌[9]、抗腫瘤等多種作用[10]。主含橙皮苷、川陳皮素等多種成分[11]。

陳皮炮制的歷史由來已久，常見有麩炒、蜜炙、灶心土炒、炒炭和蒸制法等等[12]。由于不同炮制方法對陳皮藥效影響較大。而橙皮苷為陳皮主要活性成分，并為評價其重要指標之一[13]。顯然，不同的炮制方法勢必影響到該成分的含量。雖然有文獻考察了不同炮制方法對橙皮苷含量影響，但其原藥材的來源為廣陳皮[14]。對于不同炮制方法對大紅袍中主要成分橙皮苷含量的影響，目前未見文獻研究報道。大紅袍作為藥材使用，已經(jīng)有兩千多年歷史[15]，自宋朝始，三湖紅桔被列為貢品，乾隆皇帝親賜“大紅袍”而得名[16]。大紅袍雖然臨床療效確切[17]，但現(xiàn)代文獻對其研究報道卻甚少。由于藥材成分含量受地區(qū)、炮制加工等多種因素影響。因此，本研究選取大紅袍，采取用炮制方法，來考察對橙皮苷含量變化的影響，不僅對于臨床安全用藥提供參考，也為深入研究大紅袍提供基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Ultimate3000 HPLC色譜儀 （型號為LPG-3400SD），AG245電子分析天平，DIGITAL紅外測溫儀，電熱恒溫干燥箱（上海滬粵明科學(xué)儀器公司），數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司），KQ-5200型超聲波清洗器 （200 W 昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 橙皮苷對照品 (批號150123)，甲醇 (色譜純)(美國 Merck公司)，乙腈 (色譜純) (美國Merck公司)，重蒸水自制，其他試劑為分析純。

大紅袍購自江西新干縣三湖鎮(zhèn)藥材市場，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)資源教研室鑒定為大紅袍。

2 實驗方法

2.1 藥材的炮制 依法制備大紅袍六種不同炮制品。

（1）生品。取原藥材，洗凈，切絲，晾干后備用。

（2）麩炒品。稱取生品10 g，麥麩按10%放入炒置鍋內(nèi)，待麥麩炒至冒白煙時，將生品放入，炒至冒煙，陳皮表面呈焦黃色，迅速出鍋，攤開放晾，冷卻后，篩去麥麩，得麩炒品[18]。

（3）炒炭品。稱取生品10 g，待鍋加熱后，把預(yù)先準備好的生品放入鍋內(nèi)，炒至陳皮外觀呈炭黑色，噴淋少許清水，出鍋，晾干，即得[19]。

（4）蜜炙品。稱取生品10 g，蜂蜜按18.75%放進鍋內(nèi)，先用文火將蜂蜜煉成老蜜，再將生品放入蜂蜜里面，炒至表面呈焦黃色，出鍋，攤開晾冷，即得。

（5）蒸制品。取陳皮絲10 g，加入20 ml清水浸泡2小時后，入鍋蒸制30 min，出鍋置于烘箱烘干即可[20]。

（6）灶心土炒制品。先將5 g灶心土放進鍋里炒松后，然后放入10 g陳皮絲翻炒至掛土，出鍋后篩去土，晾涼即得。

以上幾種陳皮的炮制品制備完成后，用粉碎機將大紅袍6種炮制品，分別進行粉碎，過60目篩后，備用。

2.2 橙皮苷含量的測定

2.2.1 對照品的制備 精密稱取橙皮苷對照品0.5 mg置于50 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度后搖勻，即為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取經(jīng)粉碎后的生品、麩炒品、炒炭品、蜜炙品、蒸制品各0.50 g，共6份。分別加入40 mL石油醚，放入65℃的水浴鍋中加熱，回流提取2~3 h，將石油醚棄去，再加入40 mL甲醇，水浴回流2 h（65℃），過濾后重新加入40 mL甲醇，繼續(xù)回流1 h（65℃）。冷卻后過濾，濾液置于50 mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻。

2.2.3 色譜條件 Diamonsil C18色譜柱 (200×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）為流動相，檢測波長283 nm，柱溫25℃。理論塔板數(shù)以橙皮苷計算不低于2000。色譜圖見圖1~7。

圖1 橙皮苷對照品

圖2 大紅袍生品

圖3 麩炒品

圖4 炒炭品

圖5 蜜炙品

圖6 蒸制品

圖7 土炒品

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取橙皮苷母液0.5，1，1.5，2，2.5 μL置于1 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度線后搖勻，照上述色譜條件，進行分析，測定峰面積；以峰面積為縱坐標（y），進樣量為橫坐標（x）繪制校準曲線，計算回歸方程y=700623X-76787，r2=0.9991。結(jié)果表明，橙皮苷在1.5~2.5 μg范圍內(nèi)具良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度實驗 精密吸取2.2.1項下對照品溶液，在上述色譜條件下，連續(xù)進樣6次，每次5 μL，求得橙皮苷峰面積分值的RSD為0.22%，表明儀器的精密度良好。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗 稱取同一批次蒸制陳皮樣品粉末5份，每份0.5 g。精密稱定后，按2.2.2項下吸取供試品溶液，取2 mL至100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度后搖勻，照上述色譜條件下，連續(xù)進樣6次，測定峰面積積分值，計算相對偏差，得橙皮苷的RSD為1.02%，表明重現(xiàn)性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性實驗 照2.2.2項下，精密吸取蒸制品供試品溶液1 mL至50 mL容量瓶，加甲醇定容至刻度后搖勻，分別從靜置2，4，6，8，10，12，18，24 h后，吸取供試品溶液10 μL，在上述色譜條件下，分別進行測定，并記錄峰面積，計算相對偏差。測定結(jié)果橙皮苷的RSD為0.15%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 回收率考察 取蒸制陳皮樣品粉末5份，每份1.0 g。精密稱定后，分別加入橙皮苷對照品15，15，20，30，30 mg，按照2.2.2項下配置，得到蒸制供試品溶液5份，分別取1 mL至50 mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻后靜置，在上述色譜條件下，吸取供試品溶液10 μL，計算回收率，結(jié)果見表1。測定橙皮苷的加樣回收率在99.75～99.88%之間，RSD為1.46 （n=5）。

表1 加樣回收率結(jié)果 (n=5)

2.3.6 樣品測定 取大紅袍生品及其他5種炮制品，按2.2.2項下制備供試品溶液，在上述色譜條件下，吸取供試品溶液10 μL進行分析，比較不同炮制品橙皮苷含量變化差異，結(jié)果見表2：

表2 樣品測定結(jié)果 (n=6)

3 結(jié)論

由此可見，陳皮中橙皮苷含量在炮制后均發(fā)生了變化。與生品相比，其他各炮制品中橙皮苷的含量均有下降，但蒸制陳皮下降較少，提示蒸法炮制陳皮對橙皮苷含量變化影響較小。因此，陳皮在臨床應(yīng)用中，常采用凈制，切絲，陰干的炮制方法。

4 討論

從原藥材來源來說，大紅袍為江西道地藥材，而非廣陳皮，截止目前，未見以大紅袍為原藥材，開展不同炮制方法對其橙皮苷含量變化的影響研究。可見，本研究新穎性明顯。依照實驗結(jié)果，本研究中所選用的不同炮制方法，均不同程度地對橙皮苷含量產(chǎn)生了影響。說明，大紅袍中橙皮苷含量變化受加工炮制影響較大，這對于指導(dǎo)陳皮臨床安全用藥意義重大。由于所選用的炮制方法，均涉及到加熱這一環(huán)節(jié)，說明大紅袍在加熱條件下，成分含量影響較大。從研究結(jié)果來看，蒸制品中橙皮苷含量影響最小，但文獻研究報道[21]，蜜炙法對廣陳皮中橙皮苷含量變化不大，說明橙皮苷含量變化，除與炮制加工方法影響外，還與產(chǎn)地有關(guān)。由于藥材含量變化，還涉及到諸如采收時間、前期加工處理、藥材品種等多種因素的影響。

因此，要想全面了解大紅袍，需進一步深入研究。

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Effects of Different Processing Methods on the Content of Hesperidin in Dahongpao

MA Lin1,ZHONG Linyun2,REN Yaoyao2,ZHU Jing2,YU Huan2,YE Xide2*
(1.Department of Pharmacy,Fuzhou City Maternity and Child Care Hospital,Jiangxi Province,Fuzhou 344000,China; 2.College of Pharmacy,Jiangxi University of Traditonal Chinese Medicine,Nanchang 330004,China)

Objective To investigate the effect of different processing methods on the content of hesperidin in Dahongpao.Methods Dahongpao was prepared for different processed products by these ways including steam,stoves subsoil fry,charcoal,and honey and stir fried with bran etc.different processing methods.The changs were observed from these processed products contained the differences of contents on hesperidin by HPLC.Results Comparing with the raw materials,the steamed one changed little difference while it had a high content of hesperidin by contrast with other processed products relatively.Conclusion The effect of steaming method was small on the content of hesperidin in Dahongpao.

Dahongpao;processing methods;hesperidin

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.23.062

1672-2779（2016）-23-0135-03

李海燕 本文校對：龔千鋒

2016-07-19）

江西中醫(yī)藥大學(xué)博士啟動基金（No：2015BS014）；江西省高等學(xué)校教學(xué)改革研究省級課題 （No：JXJG14-12-19）；撫州市科技計劃項目（No：2015-13）

*通訊作者：552376722@qq.com